EB病毒抗体检测在鼻咽癌和传染性单核细胞增多症诊断中的应用

费秀云，徐元宏，李 涛

EB病毒属疱疹病毒γ亚科淋巴隐病毒属，其是一种能普遍感染人类且与多种疾病发病有密切关系的DNA病毒。约90%以上的鼻咽癌(nasopharyngenlcarcinoma,NPC)患者血清中有抗EB病毒抗体存在，EB病毒特异抗体可用于NPC的早期辅助诊断,通过检测血清中EB病毒特异抗体早期诊断NPC，是提高NPC患者存活率的一个重要手段[1-2]。在我国3～5岁儿童中，EB-VCA-IgM的阳性率达90%以上[3]，幼儿感染后多数无明显症状，或引起轻症咽炎和上呼吸道感染，儿童期发生原发感染，约50%个体发展为传染性单核细胞增多症[4]。该研究旨在探讨EBV-IgA、EBNA-IgG、EB-VCA-IgG、EB-VCA-IgM和EA-IgG 5项抗体检测在NPC、传染性单核细胞增多症以及其他疾病中的临床意义。

1 材料与方法

1.1一般资料分组标准收集2016年4月～2017年3月安徽医科大学第一附属医院住院及门诊患者535例，剔除5项抗体可疑病例，男309例，女226例；其中儿童406例，年龄1～14(4.91±3.40)岁，成年人129例，年龄15～78(43.51±15.56)岁。分组标准将535例患者结合临床病理诊断结果，分为NPC组(58例)和传染性单核细胞增多症组(24例)，剩下其他疾病患者按年龄又分为成人其他疾病组(71例)和儿童其他疾病组(382例)进行统计学分析。

1.2仪器与试剂EB病毒IgA抗体ELISA试剂盒由深圳康生保生物技术有限公司生产；EBNA-IgG、EB-VCA-IgG、EB-VCA-IgM、EA-IgG化学发光免疫分析法(CLIA)试剂盒由索灵诊断医疗设备有限公司生产；仪器采用LIAISON XL化学发光分析仪。所有试剂、质控品及校准品均在使用有效期内，所有检验项目、室内质控均在控。

1.3标本采集采集所有受试者清晨空腹静脉血3 ml,以3 500 r/min离心10 min，分离血清标本检测，采用ELISA测定患者EBV-IgA,CLIA测定EBNA-IgG、 EBVCA-IgG、EBVCA-IgM和EA-IgG。EBV-IgA阳性判定标准：A值≥0.1+阴性对照A值均值(阴性对照A值均值<0.05时以0.05计算，>0.10时应重新实验)EBNA-IgG≥20 U/ml判为阳性，5～20 U/ml判为可疑，<5 U/ml判为阴性；EBVCA-IgG≥20 U/ml判为阳性，<20 U/ml判为阴性；EBVCA-IgM≥40 U/ml判为阳性，20～40 U/ml判为可疑，<20 U/ml判为阴性；EA-IgG≥40 U/ml判为阳性，10～40 U/ml判为可疑，<10 U/ml判为阴性。

2 结果

2.15项抗体检测结果在各疾病中男女性别上除EBV-IgA在儿童其他疾病组中差异有统计学意义外(P=0.034)，在NPC，传染性单核细胞增多症和成人其他疾病组中差异均无统计学意义，见表1。

2.258例NPC患者和24例传染性单核细胞增多症患者EB病毒抗体谱的阳性模式比较NPCEB病毒抗体谱阳性模式以EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EA-IgG阳性数最多，占总阳性率的84.48%，而传染性单核细胞增多症以EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG阳性数相对较多，占总阳性率的54.16%，见表2、3。

2.3EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG对NPC和传染性单核细胞增多症的诊断效率比较单项检测5项抗体结果，EBNA-IgG和EBVCA-IgG诊断NPC的灵敏度都达到了100%，而特异度却较低，分别为11.3%和8.5%。EBVCA-IgM对NPC的特异度高达95.8%而灵敏度仅为1.7%。传染性单核细胞增多症中的EB-VCA-IgM单项检测的灵敏度、特异度、准确度和阴性预测值都达到90%以上，EA-IgG特异度和准确度达到94.5%和93.1%，灵敏度相对偏低仅有70.8%；见表4、5。

2.4EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG阳性率在各组中比较EBV不同类别抗体的比较，NPC组EBV-IgA、EBNA-IgG和EA-IgG阳性表达明显高于成人其他疾病组、传染性单核细胞增多症和儿童其他疾病组，差异有统计学意义(P<0.05)；NPC和成人其他疾病组EBVCA-IgG阳性表达差异无统计学意义，但均明显高于传染性单核细胞增多症和儿童其他疾病组，差异有统计学意义(P<0.05)；传染性单核细胞增多症组EBVCA-IgM阳性表达明显高于NPC、成人其他疾病组和儿童其他疾病组，差异有统计学意义(P<0.05)，而NPC、成人其他疾病组和儿童其他疾病组间差异无统计学意义，见表6。

表1 5项抗体检测结果在NPC和传染性单核细胞增多症中性别的比较

表2 58例NPC患者EB病毒抗体谱的阳性模式

表3 24例传染性单核细胞增多症患者EB病毒抗体谱的阳性模式

表4 EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG对NPC的诊断效率(%)

表5 EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG对传染性单核细胞增多症的诊断效率(%)

表6 比较各组EBV-IgA、EBNA-IgG、EBVCA-IgG、EBVCA-IgM、EA-IgG阳性率(%)

3 讨论

535例患者中58例被确诊为NPC，无1例儿童，24例被确诊为传染性单核细胞增多症，无1例成人，说明NPC和传染性单核细胞增多症的发病有年龄特征，不能以EB病毒感染来判断为NPC或传染性单核细胞增多症。不过现实中NPC发病与年龄也有一定的关系，好发年龄有两个高峰，第一个是16～25岁；第二个为45～54岁，集中为青年和中年[5-6]。本研究中58例患者被确诊为NPC，其中47例为男性患者，11例为女性，说明男性患者明显多于女性，这与Adham et al[7]研究结果相一致。

EB病毒是线性双链DNA病毒，基因组长172 kb，编码大约100个基因，其中重要的有VCA、EA和NA的基因。EB病毒有复制性感染和潜伏感染两种感染方式，复制性感染方式主要见于EB病毒感染性疾病如传染性单核细胞增多症，VCA-IgM抗体在早期出现，多于1～2个月后消失，VCA-IgG出现稍迟于前者，但可持续终生，EA-IgG抗体是近期感染或EB病毒活跃增殖的标志，于感染后3～4周达高峰，持续3～6个月。本研究传染性单核细胞增多症中VCA-IgM阳性率高达91.7%，EA-IgG阳性率也相对较高，表明传染性单核细胞增多症发病时患儿近期感染了EB病毒，病毒增殖活跃。而NPC中VCA-IgM阳性率却很低，仅有1.7%，与此同时，EBNA-IgG、EBVCA-IgG阳性率却高达100%，验证了NPC从EB病毒感染到发病有数年的潜伏期[8]。因为VCA-IgM于疾病早期出现，1～2个月后消失，所以NPC检测时VCA-IgM大多已转阴，而EBNA-IgG、EBVCA-IgG感染后可维持终生[9]，是既往感染的标志，故NPC检测中EBNA-IgG、EBVCA-IgG达到100%。成人其他疾病组EBNA-IgG和EBVCA-IgG也分别达到了88.7%和91.5%，说明有90%左右成年人曾感染过EB病毒，与我国其他地区检测结果一致[10]。就单项检测在传染性单核细胞增多症中的检测结果来看，本研究中化学发光法测定的EBV-VCA-IgM的灵敏度、特异度、准确度、阴性预测值均达到90%以上，适用于临床检测，可提高小儿传染性单核细胞增多症诊断水平，这与相关研究[11-12]结果一致。据国外Macsween et al[4]报道，儿童感染EBV约有50%发展为传染性单核细胞增多症，而本研究儿童患者中仅有24例确诊为传染性单核细胞增多症，可能与感染患儿临床表现不典型，早期即应用抗病毒药物治疗有关。

EBNA-IgG、EBVCA-IgG在成人疾病中诊断的阳性率明显高于儿童，EBVCA-IgM阳性率在儿童传染性单核细胞增多症中有明显优势，高于成人疾病的诊断以及儿童其他疾病的诊断。

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