VEGF、MMP-9和TIMP-1在小儿神经母细胞瘤中的表达及其临床意义

梁 宇

神经母细胞瘤( neuroblastoma，NB) 是1种儿童常见的恶性肿瘤，主要是由没有分化的交感神经细胞构成，其肿瘤转移时间早、疗效及预后较差，因此，探讨神经母细胞瘤组织蛋白表达，对临床治疗方法的研究具有重要作用[1-2]。有文献报道，VEGF在多种肿瘤中表达水平高，其可有效调控血管形成和浸润过程，而有研究报道MMP-9/TIMP-1表达水平与多种恶性肿瘤发生发展关系密切[3-4]。为此，本研究探讨VEGF、MMP-9和TIMP-1在小儿神经母细胞瘤中的表达及其临床意义，取得满意效果，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取我院2015年1月至2017年1月收治的小儿神经母细胞瘤患者30例作为研究对象。所有患儿均经病理学检查确诊为神经母细胞瘤，且行手术治疗前未曾行化疗、放疗等辅助治疗措施。根据国际神经母细胞瘤分期可将患儿分为：Ⅰ期8例，Ⅱ期10例，Ⅲ期7例，Ⅳ期5例。使用甲醛将所取患儿组织进行常规固定及石蜡包埋，连续切片，4 μm厚度，并分别进行HE染色及免疫组织化学染色。

1.2 方法

采用购自武汉博士德公司的抗人MMP-9多克隆抗体、抗人TIMP-1多克隆抗体、兔抗人VEGF 多克隆抗体进行免疫组化染色，使用常州市郝思琳医用仪器有限公司提供的CM3800 切片机，使用上海光密仪器有限公司的显微镜，采用北京福意联公司提供的fyl-ys-150恒温箱对标本进行脱蜡，严格按照试剂盒说明书操作步骤进行免疫组化S-P法的相关规范操作。用子宫内膜癌阳性切片作为阳性对照，PBS替代一抗进行阴性对照。

1.3 结果判断

VEGF免疫组化染色结果判断[5]。①阳性反应：以肿瘤细胞与其附近血管内皮细胞胞质内呈黄色或棕黄色颗粒为VEGF阳性反应。②阴性反应：与背景染色一致淡黄色或无棕色反应颗粒为VEGF阴性。

MMP -9蛋白和TIMP -1蛋白抗[6]。①阳性反应：均以细胞呈清晰棕黄色颗粒为组织阳性反应。并采用双人双盲法对结果进行观察，随机选择10个400×高倍镜视野观察1000个细胞。阳性表达细胞百分率≥5%为(+)，<5%为(-)。

1.4 统计学方法

应用SPSS 19.0软件分析本研究的所有数据，采用χ2检验计数资料。

2 结果

2.1 VEGF、MMP-9和TIMP-1在小儿神经母细胞瘤中的表达情况

MMP-9在组织中的阳性表达率为73.33%(22/30)、TIMP-1的阳性表达率为46.67%(14/30)，VEGF在组织中的阳性表达率为70.00%(21/30)(P<0.05);而22例MMP-9阳性表达组织标本中TIMP-1阳性表达率为40.90%(9/22)，8例MMP-9阴性表达组织标本中TIMP-1阳性表达率为75.00%(6/8)，21例VEGF阳性表达组织标本中TIMP-1阳性表达率为38.09%(8/21),9例VEGF阴性表达组织标本中TIMP-1阳性表达率为77.78%(7/9)(P<0.05)。

2.2 小儿神经母细胞瘤中VEGF、MMP-9和TIMP-1表达与肿瘤分期相关性

12例Ⅲ、Ⅳ期患者中MMP-9阳性表达为83.33%(10/12)、VEGF阳性表达为83.33%(10/12)，明显高于18例Ⅰ、Ⅱ期患者的55.55%(10/18)、50.00%(9/18)(P<0.05)，而TIMP-1在Ⅲ、Ⅳ期患者中阳性表达为25.00%(3/12)，明显低于Ⅰ、Ⅱ期患者的61.11%(11/18)(P<0.05)。

2.3 小儿神经母细胞瘤中VEGF、MMP-9和TIMP-1表达的相关性

TIMP-1表达与VEGF表达呈负相关关系(γ1=-0.434,P<0.05)。MMP-9表达与TIMP-1表达呈负相关关系(γ2=-0.532,P<0.05)。

3 讨论

神经母细胞瘤( NB)具有生长快、恶性度高、病程短的生物特性，肿瘤的浸润、转移以及生长是1个复杂过程，同时又是肿瘤复发的1个重要原因[7]。

本研究探讨VEGF、MMP-9和TIMP-1在小儿神经母细胞瘤中的表达及其临床意义，结果发现，MMP-9在组织中的阳性表达率为73.33%、TIMP-1的阳性表达率为46.67%，VEGF在组织中的阳性表达率为70.00%，TIMP-1与VEGF的表达呈负相关关系，MMP-9与TIMP-1的表达呈负相关关系。这是由于在肿瘤细胞介导的降解细胞外基质过程中基质金属蛋白酶家族( MMPs) 可起到重要作用，而MMP-9作为发挥主要功能的基质金属蛋白酶家族中的明胶酶，可对细胞外基质中Ⅳ、Ⅴ型胶原以及明胶等主要成分进行降解，将基底膜打破，并使肿瘤细胞浸润转移的首要障碍清除，而近年来，国内外发现MMP-9与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关，但在国内NB组织中的MMP-9的表达研究报道较少见[8]。

近年来发现，TIMPs是1种可对MMPs进行功能抑制的物质，往往由与分泌MMPs的同样细胞合成，它可以1∶1非共价健结合活化的间质胶原酶、间质溶解素以及 MMP-9形成复合物从而对其活性进行抑制，使细胞外基质的降解降低[9]。因MMP-9 与 TIMP-1在神经母细胞瘤侵袭转移过程中具有拮抗作用，因此，联合检测可准确地将肿瘤细胞侵袭转移的方向显示出，并为神经母细胞瘤的针对性治疗方案提供参考[10]。而肿瘤能否生存于转移部位，并向远处播散，肿瘤内血管生成在其中扮演重要角色，也是肿瘤复发的重要因素，而肿瘤的血管形成与VEGF等多种相关因子的诱导和调节密切相关，有大量研究显示VEGF于人的正常组织以及多种动物和肿瘤细胞株中均存在，VEGF可促使肿瘤新血管形成，在其生长和转移中起重要作用[11-12]。

综上所述，VEGF、MMP-9和TIMP-1与小儿神经母细胞瘤的恶性程度、浸润转移及预后密切相关,可作为预后的判断指标，为小儿神经母细胞瘤临床靶向治疗提供理论依据。