2012年—2016年云南省部分地区规模猪场4种常见病毒感染情况的调查

宋春莲,曾敬元，陶 杨，张 雪，谢相悦，刘永波，吴常月，李 鑫，凌万旭，何 锦，张桂生，兰春林，王艳芬，李 鲜，舒相华*

(1.云南农业大学，云南昆明 650201；2.昆明伟牧得生物科技有限公司，云南昆明 650201；3.云南曲靖市陆良滇陆猪研究所，云南曲靖 655815；4.云南省保山市昌宁县畜牧局，云南昌宁 678100；5.云南省红河州蒙自动物疫病预防控制中心，云南蒙自 661100；6.永德县动物卫生监督所，云南临沧 677600)

猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type two,PVC2)感染是危害我国养猪业最重要的传染病。这4种病原单独感染或混合感染均能引起猪的腹泻、繁殖障碍、呼吸道疾病，给我国养猪业造成巨大的经济损失。猪腹泻是养猪生产中常见的一类疾病，是导致大批猪群死亡的重要原因之一，由于该病传播迅速，引起猪群腹泻、呕吐、脱水，即使猪群耐过存活，仍可引起猪只生长缓慢，致使饲料报酬降低，增加养殖成本[1]，自2010年秋开始，在东亚及东南亚地区持续暴发流行3年之后，不但毫无平息的趋势，而且在欧洲部分地区和美国也开始大面积暴发流行，我国也从2010年底开始，部分省份的猪场暴发的猪腹泻病例明显增多，尤以仔猪最为严重，主要症状表现为腹泻、呕吐和高死亡率[2]，目前已成为困扰国际养猪业的重大问题。猪繁殖障碍性疫病是猪传染病中危害巨大、极为重要的一类疫病，是由不同病原微生物感染繁殖母猪和种公猪引起的综合症候群，主要表现为母猪不孕、流产、死胎、产弱仔，公猪睾丸肿大、精液品质差等[3]，严重影响种猪的繁殖能力。以上4种病原均为猪呼吸道疾病原发性病原，它们首先侵入呼吸道和肺脏，破坏呼吸道的防御屏障造成猪体呼吸道的抵抗力下降，继而引起继发感染[3]。为了控制和预防云南省的猪腹泻、猪繁殖障碍、猪呼吸道疾病，我们对2012年—2016年云南省部分地区的猪病毒感染情况进行了调查分析。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 来自云南省滇中(昆明、玉溪)，滇南(红河、临沧、文山)，滇西(楚雄、大理、怒江、保山、德宏)，滇东(曲靖、昭通)12个地区规模猪场1 632份样品(其中组织样668份，血样964份)。

1.1.2 仪器设备及试剂 超净工作台，恒温生化培养箱，恒温震荡培养箱，台式高速离心机，移液枪及枪头，0.2 mL硅烷化PCR管，琼脂糖凝胶电泳设备，PCR仪，高压灭菌锅，冰箱，水浴锅，灭菌塑料离心管。全血基因组DNA提取试剂盒，北京百泰克公司产品；病毒核酸DNA/RNA抽提试剂盒。

1.2 方法

1.2.1 DNA、RNA的提取 全血基因组DNA的提取，采用离心柱试剂盒提取DNA，独特的结合液CB和蛋白酶K能迅速的裂解细胞和灭活细胞内的核酸酶，之后基因组DNA被异丙醇沉淀出来，被选择性吸附于离心柱内硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗-离心步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后用洗脱缓冲液将基因组DNA从硅基质膜上洗脱下来，获得DNA产物。

采集的组织反复冻融3次，然后4℃条件下12 000 r/min离心15 min，将上清液转移到新的离心管中，混匀，室温放置10 min，然后4℃条件下12 000 r/min离心15 min；按病毒核酸DNA/RNA抽提试剂盒的操作说明提取核酸样品，于-70℃保存备用。

1.2.2 PCR扩增 取上述抽提的核酸样品12 μL，按操作说明加入相应试剂，按各种病毒核酸PCR扩增条件进行扩增。 各反应结束后，取5 μL PCR产物在10 g/L的琼脂糖凝胶上电泳检测，在凝胶成像系统上观察，扩增出与预期片段大小基本一致的片段则判定为阳性。

2 结果

2.1 病料中CSFV、PRRSV、PRV、PVC2的PCR检测结果

由表1可见，云南省2012年—2016年PVC2的阳性率最高，为40.25%，其次是PRRSV，阳性率为21.40%，CSFV、PRV的阳性率分别为8.91%和4.11%。

表1 2012年—2016年CSFV、PRRSV、PRV、PVC2的PCR检测结果

由表1可见，2012年—2016年，猪圆环病毒2型感染阳性率最高，分别为43.75%、37.25%、28.38%、53.06%和47.83%；其次为猪繁殖与呼吸综合征病毒，阳性率分别为13.16%、10.48%、29.93%、16.87%和29.58%；猪伪狂犬病病毒阳性率分别为2.38%、0.00%、2.65%、13.33%和1.37%，猪瘟病毒阳性率16.27%、9.09%、9.09%、4.11%和7.14%。不同年份，猪圆环病毒2型感染2014年最低，2015年和2016年有上升趋势；猪繁殖与呼吸综合征病毒感染2014年和2016年相对较高，2013年最低；猪瘟病毒感染有逐年下降的趋势；猪伪狂犬病病毒感染2015年最低，但2015年仍有检出。

2.2 2012年-2016年病毒混合感染情况

CSFV+PRRSV、CSFV+PRV、CSFV+PVC2、PRRSV+PRV、PRRSV+PVC2二重感染的阳性率分别为1.73%、0.62%、3.44%、1.89%、6.32%和2.31%，CSFV+PRV+PVC2和PRRV+PRV+PVC2三重感染的阳性率分别为0.71%和0.68%，无四重感染(图1)。

2.3 2012年-2016年部分地区病原阳性情况

图2可见，CSFV、PRRSV、PRV、PVC2在滇中的阳性率分别为5.31%、28.33%、4.44%和48.62%，在滇南的阳性率分别为12.12%、20.37%、3.70%和29.03%，在滇西的阳性率分别为6.38%、20.41%、7.69%和47.37%，在滇东的阳性率分别为15.57%、7.58%、0.90%和27.27%。

图1 2012年-2016年4种病毒5年混合感染阳性率

图2 2012年-2016年4种病毒在各地区的阳性情况

3 讨论

本次调查结果显示，云南省2012年—2016年猪瘟病毒阳性率呈现先下降后上升，2016年表现为上升。云南省2008年—2011年猪瘟病毒感染阳性率分别为20.83%、40.35%、42.53%和16.35%，近几年来一直呈下降趋势，说明近年来人们对猪瘟防控的高度重视，取得了较好的防控效果。本次调查结果猪瘟病毒感染平均阳性率为8.91%，与国内其他地区近年来报道有差异。欧莹[4]报道，广西省2012猪瘟病毒阳性率为5.8%，2013年为3.83%，低于本次阳性率；曲哲会等[5]报道，2010年—2012年豫南地区猪瘟病毒阳性率为44.2%；王川庆[6]报道，2014年—2015年河南省部分地区猪瘟病毒抗体阳性率为19.08%，均明显高于本次阳性率。本次调查结果猪繁殖与呼吸综合征抗原阳性率最高为29.39%，最低为10.48%。比报道的2008年—2011年云南省猪繁殖与呼吸综合征抗原的阳性率分别为46.30%、87.72%、51.72%、37.78%均低，近几年该病发病不严重。王雪等[7]报道，2011年10月—2013年1月，四川省部分地区猪繁殖与呼吸综合征抗原阳性率为10.45%，云南省猪繁殖与呼吸综合征抗原阳性率比四川省略高；任奕先等[8]报道，2013年—2014年广西桂林市猪繁殖与呼吸综合征抗原阳性率为22.9%，高于本次阳性率。CSF、PRRS二联苗是云南省前几年政府强制免疫接种疫苗，近年来，两种疫病的有效控制可能与之有关，然而控制效果有一定的差异，2012年—2016年猪瘟的阳性率一直降低，取得了良好的控制效果，猪繁殖与呼吸综合征抗原阳性率2012年—2013年降低，之后有上升趋势，仍比2012年前的阳性率低，说明该二联苗对两种疫病的预防均有效，但猪蓝耳病的免疫效果弱于猪瘟。

猪伪狂犬病病毒抗原阳性率最高为13.33%、最低为0，均低于2008年-2012年云南省猪伪狂犬病病毒抗原阳性率25.0%、63.16%、43.10%和15.04%，可见近几年一直呈降低趋势。邹敏等[9]报道，2012年-2013年我国部分地区的猪伪狂犬病病毒阳性率为8.69%，云南省相比全国各地区较低；胡帅等[10]报道，2013年-2014年广西省猪伪狂犬病病毒阳性率为0.98%，低于本次调查。近几年云南省猪伪狂犬病发病处于较低水平，可能与使用的基因缺失苗有关，取得了良好的防控效果。

2012年-2016年中，猪圆环病毒2型的阳性率2015年最高，为53.06%，2014年最低，为28.38%，与 2008年-2011年相比差异不大。万青山[11]报道，四川省2011年10月—2013年3月，猪群中PCV2感染的阳性率高达49.2%；据迟兰[12]报道，徐州地区2014年10月—2015年5月PVC2的阳性率为40.9%。说明猪圆环病毒2型感染一直居高不下，难以防控，能造成猪免疫抑制，是导致混合感染的主要原因。

本次调查几种病毒混合感染，二重感染中，PRRSV+PVC2最多，为6.32%；CSFV+PRV最少，为0.62%；三重感染较少，CSFV+PRV+PVC2、PRRV+PRV+PVC2分别为0.71%和0.68%，无四重感染。

云南省规模猪场主要集中在滇中、滇东和滇南。猪瘟病毒阳性率滇南、滇东明显高于滇中和滇西，猪繁殖与呼吸综合征病毒滇东地区阳性率相对较低，猪伪狂犬病病毒阳性率普遍较低，猪圆环病毒2型滇中、滇西地区阳性率较高。提示病原阳性率较高的地区应注意该病的防控。

[1] Eli Song D，Park B，Porcine epidemic diarrhea virus：a comprehensive review of molecular epidemiology，diagnosis，and vaccines[J]．Virus Genes，2012，44(2)：167-75.

[2] 陈溥言，王川庆，姜 平,等.家畜传染病学[M].6版.北京：中国农业出版社，2015：212.

[3] 刘伯庶，王琼秋，郭建新.云南省红河州猪繁殖障碍综合征的流行病学调查[J].中国兽医科学，2006,36(5):420-423.

[4] 欧 莹.2012-2013年广西猪瘟流行病学调查[D].广西南宁：广西大学，2014.

[5] 曲哲会，郭晓秋，刘 涛,等.豫南地区规模化猪场主要病毒性传染病流行病学调查与分析[J].中国兽医杂志，2013,49(12):14-17.

[6] 王川庆.河南省部分地区猪瘟流行病学调查及综合防控措施研究[D].河南郑州：河南农业大学，2015.

[7] 王 雪，李海全，徐志文,等.四川省部分地区公猪精液中蓝耳病分子流行病学调查[J].养猪，2013，(5)：125-127.

[8] 任奕先，王红梅.2013年-2014年广西桂林市猪蓝耳病病毒流行病学调查[J].广西畜牧兽医，2015，31(6):283-285.

[9] 邹 敏，杨旭兵，郑 辉,等.2012-2013 年我国部分地区猪伪狂犬病流行病学调查[J].中国动物检疫，2015，32(4)：1-5.

[10] 胡 帅，周庆安，李 军.2013-2014年广西省主要猪病毒性传染病流行病学调查[J].中国畜牧兽医，2016,43(6):1618-1623.

[11] 万青山.四川部分地区猪圆环病毒2型流行病学调查研究.[D].四川雅安：四川农业大学，2013.

[12] 迟 兰，李心海，王 兵.徐州地区猪圆环病毒病的流行病学调查[J].黑龙江畜牧兽医，2017(3):143-146.