贝牡莪消丸对PTU致甲状腺肿伴甲减大鼠TSH值及行为学方面的影响

杜丽坤,杨超

(1.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

结节性甲状腺肿是一种常见的良性甲状腺疾病，多是由于甲状腺良性上皮细胞增生太过而形成[1]。本病发病率约为7%以上[2]，其中甲状腺癌的比例为5%～15%左右，其影响因素多为年龄、自身免疫、放射线接触史、碘摄入、遗传及其他[3]。以女性和老年人群发病率高，多表现为不同程度的甲状腺肿大,发病之初多为单个结节，随着病情进展，可触摸到多个结节, 大小不等，形态各异，患者仅有颈部不适感，甚至无自觉症状。中医内科将甲状腺结节归为 “瘿病”的范围，“瘿”之称呼源自于战国《庄子 德充符》。《外科正宗·瘿瘤论》认为：“夫人生瘿瘤之症，非阴阳正气结肿，乃五脏浊气、瘀血、痰滞而成”[4]，认为气滞、血瘀、痰凝壅结于颈前乃本病的基本发病机理[5]。大量医学研究报告显示，以辨证论治及整体调节为基础的中医药疗法，在治疗甲状腺疾病方面有重要临床意义，能从根本上改善患者体质，药物敏高度高，疗效显著。本文用PTU造成大鼠甲状腺肿伴甲减的模型，观察贝牡莪消丸、优甲乐对甲状腺肿伴甲减大鼠TSH的恢复情况并进行疗效对比，评价两种药物在甲状腺肿伴甲减大鼠空间认知能力、探究行为、视觉记忆等方面的影响。旨在论证贝牡莪消丸治疗甲状腺肿伴甲减的作用机理，为其更好应用于临床提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 动物

40只SPF级健康雄性SD大鼠，体质量(123±8.5)g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，随机分为8笼，每笼5只。

1.2 药品

贝牡莪消丸(浙贝母30 g、莪术20 g、牡蛎30 g、玄参20 g、夏枯草20 g)由黑龙江中医药大学附属第一医院制剂室提供，每只大鼠2 ml，每日1次灌胃；PTU(上海朝晖药业有限公司，50 mg×100片/瓶，批准文号：国药准字H31021082)；优甲乐(德国默克公司，50 μg×100片/瓶，批号H20140052)。

1.3 试剂

TSH放免试剂药盒购于北京北方生物技术研究所有限公司(货号：E-EL-R0976c)。

1.4 仪器

BS223S天平，低温冰箱，Gc-1500型γ放射免疫计算器，光镜，旷场场箱。

1.5 方法

造模：选取40只SD大鼠，喂养1周后，随机选取10只作为空白组，给予生理盐水2 ml/d。其余30只予以PTU 0.15 mg/g，每日1次，连续灌胃40天。40天后利用彩色多普勒判断，模型均制备成功。造模成功后，将30只大鼠随机分为3组，即模型对照组、贝牡莪消丸组、优甲乐组，分别给予生理盐水(2 ml/d)、贝牡莪消丸(3 ml/d)、优甲乐(0.08 μg/g)。给药30天后，以10天为一个周期，分别于给药前、给药10天后、给药20天后、给药30天后，进行大鼠行为学指标检测(敞箱实验)及新奇事物认知试验检测，并于给药30天后处死大鼠，镜下观察大鼠甲状腺细胞形态，并取血清测定TSH。

敞箱实验：(又称旷场实验)旷场场箱采用长100 cm，宽100 cm，高50 cm的木板，箱内壁全部涂黑。箱底均分为25个正方格(长20 cm，宽20 cm)，沿箱底周围依次编号，其中序号1～16均为外周场区，序号17～24均为中央场区，25为正中央场区称为正中格。实验时捏住大鼠尾巴根部将其轻放入25号正中格中，观察4 min内活动情况，依次逐个测定其余大鼠，并于每次测定结束后清除箱内动物排泄物。统计各只大鼠正中格停留时间、穿格总数、直立次数。

新奇事物认识试验：在试验前5天，每日在鼠笼中放置2个物体，允许大鼠探究2 h，每天1次。试验时，将大鼠单独放入一鼠笼中，同样放置2个物体，一个与试验前探索相似，另一个为新物体，允许探索4 min，依次逐个测定其余大鼠。统计各个大鼠探索新奇物体的时间与总时间，并计算两时间之比。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 贝牡莪消丸和优甲乐对甲状腺肿伴甲减大鼠TSH值的影响

由表1可见,与空白组相比，模型对照组的TSH值明显增高(P<0.05)；而与模型对照组比较，贝牡莪消丸组的TSH值明显降低(P<0.05)。

表1 贝牡莪消丸和优甲乐对甲状腺肿伴甲减 大鼠TSH值的影响

注：与空白组比较，#P<0.05；与模型对照组比较，*P<0.05

2.2 贝牡莪消丸和优甲乐对甲状腺肿伴甲减大鼠行为学方面的影响

2.2.1 敞箱实验-正中格停留时间

如表2所示，给药20天后贝牡莪消丸组与模型组相比在正中格停留时间显著减少，具有统计学意义(P<0.05)，给药30天后其正中格停留时间较前几组有下降趋势，说明应用贝牡莪消丸治疗后，甲减模型大鼠异常空降认知能力得以明显缓解。

表2 贝牡莪消丸和优甲乐对甲状腺肿伴甲减大鼠敞箱实验-正中格停留时间的影响

注：与空白组比较，#P<0.05；与模型对照组比较，*P<0.05

2.2.2 敞箱实验-直立次数及穿越格数

如表3所示，大鼠直立次数及表4大鼠穿越格数所示，空白组、模型组、优甲乐组、贝牡莪消丸组在各个给药周期均无明显差异，提示空白组、模型组、优甲乐组、贝牡莪消丸组大鼠对陌生环境探究活动未见明显异常。

表3 贝牡莪消丸和优甲乐对甲状腺肿伴甲减大鼠敞箱实验-直立次数的影响

表4 贝牡莪消丸和优甲乐对甲状腺肿伴甲减大鼠敞箱实验-穿越格数的影响

2.2.3 新奇事物认识试验-总时间及新事物优先指数

如表5所示，优甲乐组在给药10天后及给药20天后与空白组、模型组相比总时间显著增加，差异具有统计学意义(P<0.05)，给药30天后与模型组相比总时间显著增加，差异具有统计学意义(P<0.05)。如表6所示，优甲乐组在给药30天后与模型组相比显著减少，差异具有统计学意义(P<0.05)，说明空白组、模型组、贝牡莪消丸组大鼠在事物认知上未见明显异常。

表5 贝牡莪消丸和优甲乐对甲状腺肿伴甲减大鼠新奇事物认识试验-总时间的影响

注：与空白组比较，#P<0.05；与模型对照组比较，*P<0.05

表6 贝牡莪消丸和优甲乐对甲状腺肿伴甲减大鼠新奇事物认识试验-新事物优先指数的影响

注：与空白组比较，#P<0.05；与模型对照组比较，*P<0.05

3 讨论

甲状腺是人体最大的内分泌腺,是人体内必不可少的器官[6-7]。甲状腺疾病是内分泌系统中的一种常见疾病，由于生活环境的变化，近年来甲状腺疾病的发病率持续上升，而结节性甲状腺肿是其中较为常见的疾病[8]。患者常常没有自觉症状，多是在体检时经触诊和检测后发现，其中经过触诊而发现的甲状腺结节约占4%，在甲状腺结节的影像学检查中超声占首要地位，其检出率约为17%～67%[9-11]，本病可由缺碘、辐射、细胞因子、遗传因素等引起[12-14]。对于本病，西医预防应做到补充足量碘元素、缓解压力，舒畅情绪、早戒烟、以及及早进行甲状腺超声检查等方面，西医治疗多采用药物和手术治疗，其中手术治疗的复发几率高达18%～30%[15]，而甲状腺激素是目前治疗甲状腺结节最为常用的药物，并且能改善血液中TSH偏高的状态，但一方面长期服用甲状腺激素副作用大，可能会影响甲状腺正常的生理功能，并诱发动脉纤维化以及骨质疏松，另一方面激素替代疗法应用于临床时，会因患者的个体差异较大，给药剂量难以把握，若剂量补充不足，则效果欠佳，若剂量补充过量，则易导致甲亢并且增加心血管风险，尤其是对于患有心血管疾病的老年患者，一旦出现不良反应，须停药终止治疗，可见其临床应用之局限性[16-17]。

本实验应用PTU作用于大鼠的下丘脑-腺垂体-甲状腺轴系统，通过抑制甲状腺分泌甲状腺激素使大鼠体内产生负反馈调节，促进体内分泌更多的TSH，TSH升高作用于甲状腺，使其肿大，而作为体内最重要内分泌腺体之一的甲状腺通过代偿性增大来分泌更多的甲状腺激素来补充自身的不足，以上双重原因以致甲状腺肿，可见应用TSH抑制药物是治疗本病的手段之一，或者说TSH可以作为衡量本病治疗进展的一项指标。单纯从TSH抑制角度来说，易氏主张从“肾”论治，选用肾阳虚之主方右归丸抑制亚临床甲减患者的TSH，临床疗效显示甲减患者临床症状改善显著并且TSH水平明显下降[18]。潘氏应用温肾方改善亚临床甲减雌鼠的TSH水平，实验证明温肾方能使过高TSH水平抑制，使之明显下降，临床疗效显著[19]。刘氏自拟方剂益元瘿消汤作用于甲减大鼠，经过试验证明其有类甲状腺激素作用，可使TSH明显下降，能够有效调整下丘脑-腺垂体-甲状腺轴系统，预后良好[20]。

敞箱实验又称旷场实验，以通过实验动物在新异环境中某行为发生频率与持续时间来评价其自主行为，探究行为及紧张度的一种方法。甲状腺激素的合成过程需甲状腺内氧化物酶的参与，而PTU正是有抑制次酶的作用，从而阻止甲状腺内酪氨酸碘化及碘化酪氨酸缩合，致甲减的发生。甲减时，体内甲状腺激素水平下降，可出现中枢神经功能异常，如空间认知能力下降，探究性为异常，视觉记忆减退等。因此探究甲减大鼠的认知行为，评价甲状腺激素与大鼠认知行为的关系，有助于阐明认知功能障碍的机制，为治疗认知功能障碍提供新线索。本实验通过对贝牡莪消丸与优甲乐在甲状腺肿伴甲减大鼠行为学方面的影响，得出应用贝牡莪消丸治疗后大鼠异常空间认知能力得以缓解，有一定临床意义。

中医药治疗结节性甲状腺肿伴甲减历史悠久，累积了丰富的经验，大多数医家应用含碘量丰富的药物，如海藻、昆布、贝母、牡蛎等治疗本病[21]。杜丽坤教授在总结前人经验基础上提出以“活血行气、消瘿散结”为治疗方法，针对其气滞、痰凝、血瘀的主要病机，拟方贝牡莪消丸，标本同治，其中贝母、莪术清热化痰，消肿止痛，破血行气；牡蛎、夏枯草软坚化痰，清肝泻火，散结消肿，收敛固涩；玄参清热凉血，滋阴解毒。本方寒温并调，气血并调，咸味药和辛味药联合应用，共奏活血行气、消瘿散结之功效。中药能够作用于多系统，多器官，具有副作用小，多靶点，疗效持久等优势，因此应用贝牡莪消丸治疗甲状腺肿伴甲减患者临床疗效更为明显。根据实验结果，PTU能够导致大鼠的甲状腺肿大伴甲减，贝牡莪消丸可以促使甲状腺肿伴甲减大鼠的TSH值明显降低，显著改善甲减大鼠异常空间认知能力。综上所述，贝牡莪消丸在缩小甲状腺结节、改善甲减症状等方面可取得较满意的效果，有较好的发展前景。

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