乙肝表面抗原检测中ELISA法和胶体金试纸条法应用分析

史殿魁，魏明

（1.沈阳市第七人民医院，辽宁 沈阳 110003；2.郑州大学第五附属医院，河南 郑州 450052）

根据流行病学调查，我国乙肝患者占全球乙肝患者人数的1/3左右[1]。乙型肝炎病毒主要通过血行、母婴和性接触等途径来传播，由于人群对乙型肝炎病毒普遍易感且各年龄阶段均可发病，因此乙肝的预防和治疗工作已经成为了我国甚至是全世界范围内所重视的公共卫生问题[2]。在临床工作中，通过综合考虑检测结果可靠性、灵敏度以及检测成本，酶联免疫吸附法（ELISA法）和GICA法是乙肝表面抗原（HB-sAg）检测较为常用的两种方法[3-4]。现为进一步比较ELISA法和GICA法检测HBsAg的效果，为临床工作提供指导，对本院采集的380份体检者血清标本分别采用ELISA法和GICA法进行检测，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 静脉采取2017年2月～2017年10月来本院普通门诊就诊患者血液标本380例，分离离心得待测血清，分别使用ELISA法和GICA法检测HBsAg。其中男235例，女145例，年龄28～65岁，平均年龄（44.3±12.6）岁。

1.2 试剂和仪器 ELISA法：试剂由武汉伊莱瑞特生物科技有限公司（Elabscience）提供，产品货号为E-EL-H0572-48。主要仪器为上海永创医疗器械有限公司生产的SM600酶标仪。

GICA法：试剂由广州万孚生物技术有限公司提供，批准文号为国药准字S20050094。

1.3 方法 ELISA法：取出冷藏状态的试剂盒后，将盒内微孔反应条及瓶装试剂取出，进行30 min室温平衡后将待测血清标本加入微孔反应条内，注意同时设置阴阳对照组（1个空白对照，1个阳性对照，3个阴性对照），将微孔反应条盖上封片进行封存，在37℃恒温水浴箱保存60 min，配置洗涤液，将微孔反应条封片打开，弃去液体，注入洗涤液，5 s后甩干并用吸水纸擦干，然后取ELISA试剂盒内A、B液各50 μl注入微孔反应条每孔，再将微孔反应条封板，在微量搅拌器上进行混匀，继续在37℃恒温水浴箱保存30 min，然后打开整板和封片，加入50 μl终止液。

GICA法：将密封桶打开后取出试纸条，设置检验环境温度20～25℃，将样本血清进行室温平衡后滴于试纸条。

1.4 结果判断 ELISA法：血清样品OD值≥CUT OFF值则HBsAg为阳性。GICA法：当胶体金试纸条上检测线和对照线出现两条紫红色的线时为阳性；当试纸上仅对照线出现紫红色线时为阴性；两条线均未出现紫红色时为无效，需进行再次检测，若连续两次均未出现紫红色线，则考虑试剂不合格或过期，需更换试剂再次检测。

1.5 观察指标 两种检测方法阳性率、灵敏度、特异度比较。灵敏度=真阳性人数/（真阳性人数+假阴性人数）×100%，特异度=真阴性人数/（真阴性人数+假阳性人数）×100%。

1.6 统计学方法 采用SPSS 19.0软件对所有数据进行统计学分析，计量资料采用“x±s”表示，组间比较采用t检验；计数资料用例数（n）表示，计数资料组间率（%）的比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检测方法阳性率分析 用ELISA法和GICA法分别测定样本血清可得，ELISA法的阳性率为7.37%，GICA法的阳性率为6.58%，差异无统计学意义，见表1。

表1 两种检测方法阳性率比较（n）

2.2 两种检测方法灵敏度分析 根据对研究对象的回访调查，确诊HBV的有30例，以此为标准来计算两种方法的灵敏度和特异度。ELISA法阳性28例，有3例漏检，1例误检；GICA法阳性26例，有7例漏检，3例误检。ELISA法检测灵敏度显著高于GICA法（P＜0.05），见表2。

表2 两种检测方法灵敏度比较

2.3 两种检测方法特异度分析 根据对研究对象的回访调查，ELISA法真阴性数349例，假阳性数1例，GICA法真阴性数347例，假阳性数3例，两种检测方法特异度相比较差异无统计学意义，见表3。

表3 两种检测方法特异度比较

3 讨论

我国属于乙肝高度流行的地区，流行病学研究发现，我国目前有乙肝慢性患者约9 300万，每年死于与乙肝疾病相关的肝硬化和肝癌的患者高达30余万例[5]。乙型肝炎病毒的传播有血液接触、性接触及母婴传播等途径，乙肝患者体内的病毒血清标志物对于疾病的诊断、治疗及预后判断具有重要意义[6]。目前临床上检测乙肝病毒应用最多的标志物是乙型病毒性肝炎病毒表面抗原，即HBsAg，在人类感染乙型肝炎病毒早期即可被检测到，而此时患者常常临床症状较轻微或未表现出相关的临床症状[7]。HBsAg是乙型肝炎病毒的外膜蛋白，是病毒外壳蛋白的主要构成部分，其本身无传染性，但常伴随乙肝病毒而出现，是乙肝病毒已感染的标志。

在临床上，乙型病毒性肝炎检测应用最为广泛的是ELISA法和GICA法。ELISA法[8]以免疫学反应为基础，将酶对底物的高效催化和抗原、抗体特异性反应相结合，最小可测值达到了ng甚至pg水准，具有极高的特异性和敏感性，其原理是将抗原或抗体固定于载体表面，保持免疫活性，在将酶与抗体或抗原相结合形成酶标抗体或抗原，使其同时具有免疫活性和酶活性，加入待检标本后，洗涤去未结合物质，此时载体上酶量与受检物质的量呈一定比例，最后加入酶反应底物发生颜色反应，通过酶标仪进行测定判读结果，此方法是继酶免疫、荧光免疫、放射免疫等免疫方法之后的新一代标记免疫技术[9]，具有重复性好，可定量或半定量检测，灵敏度高等特点。但此法易受加样误差、反应的温度和时间、洗涤时间等因素干扰，且操作步骤较多，不适用于急诊筛查。GICA法[10-11]是一种应用特异性免疫抗原抗体反应的新型方法，其主要作用原理是以硝酸纤维素膜作为载体，将特异性抗体固定于膜的特定区域内，当加入样本血清后，在毛细管的作用下样本血清到达抗体所在的特定区域，血清中的抗原与膜上的抗体发生特异性结合，以胶体金作为示踪标记物，特定区域内将发生着色改变，工作人员通过观察试纸条上颜色改变可判定结果，通常10 min即可获取结果，具有速度快且方便的特点，多用于定性检测。

现为进一步比较ELISA法和GICA法检测HBsAg的效果，为临床工作提供指导，对本院采集的380份体检者血清标本分别采用ELISA法和GICA法检测HBsAg，根据本次研究所得结果，ELISA法的阳性率为7.37%，GICA法的阳性率为6.58%，差异无统计学意义；在灵敏度方面，ELISA法显著高于GICA法（P＜0.05）；在特异度方面，ELISA法与GICA法差异无统计学意义。说明在乙肝表面抗原检测中ELISA法的灵敏度高，适用于常规检测，但在研究过程中发现其操作较复杂，易受反应时间、反应温度、洗涤彻底性、标本保存等多种因素的影响，并且ELISA法操作需要特殊设备，耗时长，不适用于无偿献血及门急诊筛查。而GICA法操作快捷简便，但由于胶体金需要标记物浓度达到一定阈值才会显色，因此灵敏度略差，对于早期低滴度乙型病毒性肝炎感染者易造成漏诊。因此在临床工作中，需依据实际需要选择相应的检测方法。

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