家畜血吸虫病毛蚴孵化法的实践运用

熊家亮 ，谢爱玲 ，彭又新

（1.湖北省荆州市动物疫病预防控制中心，荆州 434020；2.湖北省洪湖市动物疫病预防控制中心，洪湖 433200）

1 粪便毛蚴孵化法原理

人和动物感染血吸虫后，会随粪便排出血吸虫虫卵。血吸虫虫卵具有与一般寄生虫虫卵不一样的特征。其最主要的特点就是成熟虫卵卵内含有毛蚴。血吸虫虫卵随同人和家畜粪便排出体外并在自然环境中遇到水后，在适当条件下数小时就会孵出毛蚴。毛蚴在放大镜下或肉眼观察可见。利用这一原理，采集家畜新鲜粪便，采用适当的方法，控制掌握条件，利用水来孵化出毛蚴以诊断血吸虫[1]。

2 粪便毛蚴孵化法的种类及使用

2.1 尼龙网兜淘洗孵化法（三角烧瓶）

这是最早应用于家畜血吸虫病诊断的方法。采用两层尼龙网兜进行淘洗粪便，上层网兜孔大，主要起过滤粪渣的作用；下层网兜孔小，主要起兜住虫卵的作用；洗好后将下层网兜中的内容物到入三角烧瓶中进行孵化。由于此方法操作繁琐耗时长，在家畜的诊断上早已弃用，但卫生部门目前仍在应用。

2.2 顶管法

用一特制的粪杯盛装粪液，上面再倒插一装满清水的试管进行孵化。此种方法操作简单，我国大部分血吸虫病流行区均采用此方法用于家畜血吸虫病的诊断。湖北省又将此方法称为“试管倒插孵化法”。此种方法使用塑料粪钵成本低、易搬运。我们荆州市在对家畜实行普查时多使用这种方法。在实践中，使用顶管法时粪样需要经过淘洗而易导致虫卵流失。而为提高检出率按标准或要求实行“一粪三检”或“三粪三检”又耗时长效率低。

2.3 直孵法（平底长颈烧瓶）

粪液直接装入平底长颈烧瓶中，颈的中部放入适量的脱脂棉，再加入清水进行孵化。全国有少数地方采用此方法用于家畜血吸虫查病。笔者在实践中将此种方法用于家畜血吸虫感染地市级的风险监测[2]。操作步骤、耗时及检出率与试管倒插法相比略优，可作为试管倒插法的补充。其缺点是玻璃烧瓶在搬运过程中易破碎。在风险监测中，因样品数量少采用此法综合评价仍值得肯定。

3 粪便毛蚴孵化法的实践操作

3.1 试管倒插孵化法

3.1.1 器械的准备

特制的塑料杯及杯盖，与杯盖孔相适应的玻璃试管以及管口上套用的橡皮筋圈，竹筷、40～60孔/吋铜筛、无碘食盐，其它还有剪刀、胶布、5～10倍放大镜、水温计、PH试纸、毛巾、肥皂、粪桶、脸盆、水桶、水瓢、大盛水桶或水缸、大脚盆、试管刷、闹钟、台灯、一次性手套、一次性饭盒、塑料袋、粪检登记表等。

3.1.2 编号

对所用的塑料粪杯逐一进行编号，每个粪杯都唯一的号码。用医用胶布粘贴编号。

3.1.3 登记

将粪检登记卡上的内容详细记入粪检登记表，同时记录对应的粪杯号，同时将一定量的粪样放入对应的粪杯中。每个粪杯中家畜的粪量为：牛、马属动物粪便50～100 g，猪、羊、犬粪便各30～40 g。

3.1.4 洗粪

将塑料杯内加上2/3容量的洗粪用水,用筷子充分搅拌淘洗，而后取出粪筛粪渣，将杯内加满洗粪用水，静置25～30 min。由于羊粪为颗粒状，较硬，粪杯中加洗粪水之前需将其弄碎。

3.1.5 换水

静置到时后倒去粪杯中1/2的粪水，再加满洗粪用水，静置15～20 min，此为第1次换水。到时后再倒去粪杯中2/3的粪水，再加满洗粪用水，静置15 min此为第2次换水。在实际操作中，温度较高时可减少1次换水，以缩短洗粪时间及减少工作量，并不影响毛蚴的孵化及观查效果。

3.1.6 上孵化水

倒去杯中上2/3的粪水，加满孵化用水,静置30 min。

3.1.7 盖杯盖及孵化

取与杯盖孔相适应的玻璃试管，装满洗粪用水倒插于杯盖孔上一并盖在杯上进行孵化。为防止试管下滑，应在试管上缠上适量的橡筋。已加孵化水的粪杯不能放到阳光下直晒，已上试管的粪杯既不能放到阳光下直晒，也不能用电扇吹。如出现粪杯中的粪水上翻到试管中的现象应将试管中的水换成温度略高的孵化水。

3.2 直孵法的实际操作

3.2.1 器械的准备

平底长颈烧瓶、烧杯（500 ml）、脱脂棉为本方法专用器械，以取代粪杯，所需其他器械与顶管法相同。

3.2.2 操作

将平底长颈烧瓶进行编号，每个长颈烧瓶配一个对应的烧杯。将粪检登记卡上的内容详细记入粪检登记表，同时记录对应的烧瓶号。

取家畜粪便于烧杯中，加入自来水充分搅拌，然后将烧杯内加满水，静置25～30 min。

将烧杯中的粪液倒去一半，剩余的粪液倒入对应的烧瓶中，未倒干净的粪渣用孵化水冲洗灌入烧瓶中，将烧瓶颈内壁上的粪渣用孵化水冲洗干净并继续向烧瓶中加入孵化水使液面距离瓶口8 cm左右，然后将适量脱脂棉放入颈口中与液面轻轻接触（要求脱脂棉厚薄均匀，厚度约2 cm左右），在脱脂棉上方轻轻注入孵化水至瓶口，1 h后进行毛蚴观察。

4 粪便毛蚴孵化法的注意事项

4.1 畜粪的采集和送检

4.1.1 采集量

畜粪的采集量与每头家畜检查所用粪杯数密切相关。如果进行一粪三检，大家畜（牛、马属）的采粪量应为200 g，猪100 g，羊和犬50～60 g。

4.1.2 采集方法

一种是拾粪。即采取家畜自然排出的粪便，用一次性筷子或树枝将其采集。为了避免污染，采粪时所用采粪器具不能连续使用，要求一具采一头畜粪，粪样要新鲜；另一种是掏粪。即用手伸进直肠采粪，最好是戴上橡皮手套进行，每采一头更换一副手套，如徒手采集，每采完一头后，必须将手洗净后再采另一头，以防交叉污染。

4.1.3 粪样包装送检

采得粪样可用洁净容器（如一次性饭盒）盛装并再用干净的塑料袋包装，或者使用两层干净的塑料袋包装，详细填写《动物血吸虫病粪样送检登记卡》放入对应的塑料袋中送检[3]。粪样送检登记卡须填写的内容有:乡(镇)名,村名,组别,畜主姓名,畜别,性别,年龄,特征,家畜编号,送检时间等。采到粪样后应立即上送，冬季防止冰冻，夏季防止日晒。

4.2 用水的准备

（1）将自来水放入洁净无盖的容器中静置12 h以上即可作为洗粪和孵化用水。一般于前1 d下午或晚上将自来水放入无盖的桶、盆或缸中，第2天上午即可作为洗粪和孵化水使用。（2）河水、井水、池塘水用做洗粪和孵化用水必须进行杀灭水虫和澄清水质的处理。其方法是是将水加温至60℃以上，冷后澄清再用。（3）孵化时水温须达到15℃以上，否则应升温。当水温高于28℃时，洗粪用水中可按1%的比重加入无碘食盐以抑制洗粪过程中毛蚴过早逸出。（4）由于现今自来水已经普遍使用，所以一般不用河水、井水和池塘水作为孵化和洗粪用水。（5）有些地方的自来水并不是按标准生产的，使用前须检查水中是否有水虫。

5 毛蚴的观查及结果判定

（1）通常情况下牛、羊粪样于第1、3、5 h各观察1次，每个样品每次观察应在2 min以上。实际操作中，由于时间所限，每个粪杯最多观查2次。（2）毛蚴的出现时间与水温关系密切。水温较高时，毛蚴出现的时间早，同时毛蚴存活的时间也较短，所以夏季观察毛蚴的时间要相应地提前并抓紧时间观察。（3）发现血吸虫毛蚴即判定为阳性。在一个试管中有1～5个毛蚴判为+，6～10个为++，11～20个为+++，21个以上为++++。在同一粪样的几个试管中，只要在一个试管中发现一个毛蚴，则该家畜为阳性。（4）毛蚴往往在距水面4cm的范围内活动，灰白色、折光强、梭形，多呈与水面平直或斜向的直线运动。观察毛蚴应在光线充足的地方进行，为了便于观察，可衬以黑色背景。（5）观察时，毛蚴必须与水虫严加区别。可疑时应用吸管吸取置于载玻片上镜检签别。（6）在光线较暗的环境中及夜晚进行毛蚴孵化操作时必须补充灯光并达到所需的亮度。（7）为了便于毛蚴的观查，可在插好试管的粪杯前放置一台灯以增加亮度。

[1] 林矫矫，胡述光，刘金明．中国家畜血吸虫病防治[J]．中国动物传染病学报，2011，19(3):75-81．

[2] 童来保，朱传刚，陆珂，等．粪便毛蚴孵化法检测牛血吸虫病的评价[J]．热带病与寄生虫学，2012，10(1):8-10．

[3] 李亚敏，邱丹，张咏梅，等．猪、牛日本血吸虫病粪便孵化法毛蚴孵出时间比较[J]．中国兽医寄生虫病，1995(2):32+49．