卡式微柱凝胶技术在血型鉴定及输血前红细胞不规则抗体检验中的作用

陈利红，杨浩莹,李玖平△

(1.陕西省汉中市第二人民医院检验科 723200;2.西安交通大学医学院附属三二〇一医院输血科，陕西汉中 723000)

不规则抗体指除抗-A和抗-B(ABO血型系统)以外的其他抗体，以Rh血型抗体最为常见[1]。不规则抗体是引起输血不良反应、疑难配血、血型鉴定困难及新生儿溶血疾病的主要原因，对于有妊娠史及输血史的患者，不规则抗体检验是预防新生儿溶血病及输血安全的重要手段[2]。抗人球蛋白法、聚凝胺法、蛋白酶法及盐水法等传统输血检验方法在配血的过程中需要反复洗涤红细胞，灵敏度低，影响因素多，耗时长且操作繁琐，严重威胁输血者的生命安全[3]。卡式微柱凝胶技术能够快速、准确地进行血型匹配，且血液样品需要剂量少、污染小，是一种灵敏、快速、安全的免疫检验血型血清的方法，现将卡式微柱凝胶技术检验红细胞不规则抗体的作用报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2014年10月至2015年10月在西安交通大学医学院附属三二〇一医院输血并行卡式微柱凝胶技术和聚凝胺法检验的1 175例患者不规则抗体及鉴定ABO和RhD血型。其中男632例，女543例；年龄15～66岁，平均(40.58±11.46)岁。纳入标准：(1)年龄15～67岁；(2)患者意识清醒无精神或神经性疾病；(3)临床资料完整。排除标准：(1)合并有原发性疾病抑制免疫功能；(2)严重心、肝、肾等重要脏器功能障碍；(3)严重血液科疾病；(4)依从性差无法配合治疗者。

1.2方法 输血前患者均在空腹状态下抽取2 mL外周静脉血，放入乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝真空无菌采血管。分别采用卡式微柱凝胶技术(研究组)和聚凝胺法(对照组)鉴定ABO和RhD血型及检验红细胞不规则抗体。具体方法如下。

1.2.1卡式微柱凝胶技术 采用江阴力博医药生物技术有限责任公司凝胶卡进行标记，用低离子溶液将3种谱红细胞配成0.5%～0.8%浓度，分别加入标记好的微管中，各50 μL。分离血浆，并分别于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔内加入50 μL血浆，然后在对应加入50 μLⅠ、Ⅱ、Ⅲ号不规则抗体筛查谱细胞(上海血液生物医药有限责任公司提供)，最后放入37 ℃孵育器中孵育15 min；使用专用离心机离心5 min：900 r/min离心2 min，1 500 r/min离心3 min，取出。观察结果，根据谱红细胞反应格局来判定结果，阴性结果：红细胞完全沉降于凝胶管底部，说明受血者和献血者交叉配血相合；阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中端，说明受血者和献血者交叉配血不相合；如果出现溶血现象，则也说明为阳性反应。卡式微柱凝胶技术ABO、RhD血型鉴定按说明书进行操作。

1.2.2聚凝胺法 采用珠海贝索生物技术有限公司生产的聚凝胺试剂盒，将3支相同试管分别标记为主测管、次测管和对照管。主测管：取1滴献血者3%～5%红细胞滴入受血者血浆中；次测管：取1滴受血者3%～5%红细胞滴入献血者血浆中；对照管：取1滴献血者3%～5%红细胞滴入阳性对照血浆中。在试管中分别计入0.65 mL低离子溶液和2滴凝聚胺溶液，混合均匀后，分别于室温下孵育1 min和15 s。3 400 r/min离心10 s，留取上清液0.1 mL，检测红细胞有无凝聚反应(若无则试验失败)。最后滴加复悬液2滴，混合均匀后倒在玻璃片上，显微镜或肉眼观察有无凝集，凝集表示献血者血液与受血者不合；无凝集表示适合。ABO、RhD血型鉴定按说明书进行操作。

1.3观察指标 (1)观察两种方法在ABO和RhD血型鉴定情况；(2)两种方法不规则抗体检出情况；(3)不规则抗体高危科室分布情况。

1.4统计学处理 采用SPSS20.0软件行数据分析处理，计数资料采用百分数表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两种方法在ABO和RhD血型鉴定情况比较 研究组ABO血型的一次性准确率为99.83%，高于对照组的98.72%，组间差异有统计学意义(χ2=8.532，P=0.002)；研究组RhD血型的一次性准确率为99.91%，高于对照组的99.32%，差异有统计学意义(χ2=4.015，P=0.039)。

2.2两种方法不规则抗体检出情况比较 研究组16例患者表现为阳性，阳性率为1.36%；对照组10例患者表现为阳性，阳性率0.85%，见表1。

表1 两种方法不规则抗体检出情况比较[n(%)]

2.3科室分布 26例不规则抗体阳性患者中血液科、肾病科和感染科共占21例(84.00%)，其他科室占5例(19.23%)；有输血史者22例(88.00%)，有妊娠史者12例(48.00%)。

3 讨 论

当输注的红细胞与患者血清中的免疫抗体不合时，会出现严重输血反应，所以在输血前对近期多次输血、有妊娠史、有输血史等类型的患者进行不规则抗体筛查非常重要[4-5]。传统的输血检测方法包括聚凝胺法、酶法及盐水法等，均具有人为影响因素多、不容易被标准化、自动化程度低、操作过程繁琐及最低检测限高等缺点。众所周知，需要输血者往往是危急重病患者，输血不及时轻则致残、重则致死；而如果血型不匹配，则会发生抗凝现象，导致血管内栓塞甚至心血管疾病，后果更为严重，因此患者受血前进行准确快速的血液配对试验是重中之重[6-7]。为降低输血反应的发生率，美国血库协会(AABB)规定交叉配血前必须对红细胞抗原中的不规则抗体进行检测[8]。

不规则抗体造成的输血反应以免疫溶血反应最多，是较为严重的输血反应，且该抗体多为IgG单倍体，本研究两组患者检出的不规则抗体抗-D、抗-E、抗-e、抗-C、抗-c均属于IgG抗体。IgG抗体是温抗体类型，抗体分子长度为24 nm，由输血或妊娠等免疫刺激产生，对相应的红细胞有致敏作用，且输血过程中发生的输血反应与IgG效价的强弱有直接关系，迟发性溶血性输血反应便是由IgG抗体引起的。经过检测，研究组和对照组不规则抗体阳性率分别为1.36%和0.85%，与李慧等[9]报道的结果(1.03%)相似，其中研究组阳性率较高的是抗-D和抗-E抗体，分别为0.34%和0.43%，与长期临床实践中溶血性输血反应抗-E抗体居首位，抗-D次之的结果相一致[10-11]，证明了本研究结果的真实性。对照组不规则抗体阳性检出率仅为0.85%，考虑与IgG抗体分子链短小，无法有效凝聚有关。

聚凝胺主要通过低价离子介质将红细胞表面负电荷破坏并凝集在一起，凝聚液加入后，凝集不散开则表示为特异性，散开表示为非特异性。但是聚凝胺法的结果会受多种因素的影响，如液体加入量的多少，存放时间的长短等[12-13]。作为新型的血清血型配对方法，卡式微柱凝胶技术能够与系统调控的离心速率配合，在细小的凝胶颗粒滤网下，快速分离非凝结和凝结的红细胞，且每个微柱孔径只允许通过1个红细胞，如果红细胞凝结成块则无法通过，留于凝胶之上以显示阳性结果，反之则为阴性[14]。卡式微柱凝胶技术的灵敏度与传统的检验方法比较，均高出1～5个滴度，还能够同时检验出IgM、IgG，捕捉到非常微弱的抗原抗体反应。祁琳等[15]学者对微柱凝胶和凝聚胺法的敏感度进行测验，结果显示，前者的敏感度为100.00%，后者为88.00%。所以，卡式微柱凝胶的结果准确性高，为临床输血安全带来了极大的保障。

本研究26例不规则抗体阳性患者中，血液科、肾病科和感染科共21例(84.00%)，其他科室5例(19.23%)，表明这些科室为本院的高危科室。经过调查，以上科室出现不规则抗体的原因均与患者自身慢性病引发贫血有一定的相关性。如血液科患者由于各种血液病的关系，长期贫血，需要输血支持治疗。肾病患者，尤其是肾病终末期者体内常会聚集大量毒素，促红细胞生成素也会因此而缺失，最终导致贫血症状。感染肝炎病毒的患者，机体本身抗体长时间受慢性病毒刺激；肝硬化患者尤其是慢性肝硬化患者，常会因红细胞不能上升而要求医生多次帮其输注血液。每输注1单位血浆或红细胞，患者便要承担至少1%的红细胞致敏风险，而多次输血之后，同种抗体发生率便会上升至20%左右[16]。

综上所述，卡式微柱凝胶与传统不规则抗体检验方法比较，可以有效避免试验过程中生物污染的发生，提高了血型鉴定准确率，操作流程简单，灵敏度高，检验结果能够长时间于室温下保存，方便病理回顾研究，可在临床推广使用。

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