美洲红鹮源嗜水气单胞菌的分离与鉴定

陈 蓉 周 薇 陈 楠 章小小 邓长林

(江苏省南京市红山森林动物园兽医院，南京，210028)

嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)是弧菌科气单胞菌属，为革兰氏阴性短杆菌，广泛分布于自然界的各种水体，是多种水生动物的原发性致病菌，为条件致病菌，是典型的人-兽-鱼共患病病原菌[1-2]。临床上以急性出血性败血症为主要特征，慢性感染则主要表现为皮肤溃疡或肠炎[3]。在野生动物中，大熊猫(Ailuropodamelanoleuca)、北极狐(Alopexlagopus)、海豹(Phocidae)、企鹅(Spheniscidae)、长颈鹿(Giraffacamelopardalis)等均分离到了致病性嗜水气单胞菌[4-8]。

美洲红鹮(Eudocimusruber)是栖息在南美洲热带及特立尼达的一种朱鹭，是特立尼达的国鸟，也是世界上颜色最红的鸟类，具有极高的观赏价值。2016年1月，南京某动物园的美洲红鹮群体中连续出现4只个体发病，均在临床表现精神沉郁后不久死亡。解剖发现肝脏出现不同程度血肿，肠道多处出血、卡他，部分肠壁变薄。取其肝脏和肠道内容物样品进行致病菌分离培养，依据所获菌株生化鉴定、药敏试验和小鼠致病性试验结果，以及病死红鹮病理学观察结果，确定致病性嗜水气单胞菌为导致美洲红鹮死亡的病原菌。同时，在饲喂美洲红鹮的小黄鱼肠道中也分离到致病性嗜水气单胞菌。

1 研究方法

1.1 细菌培养

将2只病死美洲红鹮的肝脏、脾脏、肠道内容物样品无菌接种至血平板中，37℃培养24 h。饲喂美洲红鹮的小黄鱼肠道内容物无菌接种至血平板中，37℃培养24 h。

1.2 生化鉴定

经革兰氏染色镜检后；经Biomerieux微生物鉴定仪，进行生化鉴定。

1.3 药敏试验

利用比浊法在Biomerieux微生物药敏分析鉴定仪上，对分离菌进行药敏实验，判断分离细菌对常见药物的敏感性。

1.4 病理学观察

取病变肝脏、肠道于中性福尔马林溶液中固定，进行常规脱水、透明、透蜡、石蜡包埋、切片、HE染色，光镜观察组织病理学变化。

1.5 小鼠致病性试验

将15只2周龄普通级昆明小鼠，在试验室饲养2 d，观察无异常后随机分3组，每组5只。取分离株1和分离株2的18 h肉汤纯培养物，按麦氏比浊法稀释成6×108cfu/mL进行腹腔注射，每只注射0.1 mL。对照组注射生理盐水。观察小鼠精神状况、死亡时间和数量。无菌接种肝脏内容物至血平板培养，并进行生化鉴定。

2 结果

2.1 细菌分离

从2只病死美洲红鹮的肝脏和肠道内容物、小黄鱼肠道中均分离出边缘光滑、中央凸起、白色的β型溶血性小菌落。

2.2 生化鉴定

经革兰氏染色镜检，细菌均为阴性短杆菌；经Biomerieux微生物鉴定仪，进行生化鉴定，细菌生化试验一致，均为嗜水气单胞菌。生化结果如表1。

2.3 药敏试验

利用比浊法在Biomerieux微生物药敏分析鉴定仪上，对该细菌进行药敏实验，判断细菌对19种常见药物的敏感性。结果一致，仅对哌拉西林、亚胺培南耐药，对阿莫西林/克拉维酸钾中介，对其余16种抗生素敏感，不属于耐药菌株(表2)。

表1 嗜水气单胞菌生化鉴定

Tab.1 The biochemical properties of Aeromonas hydrophila

续表1

表2 药敏试验

Tab.2 The results of drug sensitivity test

2.4 病理学观察

肠道：黏膜层可见多处不同程度的肉芽肿，肉芽底层可见纤维细胞，表层为炎性细胞，提示感染导致慢性肠道溃疡(图1)。

肝脏：多处静脉均见混合血栓，白色部位典型白色血栓结构，红色部有血小梁，网眼较宽，网眼内充满纤维蛋白和红细胞(图2)。

图1 肠道病理切片图(100×)箭头见肉芽肿Fig.1 Intestinal tract pathological inspection(100×)The arrow saw the granulomae

图2 肝脏病理切片图(100×)箭头见血栓Fig.2 Liver tract pathological inspection(100×)The arrow see thrombosis

2.5 小鼠致病性试验

攻毒组5只小鼠均在12～24 h内死亡，对照组小鼠未见临床症状。解剖攻毒组小鼠，可见肝脏血肿坏死，出血性肠炎，与死亡红鹮解剖症状基本一致。解剖对照组小鼠，未见异常。从攻毒组小鼠肝脏分离到细菌，经生化鉴定为嗜水气单胞菌。

3 讨论

本文通过对病死美洲红鹮的肝脏、肠道进行细菌分离，所分离菌株通过生化鉴定为嗜水气单胞菌。病死红鹮病理学诊断可见肝脏以血栓为主、肠道黏膜层多处出现肉芽肿。另外，在动物致病性试验中，小鼠死亡，并分离到该菌，进一步证实了美洲红鹮感染了具有致病性的嗜水气单胞菌。在药敏试验中，该菌仅对哌拉西林和亚胺培南产生耐药性，对阿莫西林/克拉维酸钾为中介，对其他16种抗生素均敏感，不属于耐药菌群。同时，值得引起注意的是在其食物——小黄鱼的肠道内容物中分离到具有致病性的嗜水气单胞菌，提示美洲红鹮可能采食了具有致病性嗜水气单胞菌的小黄鱼导致感染。

在野生动物中，嗜水气单胞菌可引起急性出血性败血症、肠炎等症状，也可与其他细菌发生混合感染。韦婷等[8]报道的长颈鹿爆发的细菌感染，确诊为嗜水气单胞菌和大肠杆菌混合感染所致。王永贤等[4]从腹泻的大熊猫粪便中分离到2株细菌，鉴定为嗜水气单胞菌DNA 1群和肺炎克雷白氏菌肺炎亚种。对死亡美洲红鹮进行病原菌分离鉴定未发现细菌混合感染的情况，结合解剖症状和病理学诊断，其临床症状以肝脏血栓、出血性肠炎为主。

嗜水气单胞菌既是条件致病菌，又是原发致病菌[9]。发病时，正处于天气较冷的时段，该群美洲红鹮在进入冬季时就出现食欲减少的现象，造成其机体抵抗力较差，加之食用了污染致病性嗜水气单胞菌的小黄鱼，促使了疾病的爆发。

美洲红鹮主要以甲壳类及小型的水生动物，小鱼、贝类为食物。随着黄鱼人工工厂化育苗的成功，黄鱼海水网箱养殖规模蓬勃发展，也有嗜水气单胞菌导致黄鱼的出血性肠炎的报道[10]。该群美洲红鹮，通过及时更换饲料，切断传染源，同时，加强了环境、水体的消毒，从而使病情得到了有效的控制。因此，饲养者不仅要定期检测淡水鱼，还要对海水鱼进行检验，防止将所携带的病原菌传播给珍惜禽鸟。

[1] 杨守明，王民生.嗜水气单胞菌及其对人的致病性[J].疾病控制杂志，2006，10(5)：511-514.

[2] 陆承平.致病性嗜水气单胞菌及其所致鱼病综述[J].水产学报，1992，16(3)：282-288.

[3] 吕爱军，李槿年，余为一.嗜温气单胞菌研究进展[J].中国动物检疫，2000(11)：42-43.

[4] 王永贤，杨云飞，杨玉钊，等.大熊猫嗜水气单胞菌和克雷白氏菌的分离鉴定[J].中国兽医科技，2002，32(2)：36-37.

[5] 赵传芳，闫新华，王长凤，等.北极狐嗜水气单胞茵的分离与鉴定[J].经济动物学报，2002，6(4)：12-13.

[6] 马再玉，张强，胡晓宁.海豹嗜水气单胞菌病的诊治[J].中国兽医杂志，2007，43(8)：82-83.

[7] 王建，沈莉萍，徐锋，等.企鹅源嗜水气单胞菌的分离鉴定[J].动物医学进展，2009，30(5)：114-116.

[8] 韦婷，冯加明，李华明.长颈鹿暴发细菌性感染的诊断[J].中国预防兽医学报，2000，22(6)：461-463.

[9] 沈锦玉.嗜水气单胞菌的研究进展[J].浙江海洋学院学报：自然科学版，2008，27(1)：78-86.

[10] 曹军，冯学芝，冯展波，等.大黄鱼致病性嗜水气单胞菌的分离与鉴定[J].湖北农业科学，2007，46(5)：808-810.