白花九里明镇痛和抗炎效果的实验研究

申璐，刘桂彪，黄文飞，张铭锋，杨园园，黄剑秋，郭莹，闭丽华，王保山，王彩冰

（1.右江民族医学院2014级临床医学专业本科，广西 百色 533000；2.右江民族医学院2012级临床医学专业本科，广西 百色 533000；3.右江民族医学院2013级临床医学专业本科，广西 百色 533000；4.右江民族医学院2014级中药学本科，广西 百色 533000；5.右江民族医学院生理学教研室，广西 百色 533000）

白花九里明[Blumea megacephala（Randeria）]是广西壮族民间常用的药物，据民族药物书籍记载和壮族民间药用，具有治疗风湿骨痛、跌打肿痛、产后流血、月经不调等症候[1-2]。近年研究发现，白花九里明有护肝、增强小肠运动、抑制心肌收缩力、降血压、缩短出血时间和凝血时间等作用[3-7]。本实验采用白花九里明的壮族民间口服用量换算为小鼠用量给小鼠灌胃，采用冰醋酸扭体法观察其镇痛效果、采用二甲苯耳廓肿胀法观察其抗炎效果，并与临床常用于镇痛抗炎的阿司匹林（根据人用量换算成小鼠用量[8]）给小鼠灌胃进行药效的比较分析，为白花九里明的药用开发和利用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物及饲养环境 健康KM小鼠100只，雌雄各半，体质量25～30 g,由右江民族医学院动物实验中心提供（实验动物使用许可证号：SYXK桂2011-0010）。小鼠饲养环境为日光照12 h、室温18～22 ℃、湿度50%～60%。

1.2 药材、实验器材 白花九里明采于广西百色市郊，晒干备用。0.9%NaCl注射液（贵州天地药业有限责任公司，批号：A15031618）；阿司匹林（云南白药集团股份有限公司，批号：ZJA1405）；二甲苯（广州新建精细化工厂，批号：20060322）；冰醋酸（天津化学试剂有限公司，批号：GB/T 676-90 XK13-201 0315 002Ⅱ）；打孔器（山东省医学科学院设备站，型号：YLS-Q4）；电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，型号：GB/T23111）。

1.3 白花九里明提取液的制备过程 取白花九里明干草300 g，用30℃温水3 000ml浸泡4 h，文火煮沸1 h，过滤液隔水文火浓缩至300ml原液（浓度为1 g/ml）放4℃冰箱保存。用时将原液用双蒸水分别配成300mg/ml、600mg/ml的白花九里明提取液。

1.4 动物分组与给药 取KM小鼠100只随机均分为致痛和致炎两个大组，每大组小鼠又随机均分成5组，正常对照组和模型对照组（均给予0.9%NaCl注射液）、阿司匹林组（给予0.5mg/ml阿司匹林）、白花九里明低浓度组和高浓度组（分别给予300mg/ml、600mg/ml的白花九里明提取液）灌胃，灌胃量按小鼠体质量0.1ml/10 g计算，每天1次，连续7 d。致痛大组的小鼠在末次灌胃30min后，正常对照组（给予0.9%NaCl注射液）、其余4组（给予0.6%冰醋酸溶液[9]）腹腔注射，注射量按小鼠体质量0.1ml/10 g计算。致炎大组的小鼠在末次灌胃30min后，正常对照组给予0.9%NaCl注射液、其余4组给予二甲苯纯溶液(20μl/只[10])，均匀将液体涂抹在小鼠右耳两面。

1.5 观察指标检测 致痛大组的小鼠在腹腔注射之后，记录15min内小鼠的扭体次数（以腹部内凹，伸展后肢，臀部抬起为标准），并计算扭体抑制率。致炎大组的小鼠在耳廓用药之后30min，用9mm打孔器沿耳廓基线切下左、右耳廓相应的对称部位并称重，计算耳廓肿胀度及肿胀抑制率。

扭体抑制率=（模型对照组平均扭体数－给药组平均扭体数）/模型对照组平均扭体数×100%。

耳廓肿胀度=（右耳重量－左耳重量）/左耳重量。

肿胀抑制率=（模型对照组平均肿胀度－用药组平均肿胀度）/模型对照组平均肿胀度×100%。

1.6 统计学方法 本研究数据均用SPSS 16.0统计软件处理，计量资料采用方差分析和两两比较q检验，采用“x±s”表示，组间比较采用t检验；计数资料用例数（n）表示，计数资料组间率（%）的比较采用χ2检验。检验水准：α=0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 致痛大组的小鼠扭体次数和扭体抑制率结果 模型对照组、白花九里明低浓度组和高浓度组的小鼠扭体次数明显高于正常对照组（P＜0.01）；阿司匹林组的扭体次数明显低于模型对照组、白花九里明低浓度组和高浓度组（P＜0.01），与正常对照组比较差异无统计学意义；白花九里明低浓度组的扭体次数与模型对照组比较差异无统计学意义；白花九里明高浓度组的扭体次数明显低于模型对照组和白花九里明低浓度组（P＜0.01）。阿司匹林组的扭体抑制率明显高于白花九里明低浓度组和高浓度组（P＜0.01），白花九里明高浓度组的扭体抑制率明显高于白花九里明低浓度组（P＜0.01），见表1。

2.2 致炎大组的小鼠耳廓肿胀度和肿胀抑制率结果 模型对照组、白花九里明低浓度组和高浓度组的耳廓肿胀度明显高于正常对照组（P＜0.01，0.05）；阿司匹林组的耳廓肿胀度明显低于模型对照组和白花九里明低浓度组（P＜0.01，0.05），与正常对照组比较差异无统计学意义；白花九里明低浓度组的耳廓肿胀度与模型对照组比较差异无统计学意义；白花九里明高浓度组的耳廓肿胀度明显低于模型对照组（P＜0.01），而与阿司匹林组和白花九里明低浓度组比较差异无统计学意义。阿司匹林组和白花九里明高浓度组的耳廓肿胀抑制率比较差异无统计学意义，均明显高于白花九里明低浓度组（P＜0.01），见表2。

表1 白花九里明提取液对醋酸扭体法致小鼠疼痛的影响（±s，n=10）Table 1 Blumeamegacephalaextractonw rithing theeffectof glacial acetic acid pain in rats(±s,n=10)

表1 白花九里明提取液对醋酸扭体法致小鼠疼痛的影响（±s，n=10）Table 1 Blumeamegacephalaextractonw rithing theeffectof glacial acetic acid pain in rats(±s,n=10)

注：与正常对照组比较：a P＜0.05，b P＜0.01；与模型对照组比较：c P＜0.05，d P＜0.01；与阿司匹林组比较：e P＜0.05，f P＜0.01；与白花里明低浓度组比较：g P＜0.05，h P＜0.01

扭体抑制率（%）组别正常对照组模型对照组阿司匹林组白花九里明低浓度组白花九里明高浓度组扭体数（次）0 47.75±16.61b 3.42±4.01d 39.00±10.13bf 25.30±14.65bdfh……92.84 18.32f 47.02fh

表2 白花九里明提取液对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响（±s，n=10）Table 2 Blumeamegacephalaextracton auricle swelling theeffectof xylene in rats(±s，n=10)

表2 白花九里明提取液对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响（±s，n=10）Table 2 Blumeamegacephalaextracton auricle swelling theeffectof xylene in rats(±s，n=10)

注：与正常对照组比较，a P＜0.05，b P＜0.01；与模型对照组比较，c P＜0.05，d P＜0.01；与阿司匹林组比较，e P＜0.05，f P＜0.01；与白花里明低浓度组比较，g P＜0.05，h P＜0.01

肿胀抑制率(%)……66.67 25.76f 51.52h组别正常对照组模型对照组阿司匹林组白花九里明低浓度组白花九里明高浓度组耳廓肿胀度0.04±0.06 0.66±0.33b 0.22±0.18d 0.49±0.25be 0.32±0.24ad

3 讨论

在动物试验方法中[9-12]，致痛模型常有热刺激法、电刺激法、机械刺激和化学刺激等方法制备，冰醋酸扭体法是研究药物镇痛作用较为常用的方法，用其在动物实验上筛选出的药物，在临床上具有较好的镇痛疗效；二甲苯为致炎物质，在小鼠耳廓涂抹后会引起局部急性渗出性炎症水肿，能制备可靠的炎症模型；因此，本研究采用冰醋酸扭体制备致痛模型和采用二甲苯耳廓肿胀法制备致炎模型。从本研究结果体现出，模型对照组、白花九里明低浓度组和高浓度组的扭体次数和耳廓肿胀度均明显高于正常对照组（P＜0.01），表示冰醋酸扭体致痛造模和二甲苯耳廓肿胀致炎造模均成功。

本研究结果表明：阿司匹林组的扭体次数和耳廓肿胀度与正常对照组比较差异无统计学意义，而明显低于模型对照组，提示阿司匹林具有明显的镇痛和抗炎效果；白花九里明低浓度组的扭体次数和耳廓肿胀度与模型对照组比较差异无统计学意义，而明显高于阿司匹林组和正常对照组，提示低浓度的白花九里明不能抵抗冰醋酸和二甲苯所致的疼痛和炎症；白花九里明高浓度组的扭体次数和耳廓肿胀度明显低于模型对照组而高于正常对照组，提示高浓度的白花九里明具有镇痛和抗炎作用；白花九里明高浓度组的扭体抑制率和耳廓肿胀抑制率明显高于白花九里明低浓度组，扭体抑制率明显低于阿司匹林组，耳廓肿胀抑制率与阿司匹林组比较差异无统计学意义，提示高浓度的白花九里明水提液镇痛效果次于阿司匹林，而抗炎效果与阿司匹相当，白花九里明用于止痛的用量要比抗炎用量要大。可见，白花九里明含有镇痛和抗炎成分，这些成分有待于进一步的研究确认。

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