甲磺酸桂哌齐特与马来酸桂哌齐特注射液药动学比较研究

罗芳梅，曹 靖，王 婷，刘 辉，田 娟，丁劲松

(1.湖南省儿童医院，长沙 410007；2.中南大学湘雅药学院，长沙 410013)

马来酸桂哌齐特(cinepazide maleate，CMA)具有增加内源性腺苷、拮抗钙离子、扩张血管和促进脑细胞营养代谢等作用，对心脑缺血细胞具有保护作用[1-3]。CMA临床应用广泛，主要用于心脑血管、外周血管疾病及其他疾病的治疗，如不稳定型心绞痛[4]、高血压性脑出血[5]、脑梗死[6-7]、蛛网膜下腔出血[8]、肾绞痛[9-10]、糖尿病周围神经病变[11]及急诊眩晕[12]等。但CMA注射液的光稳定性较差，对其生产、储藏、运输和使用带来不便，同时也给临床安全用药带来隐患[13-15]。为了改善桂哌齐特的光稳定性，更好的发挥其临床优势，北京四环制药有限公司研制了桂哌齐特(cinepazide，CPZ)的甲磺酸盐，即甲磺酸桂哌齐特(cinepazide mesylate，CME)。临床前药效学对比研究发现，CME与CMA一样，具有扩张血管、改善循环及保护脑细胞的作用。分别以水和甲醇为溶剂比较CME和CMA的溶解度发现，CME的溶解度高，更适合做成注射剂。理化性质的改变可能改变其体内处置，而体内处置与疗效、毒性和不良反应等安全性问题密切相关。此外，心脑血管疾病如心绞痛[16]、脑梗死[17]及蛛网膜下腔出血[18]等临床治疗需多次用药，而连续多次给药后药物在体内可能会蓄积中毒。因此，对CPZ改变酸根前后进行单次与多次给药药动学比较研究是非常必要的。本研究考察了CME和CMA单次与多次给药的药动学特征，并比较了单次与多次给药、酸根改变前后的药动学特征，为其临床研究提供依据。

1 仪器与材料

1.1仪器 LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)；XW-80A微型涡旋混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司)；TDD5M多管低速离心机(长沙平凡仪表有限公司)；TGL16M低温高速离心机(长沙泰英仪器厂)；KL-up-Ⅱ-10型超纯水机(台湾艾柯公司)；BP 211D型十万分之一天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)。

1.2试药 甲磺酸桂哌齐特注射液(规格：250 mg/10 mL，批号110902)，马来酸桂哌齐特注射液(规格：320 mg/10 mL，批号20110940)，桂哌齐特游离碱(质量分数为96.7%，批号110422-1)，均为北京四环制药有限公司生产；盐酸坦索罗辛对照品(中国食品药品检定研究院，质量分数为99.8%，批号1006882004-01)；乙腈(批号LOT40Y1201SS)，甲醇(批号LOT1105074)，均为色谱纯，购自美国天地有限公司；冰醋酸(批号T20100519)，乙酸铵(批号F20091117a)，三乙胺(批号F20100802)，均为国药集团化学试剂有限公司生产；色谱用水为试验自制去离子超纯水；其余试剂均为国产分析纯。

1.3材料 空白人血浆和尿液(来自健康受试者)。

2 方法

2.1志愿者 筛选12名中国健康志愿者，男女各半，年龄为20～27岁，身高150～176 cm，体质量45.5～65.5 kg。试验方案经中南大学湘雅三医院伦理委员会批准，且试验前所有志愿者均签署知情同意书。

2.2试验方案 采用2×2交叉试验设计，12名健康志愿者，男女各半，在两周期内分别静脉滴注CME 250 mg和CMA 320 mg(以CPZ计，为等摩尔剂量)，每周期连续给药5 d，每日1次。洗脱期为10 d。

血样采集与保存：于每周期给药的第1和5天给药前(0 h)分别采静脉血5 mL，给药开始后0.5，1，1.5，2 h(滴完)，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12和14 h以及第3和4天给药前分别采静脉血5 mL，血样立即离心，-80 ℃保存待测。

尿样采集与保存：在每周期第1天给药前采集尿液样本并排空膀胱，于给药开始后0～2，2～4，4～8，8～12和12～24 h分段收集尿液样本，测量体积后，留取5 mL样品，-80 ℃保存待测。

2.3测定方法 采用HPLC-UV法测定血样和尿样中的CPZ[19]。

2.3.1色谱条件 色谱柱：依利特C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm)；保护柱：Security Guard C18柱(4 mm×3.0 mm，Phenomenex，USA)；流动相：乙腈∶乙酸铵缓冲溶液(1 mL·L-1醋酸+2 mL·L-1乙酸铵+1 mL·L-1三乙胺)=29∶71；柱温：40 ℃；流速：1 mL·min-1；进样量：30 μL。

2.3.2样品处理 血样处理：取血样200 μL，置于2 mL EP管中，精密加入25 μL 质量浓度为200 μg·mL-1的盐酸坦索罗辛内标溶液，涡旋30 s，加入100 μL甲醇-50 g·L-1硫酸锌(70∶30)沉淀剂，涡旋振荡1 min，以13 500 r·min-1离心10 min，取上清200 μL，置于进样瓶的内衬管中，进样30 μL。

尿样处理：取尿样200 μL，置于2 mL EP管中，精密加入25 μL质量浓度为 2 mg·mL-1的盐酸坦索罗辛内标溶液，涡旋30 s，加入1 mL甲醇-水(30∶80)溶液，涡旋振荡1 min，以13 500 r·min-1离心10 min，取上清200 μL，置于进样瓶的内衬管中，进样30 μL。

2.4统计学处理 采用DAS Ver 2.1计算CPZ的药动学参数，采用非房室模型拟合法计算各志愿者血浆中CPZ的药动学参数。利用SPSS 13.0进行统计分析。

对CPZ的药动学参数lnCmax、lnAUC0～t、lnAUC0～∞、V和CL进行方差分析，并对参数t1/2和MRT0～t进行非参数检验，对尿累积排泄率进行独立样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1方法学验证 血样中CPZ、内标的保留时间分别为8.0和6.8 min，尿样中分别为7.9 和6.6 min，特异性良好。分别配制CPZ质量浓度为15，10，5，1，0.5，0.1和0.05 μg·mL-1的CPZ标准血样和CPZ质量浓度为300，150，50，25，5，1和0.5 μg·mL-1的CPZ标准尿样，按照2.3.2项下方法处理后，采用内标法计算质量浓度。血样、尿样中CPZ的线性回归方程分别为y=1.24x-0.046 4(r=0.997 7)和y=6.86×10-5x+0.16(r=0.998 0)，线性范围分别为0.05～15.0和0.5～300 μg·mL-1，定量下限分别为0.05和0.5 μg·mL-1(S/N≥10)。血样、尿样的提取回收率见表1。日内、日间精密度见表2。CPZ血样及尿样室温避光放置6 h稳定(RSD<7.0%，3.3%)。血样及尿样处理液室温避光放置24 h稳定(RSD<5.4%，5.3%)，4 ℃避光放置48 h稳定(RSD<7.2%，6.3%)。CPZ血样和尿样均在3次冻融过程中稳定(RSD<3.2%，2.9%)。CPZ血样及尿样在-80 ℃放置60 d稳定(RSD<10.4%，5.2%)。

3.2受试者入组及完成情况 12名健康志愿者参与本试验，其中1名于第1周期给药第4天因个人时间原因撤销知情同意，退出试验，共11名志愿者完成全部试验。

表1血样、尿样中CPZ和内标的提取回收率

3.3药时曲线

3.3.1血药质量浓度的测定 11名志愿者单次、多次静脉滴注CME和CMA后CPZ平均血药质量浓度时间曲线见图1。

3.3.2尿药质量浓度的测定 12名志愿者参与本试验的尿液样本收集，其中10号因试验中途退出，第2周期的尿液样本缺失，6号第1周期因生理期未收集尿液样本，其余志愿者均按照试验方案收集尿液样本。志愿者静脉滴注CME 250 mg和CMA 320 mg后24 h内CPZ尿累积排泄率分别为55.30%±3.39%和56.22%±3.61%。平均尿累积排泄率-时间曲线见图2。

表2血样、尿样中CPZ的精密度

图1受试者单次、多次静脉滴注CME/CMA后CPZ平均血药质量浓度-时间曲线(n=11)

Fig.1 Mean plasma concentration(μg·mL-1)-time(h) curve of CPZ after single and multiple intravenous drip of CME/CMA(n=11)

图2志愿者单次静脉滴注CME和CMA后尿中CPZ平均累积排泄率-时间曲线(n=11)

Fig.2 Mean urine cumulative excretion rate(%)-time(h) curve of CPZ after single intravenous drip of CME and CMA(n=11)

3.4药动学参数 11名志愿者单次和多次静脉滴注CME 250 mg和CMA 320 mg后CPZ的药动学参数见表3。

表3CPZ的药动学参数

注：—表示未检测到数据。

3.5统计分析

3.5.1单次与多次给药比较 与单次给药比较，连续多次静滴CME或CMA后主要药动学参数(lnAUC0～t、lnAUC0～∞、lnCmax、V、CL、t1/2和MRT0～t)间差异均无统计学意义(P>0.05)，且谷浓度低于定量下限，表明CME或CMA多次给药后无药物蓄积，多次给药不改变其体内药动学过程。

3.5.2CME与CMA比较 CME和CMA单次或多次给药后主要药动学参数(lnAUC0～t、lnAUC0～∞、lnCmax、V、CL、t1/2和MRT0～t)间差异均无统计学意义(P>0.05)。单次给药后尿累积排泄率在不同酸根间差异均无统计学意义(P>0.05)。

4 讨论

与单次给药相比，连续多次给药后CPZ的主要药动学参数间差异均无统计学意义(P>0.05)，且多次给药后谷浓度样本中未检测出CPZ，提示多次给药不影响CPZ的代谢消除，无药物蓄积。CME与CMA单次与多次给药后的主要药动学参数间差异均无统计学意义(P>0.05)，单次给药后CPZ尿累积排泄率在不同酸根间差异无统计学意义(P>0.05)，提示CME与CMA在人体内药动学行为相似。

5 结论

甲磺酸桂哌齐特与马来酸桂哌齐特单次与多次给药后在人体内药动学行为相似，连续多次给药，体内无蓄积。

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