荧光光谱法测定蔬菜中辛硫磷的残留量

陈晶晶

摘要：在磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲溶液中，H2O2会氧化罗丹明B，当在罗丹明B中加入辛硫磷后，体系的荧光强度明显降低，且荧光强度降低值与辛硫磷的加入量呈良好的线性关系，据此建立了测定辛硫磷残留量的新方法。

关键词：荧光光谱法；辛硫磷；罗丹明B；过氧化氢

引言

目前我国使用量最多的农药是辛硫磷农药，此类农药能有效地控制害虫、杂草及细菌的生长，提高农业产量，但它属于高毒性农药，大量使用会造成许多潜在的危害[1]。随着农药的无节制用，蔬菜中农药残留问题越来越严重，这不仅污染环境，而且危害人类身心健康。因此，建立高效、快速、精准的检测蔬菜中辛硫磷农药残留的方法迫在眉睫[2-3]。

本文研究表明：在罗丹明B溶液中加入过氧化氢溶液后，体系的荧光强度明显降低，当再加入辛硫磷后，荧光强度显著猝灭，且荧光强度降低的程度与加入辛硫磷的量呈良好的线性关系，据此建立了荧光法测定辛硫磷残留量的新方法。

一、实验过程

（一）仪器与试剂

1.仪器：F-7000型荧光光谱仪； KQ3200超声波清洗器；BS224S型电子分析天平；移液管；比色管；比色皿。

2.试剂：磷酸二氢钾，磷酸氢二钠，硫酸，冰醋酸，醋酸钠，辛硫磷（18.5%），过氧化氢（30%，），罗丹明B，以上所用试剂均为分析纯。

3.标准溶液的配制。1.0×10-4mol/L 罗丹明B溶液；6%过氧化氢标准溶液；pH=1的硫酸溶液；pH=4.74的醋酸醋酸钠溶液； 辛硫磷储备液7.4mg/L：准确量取18.5%的辛硫磷溶液1.0mL稀释到250mL的容量瓶，然后取0.1mL稀释到10mL比色管中；

4.材料：菠菜（市售）；油菜（市售）；生菜（市售）。

（二）实验方法

在幾支 10 mL 比色管中，用移液管依次准确加入浓度为 1.0×10-4 mol/L 罗丹明B溶液 2.0 mL和一定量的表面活性剂和适量的辛硫磷溶液，然后加入6%过氧化氢溶液2.5mL稀释至所需刻度线，摇匀，充分反应后，于激发波长264nm，发射波长587nm处测定荧光强度（If），在相同条件下测定试剂空白的荧光强度（If0），计算荧光猝灭值ΔIf（If0-If）。

二、结果与讨论

（一）荧光光谱

在荧光光谱上分别扫描罗丹明B-H2O2-磷酸二氢钾-磷酸氢二钠-辛硫磷体系的激发光谱和发射光谱，实验结果表明，体系的λex=264.0nm，λem=587.0nm。当再加入H2O2一定浓度的后，发现荧光强度明显降低，当加入一定浓度的辛硫磷后，发现荧光强度明显降低，但峰位置并不发生改变，且荧光强度降低的程度与辛硫磷浓度在一定范围内成正比。因此，说明辛硫磷可使体系荧光猝灭，基于此，可用荧光光谱法测定辛硫磷。

（二）标准曲线

先取一支比色管中依次加入为罗丹明B溶液2.5mL、磷酸盐缓冲溶液1.0mL，然后都加入过氧化氢溶液2.5mL时，测定空白值，然后在八支比色管中加入上述溶液后加入辛硫磷溶液0.1mL～2.5mL。用荧光强度差值ΔIf做标准曲线。按实验方法测定辛硫磷系列标准溶液的荧光强度，以辛硫磷的浓度对对应的ΔIf绘制 标准线。

实验结果表明，辛硫磷的浓度在7.4mg·L-1～185mg·L-1之间与ΔIf成良好的线性关系。其线性回归方程为ΔIf=4.7505c+125.02，线性相关系数为r=0.9914。检出限为0.53mg·L-1。

（三）分析应用

1.样品处理。用电子天平准确称取菠菜（9.5220g）、油菜（9.9204g）、生菜（9.5047g）加入250mL锥形瓶中，往锥形瓶中分别加入50 mL超纯水，浸泡12小时后，置于超声波清洗容器中振荡5 min，取上清液进行测定。

2.加标回收率实验。分别取三支10mL比色管，然后在优化的实验条件下，按1.2中实验方法测定样品空白和加入了6.0mL的溶液在加了4.0mL样品溶液，平行测定3次，然后在另外三支10ml比色管中加入待测的0.5mL的辛硫磷农药溶液，计算荧光强度的差值，同理，然后再分别测定辛硫磷溶液1.0mL，1.5mL时的荧光强度的差值，测完后根据标准曲线上的标准溶液的值，计算加标回收率，优化的实验条件下，取于3.1中相同量的试样提取液，向试样中加入一定量的待测成分标准物质，在587.0nm处的荧光强度If，测定结果如表4所示。

三、结论

在罗丹明B和混合磷酸盐以及过氧化氢混合溶液中加入农药辛硫磷后，体系荧光强度明显下降，结果表明，辛硫磷可使体系荧光猝灭。发现体系的荧光强度降低值与辛硫磷含量在一定浓度范围内成线性关系，基于此，可建立罗丹明B、混合磷酸盐和过氧化氢测定辛硫磷的荧光分析法，该方法测定快速、简便、灵敏度高，可用于蔬菜中辛硫磷残留量的测定。

参考文献

[1]程定玺，赵亚鹏，左国强等.荧光光谱法测定有机磷农药残留量[J].解放军药学学报， 2010，（46）：645-647.

[2]余榈.长沙市蔬菜有机磷农药残留检测与分析[J].科技与产业，2010.4：20-21.

[3]周睿璐，付大友，郭雪琰等.试纸法快速检测果蔬中敌敌畏含量的研究[J].2017.46（1）：107-112.