CYP2C19基因多态性与阿那曲唑治疗绝经后乳腺癌患者疗效的相关性

侯倩倩　李玲玲　王大庆　杨虎　谷巍

河北省衡水市哈励逊国际和平医院肿瘤内科（河北衡水 053000）

雌激素水平与乳腺癌的发生发展密切相关［1］，阿那曲唑应用于绝经后乳腺癌患者的治疗中具有良好的临床疗效［2］。已有研究显示CYP2C19基因多态性与多种疾病的临床疗效具有相关性［3］，但目前关于CYP2C19基因多态性与阿那曲唑对治疗绝经后乳腺癌患者的疗效相关性研究报道较少。本文研究CYP2C19*2基因多态性与阿那曲唑治疗绝经后乳腺癌患者的临床疗效的相关性，现将研究结果报告如下。

1　对象与方法

1.1研究对象选择2011年3月至2012年5月期间本院收治的113例绝经后乳腺癌患者，平均年龄（56.2±3.54）岁。入选标准：女性绝经标准以NCCN2012⁃Versionl为准；均经空芯针穿刺病理活检证实为乳腺癌。另选取同期来我院进行体检的健康人员89例作为健康志愿者组。两组患者的临床资料，见表1，所有受试对象均签订知情同意书。

1.2方法

1.2.1CYP2C19*2基因多态性检测方法检测CYP2C19*2基因多态性采用聚合酶链限制性片段长度多态性（PCR⁃RFLP）法进行基因型检测，步骤分为DNA提取、引物设计及扩增、酶切、电泳。空腹采集外周静脉血4 mL后，经EDTA⁃K2抗凝，DNA提取试剂盒为北京天根生化科技有限公司提供，提取后于-20℃保存。

1.2.2治疗方法所有患者口服阿那曲唑（AstraZen⁃eca Pharmaceuticals LP生产，国药准字J20100107）1次/d，1 mg/次，每4周为1个疗程，连续服用3个疗程。所有参试者在研究开始前检测血清相关指标，每个疗程重复测定相关指标及肿瘤大小，认真做好记录。

1.2.3判定方法依据WHO规定，疗效分为CR（完全缓解）、PR（部分缓解）、SD（病变稳定）、PD（病变进展）。其中CR指基线病灶全部消失，PR指基础病灶长径总和缩小范围超过30%，SD指原来病灶的长径总和缩小未达30%或增加未达20%，PD指出现新病灶或原来病灶最大径之和增加超过20%。治疗的有效率（OR）等于完全缓解和部分缓解的病例共占全部病例的百分比。

1.2.4检测指标采用全自动生化分析仪（日立76002）检测患者清晨空腹血清中促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH），主要检测患者治疗前、治疗后第4周及第12周血清中的FSH、LH。

1.2.5随访113例乳腺癌患者均被随访，其中9例失访。随访截止时间为2017年4月1日，记录患者治疗后第3、6个月以及1年内出现的骨髓抑制、骨质疏松、肝功能损伤等情况。

1.3统计学方法采用专业统计软件SPSS 22.0进行数据分析处理。用均数±标准差表示计量资料。不同基因型组别间比较采用单因素方差分析或重复测量的方差分析。同一基因型组别内治疗前后比较采用LSD⁃t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。采用Kalplan⁃Meier法检测患者6年的生存率，经Log⁃Rank检验差异是否存在统计学意义。应用Cox比例风险回归模型对各研究组5年无病生存期DFS进行分析。

2　结果

2.1乳腺癌组和健康志愿者组临床基线资料比较乳腺癌组和健康志愿者组的临床基线资料：年龄、体质量、身高、BMI、高血压、糖尿病、高脂血症方面比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。见表1。

表1　乳腺癌组和健康志愿者组一般临床资料的比较Tab.1　Comparison of general clinical data between breast cancer group and healthy volunteers group　例（%）

2.2CYP2C19基因多态性检测结果紫外-可见分析结果显示：扩增CYP2C19*2位点，酶切所得的PCR产物位于321 bp处为突变型纯合子CYP2C19*2*2（AA型），突变性杂合子CYP2C19*1*2（GA型）为3条带，分别位于321 bp、212 bp以及109 bp处，野生型CYP2C19*1*1（GG型）为2条带，分别位于212 bp以及109 bp处。为了保证酶切的准确性，选取部分PCR扩增产物进行基因测序，结果与酶切一致。见图1。

2.3基因频率分布以及Hardy⁃Weinberg遗传性检测健康志愿者组与CYP2C19*2基因位点的A、G等位基因频率分布符合Hardy⁃Weinberg遗传平衡定律。绝经后健康志愿者组与绝经后乳腺癌组的CYP2C19*2基因的GA、AA基因型之间的差异以及G、A等位基因频率差异均具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.4不同基因型之间临床疗效的比较见表3。不同基因型之间治疗后的FSH、LH水平均比治疗前明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05），GG型患者治疗第12周后血清中FSH、LH均显著低于GA、AA型（P＜0.05）。与GA基因型和AA基因型比较，GG基因型治疗12周后，有效率明显提高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表5。

图1　CYP2C19*2基因扩增电泳图及基因多态性测序图谱Fig.1　CYP2C19*2 gene amplification electrophoresis map and gene polymorphism sequencing map

表2　绝经后乳腺癌组和健康志愿者组的CYP2C19*2基因型及等位基因分布比较Tab.2　Genotype and allele distribution of CYP2C19*2 in postmenopausal breast cancer and healthy volunteers例（%）

表3　不同基因型患者治疗后FSH、LH水平的比较Tab.3　Comparison of FSH and LH levels in patients with different genotypes after treatment　±s

表3　不同基因型患者治疗后FSH、LH水平的比较Tab.3　Comparison of FSH and LH levels in patients with different genotypes after treatment　±s

注：与GA型比较，*P＜0.05；与AA型比较，#P＜0.05

基因型GA AA GG F值P值FSH LH治疗前（IU/L）62.18±3.62 63.26±2.89 62.93±2.64 1.211 0.117治疗后第4周（IU/L）61.62±2.88 62.15±2.16 61.76±3.66 0.897 0.298治疗后第12周（IU/L）43.23±2.10 47.70±2.54 35.11±1.83*#12.345 0.000治疗前（IU/L）27.39±1.09 26.85±1.53 27.14±1.18 1.322 0.109治疗后第4周（IU/L）26.47±0.94 25.37±1.09 26.82±0.93 1.109 0.149治疗后第12周（IU/L）16.25±1.33 17.47±1.46 11.36±0.74*#13.653 0.000

表4　不同基因型患者治疗12周后临床疗效的比较Tab.4　Comparison of clinical efficacy of patients with different genotypes after 12 weeks of treatment 例（%）

2.4不同基因型患者治疗后不良反应的比较见表5。治疗后6个月、1年GG型骨质疏松发生率显著高于GA型、AA型（χ2=6.432、11.771、9.232、14.693，P＜ 0.05）。

2.5不同基因型患者与阿那曲唑治疗后生存率分析由不同基因型患者术后与阿那曲唑治疗生存率的比较可以看出，GA和AA基因型的无病生存率明显低于GG型，差异有显著性（Log Rank=5.922，P=0.015，图2A），GA和AA基因型的总生存率明显低于GG型，差异有显著性（Log Rank=6.453，P=0.005，图2B）。

表5　不同基因型患者治疗后不良反应情况的比较Tab.5　The adverse reactions of patients with different genotypes after treatment 例（%）

2.6影响绝经后乳腺癌患者临床治疗效果的相关因素分析见表6。阿那曲唑和CYP2C19基因多态性是影响绝经后乳腺癌患者临床疗效的独立相关因素（P＜0.05）。

3　讨论

图2　Kalplan⁃Meier法分析不同基因型患者生存情况Fig.2　Kalplan⁃Meier analysis of survival in patients with different genotypes

表6　影响绝经后乳腺癌患者临床疗效的相关因素分析Tab.6　Analysis of related factors affecting the clinical efficacy of postmenopausal breast cancer

阿那曲唑可降低患者血液中相关激素的水平，抑制乳腺癌细胞的增殖，促进癌细胞的凋亡，能有效抑制雄激素转化为雌激素，控制肿瘤复发和转移［4-5］。有研究认为阿那曲唑用于绝经后乳腺癌术前治疗有良好的近期疗效，可有效降低患者血液中雌激素水平［6］，本研究3组不同基因分型的患者治疗12周后血清FSH、LH水平与治疗前相比明显降低，差异有显著性，提示阿那曲唑和CYP2C19*2基因多态性均与绝经后乳腺癌患者的血清FSH、LH水平独立相关，说明二者均可影响绝经后乳腺癌患者的临床疗效。

关于乳腺癌术后无病生存率与CYP2C19基因型的关系研究，以往有研究认为乳腺癌患者术后5年生存率与CYP2C19基因型无关［7］。而本文结果显示GA、AA基因型的5年无病生存率明显低于GG基因型，与上述研究结果有差异。通过本研究发现，GA和AA型患者6年内患者的无肿瘤进展生存率以及总生存率均显著低于GG型，表明CYP2C19*2基因多态性与阿那曲唑治疗的敏感性有关，即表明GG型患者预后较好。需要指出的是，GG型患者经阿那曲唑治疗后FSH、LH均显著降低，但其治疗后骨质疏松发生率也明显增加，可能与GG型患者FSH、LH降低较GA、AA型患者更为明显有关。

综上所述，临床中有必要针对绝经后乳腺癌患者采用阿那曲唑治疗时进行CYP2C19*2基因多态性检测，该方法能为临床个体化药物治疗提供参考依据。

［1］许晔琼.基因多态性与乳腺癌发生发展关系的研究进展［J］.中国肿瘤，2012，21（9）：676⁃681.

［2］WANG N ，ZHOU R，WANG C，et al.⁃251 T/A polymorphism of the interleukin⁃8 gene and cancer risk：a HuGE review and meta⁃analysis based on 42 case⁃control studies［J］.Mol Biol Rep，2012，39（3）：2831⁃2841.

［3］SEIDMAN A D，CONLIN A K，BACH A，et al.Randomized phaseⅡtrial of weekly vs every 2 weeks vs every 3 weeks nanoparticle albumin⁃bound paclitaxel with bevacizumab as first⁃line chemotherapy for metastatic breast cancer［J］.Clin Breast Cancer，2013，13（4）：239⁃246.

［4］STIMPFLE F，KARATHANOS A，DROPPA M，et al.Impact of point⁃of⁃care testing for CYP2C19 on platelet inhibition in pa⁃tients with acute coronary syndrome and early dual antiplatelet therapy in the emergency setting［J］.Thromb Res，2014，134（1）：105⁃108.

［5］MARKIEWICZ A，WELNICKA⁃JASKIEWICZ M，SKOKOWS⁃KI J，et al.Prognostic significance of ESR1 amplification and ESR1PvuII，CYP2C19*2，UGT2B15*2polymorphismsin breast cancer patients［J］.PLoS One，2013，8（8）：e72219.

［6］MWINYI J，VOKINGER K，LETTER A，et al.Impact of vari⁃able CYP genotypes on breast cancer relapse inpatients undergo⁃ing adjuvant tamoxifen therapy［J］.Cancer Chemother Paharma⁃col，2014，73（6），1181⁃1188.

［7］CHAMNANPHON M，PECHATANAN K，SIRACHAINA N,et al.Association of CYP2D6 and CYP2C19 polymorphisms and sease⁃free survival of Thai postmenopausal breast cancer pa⁃tients who received adjuvant tamoxifen［J］.Pharmgenomics Pers Med，2013，6：37⁃48.