CD147在涎腺粘液表皮样癌中的表达及意义

廖垠林 黎明（通讯作者）

（1达州市中心医院口腔科 四川 达州 635000）（2昆明医科大学附属口腔医院 云南 昆明 650031）

粘液表皮样癌是最常见的涎腺恶性肿瘤，在涎腺上皮性恶性肿瘤中约占30%[1]。本研究采用免疫组化SP法检测CD147蛋白在粘液表皮样癌组织中的表达，探讨其临床病意义。

1.标本来源

收集1991年1月—2011年3月在昆明医科大学附属口腔医院口腔颌面外科行手术切除后的涎腺组织存档的石蜡切片标本，共52个，其中，涎腺粘液表皮样癌组织32例，正常涎腺组织20例。涎腺恶性肿瘤发生于大涎腺者（腮腺、颌下腺及舌下腺）24例，发生于小涎腺者（腭腺、唇腺、颊腺及磨牙后腺）8例；年龄14～78岁，平均46岁；肿瘤直径≤2cm者20例，＞2cm者12例；伴有癌细胞侵润周围组织者25例，伴有淋巴结转移者7例。

1.2 主要试剂

兔抗人CD147多克隆抗体，购自北京博奥森生物技术有限公司，超敏链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(S-P法)免疫组化试剂盒：购自福州迈新生物技术开发公司；

1.3 实验方法

免疫组织化学染色方法（VltrasensitiveTM S-P免疫组化）依据试剂盒说明书进行。取冻存的部分涎腺肿瘤组织行石蜡包埋，石蜡块作4μm 切片供免疫组织化学染色。SP免疫组织化学法检测涎腺肿瘤标本中CD147的表达，CD147抗体浓度配制为原浓度的1/300倍。以PBS代替一抗作为阴性对照。用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 判断标准

HE染色切片由两名病理科主任医师读片证实诊断，在带有moticam2005医学图像分析系统的显微镜下观察并采集图像，每例随机观察高倍镜下200个肿瘤细胞，CD147阳性表达根据阳性细胞染色程度和百分率进行半定量结果判定。CD147主要定位于细胞膜，以细胞膜和/或细胞质呈棕黄染色为阳性，无阳性细胞记0分，阳性细胞数1%～25%记1分，26～50%记2分，51%～75%记3分，≥76%记4分；胞浆和/或胞膜基本不着色记0分，染色棕黄色计1分，染色棕色计2分，染色棕褐记3分。评价方法：每张切片以阳性细胞百分率和染色程度两项得分乘积分数分为4级，即阴性(-)为0～1分，弱阳性(+)为2～3分，阳性(++)为4～6分，强阳性(+++)为≥6分。所有染色结果均用双盲法测定。

1.5 统计学处理

采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学处理，CD147在粘液表皮样癌和正常唾液腺组织的不同表达采用χ2检验，CD147的表达与临床病理特征的相关性用spearman等级相关检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 CD147在正常唾液腺组织和粘液表皮样癌中的表达

CD147蛋白在正常涎腺组织中主要表达于分泌管上皮细胞的细胞膜和细胞浆，呈弱阳性染色，正常腺泡细胞不表达（图1）。CD147在涎腺粘液表皮样癌中的表达主要为肿瘤细胞的细胞膜和细胞浆染色，以黏液细胞和表皮样细胞为主（图2)。

图1 正常涎腺组织

图2 涎腺粘液表皮样癌

2.2 CD147在涎腺粘液表皮样癌组织中的表达结果

CD147在正常涎腺组织中CD147阳性表达率为10.0%(2/20)；在32例涎腺粘液表皮样癌中CD147（-）6例，（+）9例，（++）12例，（+++）5例，阳性表达率为81.1%(26/32)。涎腺粘液表皮样癌中CD147的表达高于正常涎腺，CD147阳性表达率在正常涎腺组与涎腺粘液表皮样癌组之间差异有统计学意义(Z=-6.495，P=0.000＜0.05)。

2.3 CD147表达与MEC临床病理特征之间的关系

CD147在癌细胞侵犯周围组织的MEC阳性表达率为92.3%(12/13)，CD147在癌细胞未侵犯周围组织的MEC阳性表达率为73.7%(14/19)。CD147在MEC中的表达与癌细胞侵犯周围组织显著相关(P=0.014＜0.05)；在粘液表皮样癌组织中CD147蛋白的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤原发部位、淋巴结转移等均无关(均P＞0.05)。

3.讨论

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN/CD147）是一种高度糖基化的跨膜蛋白，广泛表达于肿瘤细胞表面，可刺激肿瘤周围间质细胞产生基质金属蛋白酶，从而降解细胞外基底膜和间质成分，从而促进肿瘤的侵袭和转移[2]。

本实验结果显示，CD147在粘液表皮样癌组织中的阳性表达率明显高于正常涎腺组织中的表达。以往研究表明，CD147在肿瘤的演变过程中起着十分关键的作用[3]。本实验结果表明，在癌细胞侵犯周围组织的粘液表皮样癌组织中CD147表达较无癌细胞侵犯周围组织者明显升高，差异有统计学意义(P=0.014＜0.05)，说明CD147与粘液表皮样癌的侵袭性密切相关。

本实验结果表明，CD147在涎腺粘液表皮样癌组织中有特异性表达[4]。结合有关实验结果，我们可以推测在涎腺粘液表皮样癌的治疗中用siRNA干扰CD147的表达，可以抑制肿瘤细胞的恶性行为，同时还可以增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。这将为涎腺恶性肿瘤的治疗提供一个新的策略与方向。

[1]于世凤口腔组织病理学[M]第4版.北京:人民卫生出版社.2000:250-253.

[2]Suzuki S，Sato M，Senoo H，et al.Direct cell-cell interaction enhances pro-MMP-2 production and activation in co-culture of laryngeal cancer cells and fibroblasts:involvement of EMMPRIN and MT1-MMP[J].Exp Cell Res，2004，293(2):259-266.

[3]Lim M，Martinez T，Jablons D，et al.Tumor-derived EMMPRIN (extracellular matrix metalloproteinase inducer)stimulates collagenase transcription through MAPK p38[J].FEBS Lett，1998，441(1):88-92.

[4]杨新杰，雷德林，张圃，等.CD147和MMP-2、VEGF在腺样囊性癌侵袭转移中的作用[J].实用口腔医学杂志，2009，25(3):372-376.