血必净联合盐酸氨溴索在急性百草枯中毒所致肺损伤大鼠中的应用

杨 昱 周 慎 罗 城 李桂云

贵阳市第二人民医院急诊科，贵州贵阳 550081

百草枯（PQ）是一种有机杂环类除草剂，其除草效能高，对环境危害较小，因而在多个国家中得到非常广泛的应用[1]。但PQ对人畜具有较强的毒性，日常生活中由于误服等因素造成的PQ中毒较为常见。PQ中毒患者多死于多脏器功能衰竭或呼吸衰竭，以肺脏毒性最为突出，其病死率在60.0%～81.6%[2]。多项研究表明，PQ中毒后，机体内部氧化应激反应指标与炎症反应水平升高，过量的氧自由基与促炎因子具有较强的致病作用，可引起细胞﹑组织等产生损伤[3]。血必净具有清除氧自由基，抑制脂质过氧化反应，抗氧化性损伤以及调节炎性因子等效用；另有相关研究表明，盐酸氨溴索能够保护PQ中毒大鼠肺功能[4-6]。本研究探讨血必净与盐酸氨溴索联合使用对PQ中毒所致急性肺损伤大鼠中的应用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般材料

选取50只健康成年的雄性SPF级SD大鼠，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，体重35～60g，日龄20～25d。实验药品：PQ溶液（生产厂家：山东三元工贸有限公司），血必净注射液（天津红日药业股份有限公司，Z20040033，规格：10mL/支），盐酸氨溴索（浙江康恩贝制药股份有限公司，H20103773，规格：2mL ∶ 15mg）。

实验仪器与试剂：离心机（上海精密仪器仪表有限公司，型号：TGL-16B）；超氧化物歧化酶（SOD）﹑丙二醛（MDA）以及谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒等均由上海源叶生物科技有限公司提供。

1.2 实验方法

选取的50只健康成年雄性SPF级SD大鼠，随机分为五组：空白组（A组）﹑单纯PQ中毒组（B组）﹑PQ中毒+血必净治疗组（C组）﹑PQ中毒+盐酸氨溴索治疗组（D组），PQ中毒+血必净联合盐酸氨溴索治疗组（E组），每组10只；A组大鼠仅按25mg/kg的剂量于腹腔注射生理盐水，余下四组大鼠均于腹腔一次性注射25mg/kg，20%PQ溶液，建立大鼠急性PQ中毒模型；大鼠PQ中毒模型完成之后，B组大鼠仅于腹腔注射10mL/kg生理盐水；C组大鼠于腹腔给予10mL/kg血必净注射液；D组大鼠在腹腔注射10mL/kg盐酸氨溴索注射液；E组大鼠腹腔注射10mL/kg盐酸氨溴索注射液+10mL/kg血必净注射液。五组均连续给药培养7d，除上述给药情况不同外，五组大鼠喂养环境﹑饲料等其他因素均一致。

1.3 检测方法

取大鼠右肺，并放置于体积重量为4%多聚甲醛溶液中固定。取大鼠右肺上叶称重记为湿重，接着将其置于烤箱中，在70℃下烘烤，至恒重后记为干重，计算肺组织湿重/干重比（W/D）值。

取大鼠腹主动脉血，3500r/min离心15min，分离血清，采用ELISA法测定大鼠白细胞介素-6（IL-6）﹑肿瘤坏死因子（TNF-α）水平；取大鼠左肺组织匀浆后，以3000r/min的速度离心10min，取上清液，检测SOD﹑MDA以及GSH含量，SOD﹑MDA及GSH的检测严格按照试剂盒规定的方法进行。

1.4 统计学处理

采用SPSS17.0对本研究所有数据进行统计学处理，计量资料以（±s）表示，多组计量资料比较采用F检验，多样本间的两两比较采用SNK-q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 五组大鼠炎性指标比较

五组大鼠中，A组大鼠IL-6﹑TNF-α水平均均明显低于其他四组，B组IL-6﹑TNF-α水平均明显高于其他四组，差异有统计学意义（P＜0.05）；C组﹑E组IL-6﹑TNF-α水平均低于D组，差异有统计学意义（P＜0.05），C组IL-6﹑TNF-α水平高于E组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 五组大鼠炎性指标比较（± s ，pg/mL）

表1 五组大鼠炎性指标比较（± s ，pg/mL）

注：与A组比较aP＜0.05；与B组比较bP＜0.05

组别 IL-6 TNF-α A组 10.56±4.31 70.27±10.16 B组 591.75±5.63a 637.86±5.90a C组 126.36±4.59ab 105.91±4.38ab D组 325.81±3.76ab 190.46±6.42ab E组 102.33±4.17ab 87.76±5.12ab F 225.16 215.88 P＜0.05 ＜0.05

2.2 五组大鼠氧化应激指标比较

五组大鼠中，A组W/D值﹑MDA水平均低于其他四组，SOD﹑GSH水平均高于其他四组，差异有统计学意义（P＜0.05）；B组W/D值﹑MDA水平均高于其他四组，SOD﹑GSH水平均低于其他四组，差异有统计学意义（P＜0.05）；E组W/D值低于C组﹑D组，SOD水平高于C组﹑D组，差异有统计学意义（P＜0.05）；D组SOD水平显著低于C组，差异有统计学意义（P＜0.05）；C组﹑D组W/D值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；C组﹑D组﹑E组MDA水平﹑GSH水平两两比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

3 讨论

血必净注射液是由红花﹑赤芍等活血化瘀药物组成，具有改善微循环﹑增加血管血流量﹑减少血小板凝聚的作用，同时可降低患者炎性反应时毛细血管通透性﹑减少炎性渗出﹑促进炎症吸收[7-8]；此外，血必净还具有清除过剩氧自由基，抑制脂质过氧化反应，抗氧化性损伤等作用，可稳定细胞膜结构﹑降低内毒素﹑保护血管内皮细胞，减轻PQ中毒情况下的脏器功能受损[9-10]。盐酸氨溴索具有抗氧化﹑减少肺损伤时自由基量的作用，能够促进肺表面活性蛋白-A的合成与分泌，对减轻PQ中毒所致急性肺损伤有一定作用[11-12]。相关研究表示，盐酸氨溴索和血必净两者联合使用能够发挥协同作用的效果，与各单独使用比较，抗炎作用更强，更为显著地逆转体外循环术后的急性肺损伤，对肺功能起到明显的保护作用[13-14]。

表2 五组大鼠氧化应激指标比较（± s）

表2 五组大鼠氧化应激指标比较（± s）

注：a与A组比较aP＜0.05；与B组比较bP＜0.05。

组别W/D SOD（kU/g） MDA（mmol/g） GSH（mg/g）A组 2.26±0.18 210.96±6.34 1.78±0.16 1.33±0.03 B组 6.06±0.65a 98.72±4.35a 3.11±0.50a 0.69±0.02a C组 4.32±0.62ab 184.20±5.61ab 2.02±0.22ab 1.13±0.02ab D组 3.93±0.51ab 161.73±4.38ab 2.12±0.20ab 1.11±0.04ab E组 3.45±0.43ab 192.24±4.1ab 1.96±0.18ab 1.14±0.03ab F 69.69 671.17 78.58 547.76 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

肺组织W/D值的变化可以反映机体肺间质与肺泡血管通透性的改变，SOD﹑MDA和GSH是自由基损伤的观察指标，可反映机体自由基清除能力与抗脂质过氧化损伤的能力[15]。由本研究结果得，C组﹑E组IL-6﹑TNF-α水平均低于D组，且C组IL-6﹑TNF-α水平高于E组，差异有统计学意义（P＜0.05）；表示血必净﹑血必净联合盐酸氨溴索对重度大鼠炎性反应及内皮细胞的保护作用强于盐酸氨溴索单独给药，且血必净效果优于盐酸氨溴索。E组W/D值低于C组﹑D组，差异有统计学意义（P＜0.05）；说明血必净与盐酸氨溴索两者联合使用对血管通透性的改善效果较两者单独使用佳；E组SOD水平高于C组﹑D组，且D组SOD水平显著低于C组，差异有统计学意义（P＜0.05），说明血必净单独或者联合盐酸氨溴索均能使中毒大鼠SOD活性得以提高，有利于清除机体自由基并消除过度氧化应激造成的损伤，且血必净应用效果优于盐酸氨溴索；C组﹑D组﹑E组MDA水平﹑GSH水平两两比较，差异不明显，则表示血必净﹑盐酸氨溴索或两者联合使用对改善中毒大鼠体内脂质过氧化反应的效果相近。

综上所述，血必净与盐酸氨溴索联合治疗可以明显降低PQ中毒所致急性肺损伤大鼠的应激反应与炎症反应，对PQ中毒引起的急性肺损伤大鼠具有明显的保护作用。但目前临床上对于两者联合治疗PQ中毒人体的研究较为匮乏，还需继续深入观察研究。

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