附子理中汤对失血性低血压大鼠血压、心率及相关氧化应激因子的影响*

邹俊驹 陆雅婷 吴佳敏 戴玉微 欧阳建军 赵国荣 贺又舜

（湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）

附子理中汤在方剂学中归为温里剂，是在温法的理论指导下，以温里药为主，可温阳祛寒，系治疗里寒证的方剂。所谓温法，是建立在温热性方药的基础上，温煦阳气，以达到驱里寒的一种疗法 ，可用于治疗阳气不足所致的阴寒内盛所致的里寒证。附子理中汤源于理中汤的化裁而来，想了解其作用特点与组方的配伍，其量效关系至关重要［1］。温里剂多出于张仲景《伤寒论》《金匮要略》，经方组方的法度严谨，临床疗效确切，毒副作用小，沿用千年，至今不衰，然而如何把握其中药物量-效-毒之间的关系，均需考虑剂量折算问题，附子的用量问题就是一个很好的依据。火神派吴佩慈先生对大剂量应用附子也有自己的认识：“病至危笃之时，处方用药非大剂不能奏效”。因此，在验证经方量与效的关系时，现代科学技术的运用必不可少，从多角度多方位分析其量-效-毒之间的关系，对中医药关于方剂配伍的君臣佐使之间关系的肯定和配伍之间剂量变化所产生的药物作用均具有重要的意义，通过对量-效-毒关系的研究，有利于阐明中药与中药之间的配伍机制，提高临床的疗效，保证用药安全，为中医急救期间由于量-效-毒的问题提供些许帮助［2］。 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 雄性Wistar大鼠，体质量（300±10）g，由湖南斯莱克景达动物有限公司提供，实验动物生产许可证号SCXK（湘）2013-0004，所有大鼠放入SPF级动物房进行饲养，控制室温（25±1）℃，控制湿度（55±1）%，动物房自然昼夜节律（12 h～12 h），适应性饲养 1周以上，实验前12 h予以禁食，不禁水。

1.2 试药与仪器 附子理中汤由制附子、人参、茯苓、炒白术、干姜组成，所有药材购于湖南中医药大学第一附属医院。 附子理中汤（LZT）［3］：制附子 9 g，人参 9 g，干姜9 g，炙甘草9 g，白术9 g。首煎：附子加水适量先煎30 min，后下诸药再煎20 min。倒出，复煎：加水适量煎煮30 min，倒出，2次药混一起4层纱布滤过，浓缩至4 g/mL（每毫升含生药4 g），保存于4℃冰箱中。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、环磷酸腺苷（cAMP）酶联免疫试剂盒，长沙丽欣生物技术有限公司；RM6240BD型多道生理信号采集系统，成都泰盟科技有限公司；Humalyzer2000型半自动生化分析仪；Multiskan FC酶标仪，美国Thermo Scien-tic日本仪器有限公司。

1.3 分组与造模 将40只大鼠按随机数字表法分为4组，即模型组，LZT高、中、低剂量组，每组10只。各组动物于造模成功后经十二指肠灌胃相应药液，给药剂量根据《中药药理实验方法学》［4］中人与动物用药量体表面积换算法折算大鼠剂量，LZT高剂量组：9.46 g/kg，LZT中剂量组4.73 g/kg，LZT低剂量组2.37 g/kg。模型组灌胃等体积蒸馏水。实验前12 h大鼠予以禁食，不禁水，大鼠称重后用10%乌拉坦12 mL/kg麻醉。背位固定于操作台上，手术部位去毛、消毒，开腹，在幽门下找出十二指肠；聚乙烯管插入肠管中并固定于腹壁，留置供给药用；将气管与迷走神经分离开；分离右侧颈总动脉，颈总动脉切口，插入一根PE50聚乙烯管，以三通活塞连接多导生理记录仪的压力、心率传感器，观察收缩压（SBP）、舒张压（DBP）及心率（HR）变化；右侧腿部去毛，消毒，切口；分离右侧肢股动脉；股动脉切口，插入一根PE50聚乙烯管放血，监测血压、心率变化，待 MAP 稳定至 30～40 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa），维持20 min，即为模型成功标准，即刻结扎止血；观察给药后 3 h 血压、呼吸、心电变化［5-6］。

1.4 标本采集与检测 以多道生理信号采集系统描记试验全程血压、心率，并分析所有图形数据。血清酶学检查：实验结束后各组大鼠腹主动脉取血（约4 mL），离心 15 min（3000 r/min，40℃），取上清放入-20℃冰箱冻存备用。测定血清中MDA、SOD、cAMP的含量，具体操作按照试剂盒说明书进行。

1.5 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件。各组数据以（±s）表示，采用 Student-Newman-Keuls 检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 附子理中汤对失血低血压大鼠的比较 见图1，表1。基础SBP各组间比较差异无统计学意义 （P＞0.05）。放血后大鼠SBP明显下降，给药前SBP各组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）；给药3 h后LZT中、低剂量组SBP与模型组比较明显升高 （P＜0.01），LZT高剂量与模型组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

图1 各组大鼠血压图

2.2 附子理中汤对失血性低血压大鼠DBP的影响

见图1，表1。基础DBP各组间差异无统计学意义。放血后大鼠DBP明显下降，给药前和给药3 h后LZT各剂量组DBP与模型组差异无统计学意义（P＞0.05）。

表 1 各组大鼠收缩压（SBP）、舒张压（DBP）的比较（mmHg/s，±s）

表 1 各组大鼠收缩压（SBP）、舒张压（DBP）的比较（mmHg/s，±s）

与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

组 别 n 收缩压（SBP） 舒张压（DBP）正常组 10 127.8±7.29** 103.05±7.38**模型组 10 32.68±2.74△△ 29.17±1.29△△LZT 高剂量组 10 92.93±2.52**△△ 80.95±1.65**△△LZT 中剂量组 10 80.59±1.43**△△ 76.82±1.41**△△LZT 低剂量组 10 50.59±5.12**△△ 42.95±2.51**△△

2.3 LZT对失血性低血压HR的比较 见表2。放血后大鼠HR明显减慢，基础HR及给药前HR各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。给药3 h后LZT低剂量组HR与模型组比较显著增快（P＜0.01），LZT中、高剂量组HR与模型组比较显著增快（P＜0.01）。

表 2 各组大鼠心率（HR）的比较（次/min，±s）

表 2 各组大鼠心率（HR）的比较（次/min，±s）

组 别 n 心率（HR）正常组 10 394.66±9.07**模型组 10 240±6.24△△LZT 高剂量组 10 324.00±8.892**△△LZT 中剂量组 10 272.679±5.06**△△LZT 低剂量组 10 245.00±6.24**△△

2.4 LZT对失血性低血压大鼠氧化应激的影响 见表3。与正常组比较，模型组血清MDA含量显著升高，SOD、cAMP含量显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，LZT中、高剂量组血清SOD水平显著升高（P＜0.01），低剂量组血清SOD水平差异无统计学意义（P＞0.05）；与模型组比较，LZT中剂量组血清cAMP水平显著升高（P＜0.01），高剂量组有差异（P＜0.05），低剂量组血清cAMP水平无差异 （P＞0.05）；与模型组比较，LZT中剂量组血清MDA水平显著升高（P＜0.01），低剂量组血清MDA水平差异无统计学意义（P＞0.05）。

表 3 各组大鼠 SOD、MDA、cAMP的比较（±s）

表 3 各组大鼠 SOD、MDA、cAMP的比较（±s）

组 别 n SOD（U/mg）正常组 10 122.45±4.75**模型组 10 54.48±5.91△△LZT 高剂量组 10 90.65±5.09**△△LZT 中剂量组 10 80.20±6.07**△△LZT 低剂量组 10 59.37±4.71△△cAMP（nmol/L） MDA（nmol/mg）11.81±6.12** 4.21±0.54**27.76±1.28△△ 22.58±5.12△△23.09±1.63*△△ 11.50±1.53**△△19.35±1.26**△△ 14.12±0.91**△△32.14±1.54△△ 23.64±2.50△△

3 讨 论

附子理中汤出自《三因极一病证方论》，由《伤寒论》中的理中丸加附子而成，由制附子、人参、炒白术、干姜、炙甘草组成，具温阳祛寒、益气健脾之功，临床主要用于脾胃虚寒而导致的脘腹冷痛、呕吐泄泻、手足不温等一派虚寒之象。方中以大辛大热之干姜为君，温胃散寒，扶阳抑阴；人参，补气健脾；炮附子，大辛大热之品，温经济阳，以救欲绝之阳；参附相配，可复脉固脱，回阳救逆，佐以甘温苦燥之白术，健脾益气，配以炙甘草为使，以助参附术益气之功，调和诸药，降低附子之毒性。该方虽是在理中丸的基础上加上了附子，对其进行剖析，其中有四逆汤、参附汤亦或是独参汤的思想含义在内，对元阳虚脱脉微欲绝者不失为回阳救逆之要剂，而且这类方剂在古代中医临床急救中具有十分重要的地位，《校注妇人良方》卷三更是指出凡气虚卒中，不语口噤；或难产，产后不省，喘息者用独参汤主之，如不应，急加炮附子徐徐服之，元气大亏，阳气暴脱，喘息脉微，吐血咯血等；《医方类聚》卷一使用参附汤来治疗元气大亏，阳气暴脱，汗出厥逆，喘促脉微的患者；《伤寒论》中以四逆加人参汤来治疗阳虚血脱之人。

叶蜀晖等发现附子的强心作用在临床上对慢性充血性心力衰竭患者疗效颇佳，药理学研究中发现制附子具有强心作用［7］，王胜林等发现附子能显著增强慢性心力衰竭模型动物的心脏收缩力，并具有一定的剂量依赖性［8］。邓家刚等研究发现附子对阳虚型小鼠和离体衰竭的蛙心具有回阳救逆的效果，起到强心的作用，并存在量-效关系，附子总生物碱可缓解心肌缺血小鼠的心肌损伤，其调节机制可能与能量代谢和消除氧自由基损伤等有关［9］；人参皂苷能通过提高机体内S0D、CAT、GSH-Px等的活性， 减少LPO、MDA 等的含量［10］，并且对血压具双向调节作用，Robert等发现 Rc可减少缺氧大脑和心肌的乳酸量，并使心肌cAMP/cGMP恢复正常范围，对心肌细胞的内皮细胞具有保护作用［11-13］；周静等发现干姜水煎液对急性心肌缺血大鼠 AngⅡ、TNF-α、MDA、NO 均有一定调控作用，证明干姜能改善急性心肌缺血大鼠的心功能，缓解其缺血缺氧状态，发挥“回阳通脉”功效［14］；胡因铭等发现炙甘草汤能显著降低再灌注心肌组织中MDA含量，增强 SOD 的活性［15］。

因血压低的原因，导致远端毛细血管因血液循环慢而产生了缺血，组织内细胞的氧气、营养的供给和新陈代谢过程受到影响。失血性低血压的动物模型建立在大量失血的情况下，失血过多易导致失血性休克，全身有效循环血量和组织灌注不足，出现一系列由于缺血引起的急性临床综合征。在大失血情况下，组织细胞缺血缺氧、代谢产物储留，使自由基产生和释放平衡打乱［16-17］，临床上表现为 MDA、cAMP 含量增多，SOD含量减少，组织细胞损伤。MDA是脂质过氧化产物之一，其水平高低反映脂质过氧化程度，同时还间接反映机体自由基损伤程度［18］。SOD为细胞内一种抗氧化酶，为清除生物体内氧自由基的首要物质，可抵抗氧自由基由于堆积对细胞造成的损害，还可及时修复受损细胞［19］。李科民等发现心力衰竭患者心肌cAMP含量与心力衰竭成反比，而血液中cAMP含量则成正比［20-21］。

实验结果显示，大鼠在失血过多的情况下导致的血压低至40 mmHg，心率明显下降，在紧急缺血的状态下循环血量大大下降，心肌缺血导致严重缺氧，SOD含量骤降，随之MDA与cAMP的含量显著升高，这些指标均说明了在缺血的情况下心肌细胞受到了极大的损害，表明模型成功；在成模20 min后，分别给予LZT高、中、低剂量进行干预，各组指标均有所改善，虽未能达到正常状态，但是可缓解由于缺血导致的机体损伤。高剂量对收缩压、舒张压与心率的作用最显著，其次到中剂量，低剂量效果不明显；在氧化应激的调节方面，LZT中、高剂量组可以增加SOD的含量，降低MDA与cAMP的含量，而低剂量组没有效果，可能跟附子理中汤的剂量有关。本研究表明附子理中汤在一定剂量下能改善失血性低血压大鼠血压与心率；增加SOD生成，减少MDA与cAMP的生成，通过增加氧化应激的能力，降低脂质过氧化损伤，明显改善失血性低血压大鼠的缺血、缺氧状态下所造成的损伤。本实验初步探讨了附子理中汤对失血性低血压大鼠血压、心率和氧化应激相关因子的影响，但是其具体作用机制还不明确，有望进一步探讨其保护作用及具体的机制。

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