白细胞介素6与子宫内膜癌侵袭和转移的相关性分析

车 祺， 刘素英， 董 曦

复旦大学附属中山医院生殖医学中心，上海 200032

目前，子宫内膜癌发病人数在美国及欧洲等发达地区已接近新发妇科恶性肿瘤的50%。2016年，美国子宫内膜癌新发病例为54 870例，死亡病例为10 170例。近年来，我国子宫内膜癌也出现了发病率升高和发病年轻化的趋势。2001年以来，子宫内膜癌发病率明显高于宫颈癌，2008年后已成为发病率最高的女性生殖系统恶性肿瘤[1-3]。虽然Ⅰ期子宫内膜样腺癌(内膜癌)的5年生存率接近90%，但这其中有30%的肿瘤患者存在高风险，一旦肿瘤浸润至深肌层或者出现盆腔转移，5年生存率即显著降低，其中进展至Ⅲ和Ⅳ期的患者5年生存率分别为57%～66%和20%～26%[4]。全子宫切除、激素治疗以及放化疗的联合应用对于早期子宫内膜癌有效，一旦肿瘤发生转移，疗效即下降。因此，研究子宫内膜癌的侵袭和发展机制，寻找可以预测其恶性潜能的生物学标志物，采取有效的预防措施，选择新的治疗靶点，并制定合理有效的综合治疗方案，具有十分重要的意义，本研究对其进行了探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2014年3月至2016年10月在复旦大学附属中山医院经手术治疗的子宫内膜癌患者的癌组织标本及临床资料。选择病理资料(包括组织学分级、FIGO分期[5]、组织学类型、肌层浸润、淋巴结转移和脉管浸润)完整者共78例；患者年龄为33～78岁，平均(56.9±8.8)岁，中位年龄为57 岁。另选取42例正常子宫内膜标本作为对照，均来源于因子宫良性疾病(如子宫肌瘤和子宫腺肌病等)接受子宫切除手术的患者；患者年龄34～70岁，平均(53.9±8.6)岁，中位年龄为53岁。同时收集26例不典型增生的子宫内膜组织标本，患者年龄为35～75岁，平均(52.9±7.8)岁，中位年龄为52岁。所有入选患者均来自复旦大学附属中山医院，在术前均未接受过放化疗或激素治疗。本研究获得医院伦理委员会批准，患者或家属均签署知情同意书。

1.2 免疫组织化学染色 实验所用的免疫组化试剂盒购自上海明睿生物技术有限公司，其中白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)抗体的工作液稀释比例为1∶100。首先用4%甲醛溶液固定肿瘤组织，石蜡包埋，按3 μm连续切片，60℃恒温箱中烘烤过夜以备用；二甲苯2次脱蜡，梯度乙醇溶液水化；抗原修复以封闭内源性过氧化物酶，加入一抗并置于湿盒中，4℃孵育过夜；加入二抗，37℃孵育30 min；用链霉亲和素标记辣根过氧化物酶于37℃条件下孵育10 min；每张切片滴加DAB显色剂50 μL，光学显微镜下控制显色 3～5 min，适时用蒸馏水(或PBS溶液)冲洗以终止显色；苏木精对比染色细胞核；梯度乙醇溶液脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

1.3 免疫组织化学染色结果判定 以细胞核或细胞质内呈现棕黄色颗粒为阳性。采用半定量积分法，对每个视野的阳性细胞所占百分率及阳性细胞着色强度分别进行分级计分：阳性细胞着色强度计为0分(阴性)、1分(弱)、2分(中)和3分(强)；阳性细胞所占百分率计为0分(<1%)、1分(2%～25%)、2分(26%～50%)、3分(>50%)。免疫组化评分=阳性细胞着色强度计分+阳性细胞所占百分率计分；得分范围为0～6分，总分>3分者评定为阳性[6]。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。分类数据比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关检验。检验水准(α)为0.05。

2 结 果

2.1 IL-6在子宫内膜组织中的表达 免疫组化染色结果(图1)显示：IL-6主要表达于子宫内膜组织的腺上皮细胞质中。免疫组化半定量分析显示：IL-6在42 例正常子宫内膜组织中表达阳性率为4.8%(2例)，在26例不典型增生的子宫内膜组织中表达阳性率为30.8%(8例)，在78例子宫内膜癌组织中表达阳性率为60.3%(47例)；IL-6在正常子宫内膜、不典型增生、子宫内膜腺癌中的表达呈递增趋势，有等级相关性，Spearman等级相关系数为0.638，差异有统计学意义(P<0.01)。

图1 免疫组织化学染色示IL-6在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜及子宫内膜癌组织中的表达

2.2 IL-6阳性表达与子宫内膜癌临床病理参数的相关性 Spearman等级相关分析结果(表1)显示：IL-6表达阳性率与肌层浸润、淋巴结转移均存在等级相关性，等级相关系数分别为0.589、0.655，差异有统计学意义(P<0.05)；IL-6表达阳性率与子宫内膜癌的FIGO分期、组织学分级、组织学类型和脉管浸润等参数无明显相关性。

表1 IL-6表达与子宫内膜癌患者临床病理参数的相关性 N=78

3 讨 论

IL-6是在1986年被Hirano首次发现，由1条单链多肽组成的糖蛋白，相对分子质量为2.6×104。人类编码IL-6的基因位于第7号染色体，其编码蛋白由213个氨基酸组成，在多种生理和病理过程(如机体自稳、免疫系统和急性期反应等)中扮演重要角色[7-8]。研究[9-10]发现，在乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌和头颈部肿瘤中，IL-6激活和肿瘤细胞的生长、增殖密切相关。另外，不同组织中IL-6的产生需要不同刺激因子的诱导。这些刺激因子包括多种抗原和非抗原性物质，如DNA或RNA病毒、细菌内毒素以及细胞因子等。

IL-6通过不同机制促进子宫内膜癌发生和发展的作用已有文献报道。研究发现，IL-6可通过ERK/NF-κB信号通路促进子宫内膜癌细胞的生长和增殖[11]，或通过正反馈作用促进子宫内膜癌局部雌激素的合成[12]等。IL-6在卵巢癌和宫颈癌等妇科肿瘤中的促进作用也已被肯定，提示在各种妇科恶性肿瘤中，IL-6通过炎性反应、免疫及内分泌等各种机制对肿瘤的发生和发展起重要作用[13-14]。然而，IL-6与子宫内膜癌患者各种临床参数的相关性目前鲜见报道。

本研究发现，与正常子宫内膜组织相比，不典型增生子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中IL-6的表达均明显上调；这与张静等[15]的研究结果相一致。本研究进一步分析发现，IL-6阳性表达与子宫内膜癌的肌层浸润(r=0.589)和淋巴结转移(r=0.655)正相关，提示IL-6可能与子宫内膜癌的侵袭和转移有一定关系。IL-6/STAT3信号通路是IL-6下游的经典信号通路[16]。IL-6能否通过这一通路促进子宫内膜癌的发展，以及患者血清中IL-6能否作为监测子宫内膜癌复发以及肿瘤进展的临床指标，有待在今后工作中进一步探讨。此外，本研究入组病例中，子宫内膜癌分期以Ⅰ期为主，组织学分级以G1级为主，但IL-6与FIGO分期及组织学分级不相关。因此，本研究结论还需要今后通过进一步扩大样本量来证实。

此外，若证实雌激素通过靶向IL-6促进子宫内膜癌的浸润和侵袭，将为内膜癌局部雌激素合成理论[12]提供重要的补充，从而扩展人们对于内膜癌发生和发展机制的理解，并为寻找内膜癌靶向治疗途径开拓新的思路。本课题组今后将进一步探讨IL-6在子宫内膜癌侵袭和转移过程中的相关信号通路，为子宫内膜癌的保守治疗研究提供可靠的生物学依据，并期待使用抗IL-6的药物来达到减轻和治疗子宫内膜癌的目的，为罹患子宫内膜癌的年轻患者保留生育功能探索新的途径。

[ 1 ] Cancer Genome Atlas Research Network, KANDOTH C, SCHULTZ N, CHERNIACK A D, et al. Integrated genomic characterization of endometrial carcinoma[J]. Nature, 2013, 497(7447):67-73.

[ 2 ] HECHT J L, MUTTER G L. Molecular and pathologic aspects of endometrial carcinogenesis[J]. J Clin Oncol, 2006, 24(29):4783-4791.

[ 3 ] KALOGIANNIDIS I, AGORASTOS T. Conservative management of young patients with endometrial highly-differentiated adenocarcinoma[J]. J Obstet Gynaecol, 2011, 31(1):13-17.

[ 4 ] SIEGEL R, MA J, ZOU Z, et al. Cancer statistics, 2014[J]. CA Cancer J Clin, 2014, 64(1):9-29.

[ 5 ] LEWIN S N. Revised FIGO staging system for endometrial cancer[J]. Clin Obstet Gynecol, 2011, 54(2):215-218.

[ 6 ] SEGAWA T, SHOZU M, MURAKAMI K, et al. Aromatase expression in stromal cells of endometrioid endometrial cancer correlates with poor survival[J]. Clin Cancer Res, 2005, 11(6):2188-2194.

[ 7 ] BELLONE S, WATTS K, CANE′ S, et al. High serum levels of interleukin-6 in endometrial carcinoma are associated with uterine serous papillary histology, a highly aggressive and chemotherapy-resistant variant of endometrial cancer[J]. Gynecol Oncol, 2005, 98(1):92-98.

[ 8 ] STARK J R, LI H, KRAFT P, et al. Circulating prediagnostic interleukin-6 and C-reactive protein and prostate cancer incidence and mortality[J]. Int J Cancer, 2009, 124(11):2683-2689.

[ 9 ] HE Y Y, CAI B, YANG Y X, et al. Estrogenic G protein-coupled receptor 30 signaling is involved in regulation of endometrial carcinoma by promoting proliferation, invasion potential, and interleukin-6 secretionviathe MEK/ERK mitogen-activated protein kinase pathway[J]. Cancer Sci, 2009, 100(6):1051-1061.

[10] ROSE-JOHN S, WAETZIG G H, SCHELLER J, et al. The IL-6/sIL-6R complex as a novel target for therapeutic approaches[J]. Expert Opin Ther Targets, 2007, 11(5):613-624.

[11] CHE Q, LIU B Y, WANG F Y, et al. Interleukin 6 promotes endometrial cancer growth through an autocrine feedback loop involving ERK-NF-κB signaling pathway[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2014, 28, 446(1):167-172.

[12] CHE Q, LIU B Y, LIAO Y, et al. Activation of a positive feedback loop involving IL-6 and aromatase promotes intratumoral 17β-estradiol biosynthesis in endometrial carcinoma microenvironment[J]. Int J Cancer, 2014, 135(2):282-294.

[13] KORKAYA H, KIM G I, DAVIS A, et al. Activation of an IL6 inflammatory loop mediates trastuzumab resistance in HER2+breast cancer by expanding the cancer stem cell population[J]. Mol Cell, 2012, 47(4):570-584.

[14] HIGUCHI T, NAKANISHI T, TAKADA K, et al. A case of multicentric Castleman’s disease having lung lesion successfully treated with humanized anti-interleukin-6 receptor antibody, tocilizumab[J]. J Korean Med Sci, 2010, 25(9):1364-1367.

[15] 张 静, 王建六. 子宫内膜癌与细菌感染及炎症介质IL-6、IL-11的关系[J]. 中国妇产科临床杂志, 2012, 13(4):285-287.

[16] NI C W, HSIEH H J, CHAO Y J, et al. Interleukin-6-induced JAK2/STAT3 signaling pathway in endothelial cells is suppressed by hemodynamic flow[J]. Am J Physiol Cell Physiol, 2004,287(3):C771-C780.