枸杞多糖免疫增效剂对滩羊抗体水平和细胞因子分泌的影响

王建东，马吉锋，侯鹏霞，于 洋，梁小军

(宁夏农林科学院动物科学研究所，宁夏银川 750002)

滩羊是宁夏特色养殖品种，仅适宜于宁夏窄生态地带。滩羊的特色主要体现在两个方面，一是二毛裘皮花案清晰，轻暖美观；二是滩羊肉质细嫩，脂肪分布均匀，味鲜美，无膻味，是粗毛羊中肉质最好的一种。但由于近年来宁夏滩羊主要以圈养为主，不但影响了滩羊肉的品质，同时疾病的发生也在增加，养殖户在不得已的情况进行西药防治导致各种药物残留的产生，继而影响到人类的餐桌[1]。

枸杞子是宁夏当地特产，中华人民共和国兽药典(2015年版第二部)指出宁夏的枸杞是道地药材[2]。研究表明，枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccahrides，LBP)是枸杞子主要免疫活性成分。无论是对健康动物还是对亚健康动物，LBP均能有效提高其细胞免疫和体液免疫功能。LBP可以对小鼠 IL-4 、IL-3 、TNF等的诱生具有明显调节作用[3]。LBP还可以作用于T细胞 、CTL细胞 、NK细胞及腹腔巨噬细胞，提高机体的细胞免疫功能和免疫监视系统的功能，具有抗肿瘤和调节免疫作用。LBP还有红细胞免疫功能作用[4]。关于LBP是否能提高滩羊机体免疫力，目前还鲜见报道。本研究旨在结合宁夏两大特产滩羊和枸杞，在提高滩羊健康水平的同时，为研究新型绿色免疫增效剂提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 免疫增效剂 自制枸杞多糖免疫增效剂，剂型：单一成分散剂，主要成分枸杞多糖，每日饲喂量为0.5g/只羊,其他成分为扩容剂。

1.1.2 试验用动物 选择体况相近围产期滩羊30只，在2胎以内每天饲喂同样的全价粉状饲料，自制免疫增效剂用少许的粉状饲料扩容(一次拌好7 d的量，放置阴凉处)，每天定时定量饲喂含有枸杞多糖免疫增效剂的饲料，试验周期7 d。分别在试验0、7、14 d各采血1次，将0 d作为对照组，14 d、7 d与0 d进行对照。试验时间为2016年10月，试验地点：宁夏农科院畜牧所养殖场。

1.1.3 主要试剂 滩羊免疫球蛋白G(IgG)(批号：20160822)、免疫球蛋白M(IgM) (批号：20160822)、免疫球蛋白A(IgA)(批号：20160822)、白细胞介素2(IL-2)(批号：20160816)、白细胞介素13(IL-13)(批号：20160815)、白细胞介素9(IL-9)(批号：20160812)、白细胞介素17(IL-17)(批号：20160810)、γ干扰素(IFN-γ)(批号：20160812)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)(批号：20160825)9项指标的ELISA检测试剂盒，Bio-Rad公司产品。

1.1.4 主要仪器 酶标仪(SM-3)，北京天石天力公司产品；自动洗板机(ST360W)，上海科华公司产品；电热恒温器(HH-W21-600)，天津泰斯特有限公司产品；离心机(TDL80-2B)，上海安亭科学仪器有限公司产品；血常规分析仪(XFA6130型)，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 试验羊处理方法 试验羊未进行分组，采用0、7、14 d进行组内比较。

1.2.2 血样采集 各组颈部静脉采血0.5 mL，室温放置1 h，血液凝固与管壁剥离，使血清充分析出，然后于2 000 r/min离心10 min，收集血清。

1.2.3 滩羊血常规检测 分别在试验开始前、7、14 d，各采血1次，利用血常规分析仪进行分析，测定白细胞、淋巴细胞。

1.2.4 外周血液采集 分别在试验0、7、14 d后采血0.5 mL，室温放置1 h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，然后于2 000 r/min离心10 min，收集血清。

1.2.5 检测方法 滩羊血常规检测按照仪器操作进行，IgG、IgM、IgA、IL-2、IL-13、IL-9、IL-17、IFN-γ、TNF-β其含量严格按照ELISA试剂盒说明书步骤操作。

1.2.6 统计分析 试验结果应用EXCEL和spss13.0进行统计，单因素方差分析进行数据间差异性分析。

2 结果

2.1 枸杞多糖免疫增效剂对滩羊抗体水平和细胞因子分泌的影响

通过检测9个指标，包括滩羊免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素13(IL-13)、白细胞介素9(IL-9)、白细胞介素17(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)，结果见表1和表2。

表1 枸杞免疫增效剂对滩羊免疫球蛋白含量的影响

注：同列角标相同字母表示差异不显著(P>0.05)；不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different small letters mean significant difference(P<0.05),and with different capital letters mean extremely significant difference(P<0.01).

由表1可见，饲喂7 d和14 d，IgA含量先下降后上升，饲喂7 d和14 d，IgM、IgG的含量持续上升。统计显示，14 d后IgA的含量是0 d的1.05倍，差异不显著 (P>0.05)，IgM、IgG的含量显著高于0 d，分别是0 d的1.44倍和1.19倍。

由表2可见，饲喂7 d和14 d，IL-2、IL-13 、IL-17、TNF-α、IFN-γ含量持续上升。统计显示，14 d后IL-2、IL-13含量极显著高于0 d(P<0.05)， IL-17、IL-19在饲喂前后差异不显著(P>0.05)，其中，14 d的含量分别是0 d的1.26倍、1.02倍；TNF-α、IFN-γ在饲喂7 d后，IFN-γ含量显著高于0 d(P<0.01),14 d TNF-α、IFN-γ的含量均极显著高于0 d(P<0.01)，分别是0 d的1.33倍和1.25倍。结果表明，饲喂后以上各指标含量均增加。

表2 枸杞免疫增效剂对滩羊细胞因子含量的影响

注：同列角标相同字母表示差异不显著(P>0.05)；不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。

Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different small letters mean significant difference(P<0.05),and with different capital letters mean extremely significant difference(P<0.01).

2.2 枸杞多糖免疫增效剂对提高滩羊机体免疫力效果的影响

通过血液常规检测滩羊白细胞、淋巴细胞，可以间接了解枸杞多糖免疫增效剂对提高滩羊机体免疫力效果，结果见表3。

从表3可以看出，白细胞在饲喂中、饲喂后与饲喂前差异不显著(P>0.05)，但饲喂后是饲喂前的1.28倍；淋巴细胞在饲喂后与饲喂前差异显著(P<0.05)，饲喂后是饲喂前的1.45倍。

表3 免疫增效剂对滩羊白细胞、淋巴细胞的影响

注：同列角标相同字母表示差异不显著(P>0.05)；不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different small letters mean significant difference(P<0.05).

3 讨论

3.1 枸杞多糖对滩羊体液免疫功能的影响

滩羊外周血中免疫球蛋白含量的高低能反映滩羊在该时期的免疫力，免疫球蛋白可以间接反映动物机体的体液免疫功能。据研究沙葱多糖对肉羊机体免疫功能有一定的影响，发现沙葱对照组及3个试验组均显著提高体液免疫指标IgG含量(P<0.05)。本试验分别在试验0、7、14 d后各采血1次，检测外周血中IgG、IgA、IgM 含量的变化，从而反映该时期滩羊机体免疫状态[5]。由表1可见，跟踪14 d，IgA的含量是0 d的1.05倍，差异不显著 (P>0.05)， IgM、IgG的含量显著高于0 d，分别是0 d的1.44倍、1.19倍,说明在滩羊饲喂枸杞多糖7 d可提高外周血中免疫球蛋白含量。

3.2 枸杞多糖对滩羊细胞免疫功能的影响

细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子等，可以间接反应动物细胞免疫功能，滩羊外周血中细胞因子含量的高低能反映滩羊的免疫力[6]。本研究分别在试验0、7、14 d后各采血1次，检测外周血中IL-2、IL-13、IL-9、IL-17、IFN-γ、TNF-β含量的变化，从而反映滩羊机体免疫状态。从表1可以看出IL-2、IL-13含量上升，饲喂后14 d含量显著高于0 d(P<0.05)， IL-17、IL-19在饲喂前后差异不显著(P>0.05)，但饲喂后含量有上升的趋势，其中，饲喂后14 d的含量分别是0 d的1.26倍、1.02倍； TNF-α、IFN-γ饲喂后含量均升高，其中，饲喂后7 d IFN-γ含量极显著高于0 d(P<0.01),饲喂后14 d TNF-α、IFN-γ的含量均极显著高于0 d(P<0.01)，分别是0 d的1.33倍和1.25倍。有研究报道肉羊日粮添加11 mg/kg～33 mg/kg沙葱黄酮对细胞因子IL-1p、IL-2、IL-4、IL-6、IFN等含量有显著上调作用(P<0.05)，未见枸杞多糖用于羊的研究。

3.3 枸杞多糖对滩羊白细胞和淋巴细胞的影响

研究报道日粮添加33 mg/kg沙葱多糖对肉羊淋巴细胞转化率有所提高[4]。白细胞是机体防御系统的一个重要组成部分，白细胞数量的增加表明机体抵抗外来细菌与病毒入侵的能力加强，对提高机体免疫力，改善白细胞减少症有着重要的意义。统计显示，白细胞在饲喂中、饲喂后与饲喂前差异不显著(P>0.05)，但饲喂后是饲喂前的1.28倍；淋巴细胞是构成免疫系统的核心成分，淋巴细胞经血液和淋巴循环，从一处的淋巴器官或淋巴组织至另一处的淋巴器官或淋巴组织，使分散各处的淋巴器官和淋巴组织连成一个功能整体，统计显示淋巴细胞在饲喂后与饲喂前差异显著(P<0.05)，饲喂后是饲喂前的1.45倍。

综上所述，枸杞多糖免疫增效剂可提高滩羊的体液免疫和细胞免疫功能，提高血细胞中的免疫细胞数量，从而提高滩羊的免疫功能。

[1] 杨宇为.不同添加剂对舍饲滩羊肉品质调控及生产性能影响的研究[D]．宁夏银川：宁夏大学,2015.

[2] 中华人民共和国药典:二部[M].北京：中国医药出版社，2015:365.

[3] Kevin K P,Joseph W L,Jackie N C,et al.Protective effect ofLyciumbarbarumpolysaccharides on dextromethorphan-induced mood impairment and neurogenesis suppression[J]．Brain Res Bulletin,2017,134(9):10-17.

[4] 刘英娟,杜金梁,贾 睿,等.枸杞多糖对四氯化碳致建鲤急性肝损伤的保护作用[J]．浙江农业学报，2015，27(1):37-43．

[5] Yang M,Ding J,Zhou X,et al.Effects of lycium barbarum polysaccharides on neuropeptide Y and heat-shock protein 70 expression in rats exposed to heat [J]．Cancer Biother Radio Pharm,2014，(5):687-692.

[6] 王建东，马吉锋，李艳艳，等.枸杞多糖对动物免疫系统的影响[J].黑龙江畜牧兽医2014(15):66-68.