基础医学

Mfn2在环孢素A诱导HeLa细胞生长停滞中的作用

朱敏，张雯，鲍旭霞，等

摘要：目的：探讨组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）抑制剂——环孢素A（trichostatin A，TSA）对人宫颈癌 HeLa细胞中线粒体融合蛋白2（mitofusin 2，Mfn2）表达水平及其下游通路的影响。方法：用不同浓度（0.2、0.4和0.8 μmol/L）的TSA处理HeLa细胞，采用细胞计数试剂盒8（cell counting kit-8，CCK-8）法测定HeLa细胞活力；采用5-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2'-deoxyuridine，BrdU）掺入法检测HeLa细胞增殖情况；采用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡及细胞周期的改变；将特异性定位于线粒体的红色荧光蛋白（red fluorescent protein，RFP）转染HeLa细胞，24 h后通过激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体形态的变化；采用Western blot检测HeLa细胞中Ras、Raf、磷酸化 Raf（phosphorylated Raf，p-Raf）、细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、磷酸化ERK（phosphorylated ERK，p-ERK）、蛋白激酶 B（protein kinase B，PKB/Akt）、磷酸化 Akt（phosphorylated Akt，p-Akt）和Mfn2的蛋白水平；采用real-time PCR检测Mfn2 mRNA的表达水平；采用免疫共沉淀法检测Mfn2是否与Ras有相互作用。在HeLa细胞中过表达Mfn2后，再次观察上述指标的改变。结果：TSA对HeLa细胞的活力有显著的抑制作用，并促进细胞凋亡，使处于G2/M期的细胞比例明显升高，且该作用呈剂量和时间依赖性。HeLa细胞经TSA处理后，线粒体形态明显变长，Mfn2的mRNA和蛋白表达水平均显著增高，Mfn2与Ras的结合水平升高，Raf和ERK蛋白的磷酸化水平降低。在 HeLa细胞中过表达 Mfn2，可导致线粒体长度明显增加，细胞活力亦受到明显抑制，同时细胞阻滞于G2/M期，Raf和ERK的磷酸化水平降低，Ras-Raf-ERK通路受到抑制，但细胞凋亡水平的变化不明显。结论：Mfn2参与了HDAC抑制剂TSA诱导的HeLa细胞生长阻滞，其效应可能是通过抑制 Ras-Raf-ERK通路实现的。

来源出版物：中国病理生理杂志, 2016, 32(1): 95-100

入选年份：2016