高效液相色谱法测定环孢素胶囊以及软胶囊的溶出度分析

杨春根

（镇江市第一人民医院药剂科 江苏 镇江 212000）

环孢素是一种免疫抑制药，广泛用于器官移植排斥反应的抑制及治疗各种自身免疫性疾病[1]。环孢素是分子量较大的多肽，含有11 个氨基酸，具有亲水性差的特点。本文通过高效液相色谱法检测2 种环孢素胶囊以及3 种环孢素软胶囊的溶出度，报告如下。

1.仪器与试药

1.1 仪器

美国LOGAN 通用型12 位溶出度仪 UDT-812A-12，华溶仪器DS-808 溶出仪，德国sykam(赛卡姆)高效液相色谱仪HPLC 系统S-501。

1.2 试药

样品：选取2 种环孢素胶囊和3 种环孢素软胶囊样品进行检测，其中2 种环孢素胶囊为样品F（规格25mg）、G（规格100mg），3 个环孢素软胶囊为样品A（规格10mg）、样品B（规格25mg）、样品C（规格100mg）。环孢素对照品：含量98.8%；杂质对照品：环孢素B、C、G、H 和异环孢素A、H。试剂：四氢呋喃、超纯水、盐酸、磷酸、氯化钠、胃蛋白酶、十二烷基硫酸钠、N-二甲基十二烷基胺-N-氧化物、30%N。

2.方法与结果

2.1 方法

2.1.1 色谱条件 充填剂250mm×4.6mm，5μm。热交换器：直径0.25mm，长100cm；不锈钢管，温度75℃。流动相：四氢呋喃0.05mol/L 磷酸溶液。进样量10μL，测定波长度220nm。

2.1.2 环孢素胶囊测定 溶出介质：盐酸浓度为0.1mol/L的溶液1000ml（含1%十二烷基硫酸钠）。以100r/min 速度转1h，滤过，制成供试品溶液，测定溶出量。

2.1.3 环孢素软胶囊测定 溶出介质：水+3.2g 胃蛋白酶+2g 氯化钠+7ml 盐酸+30%N+6.9ml N-二甲基十二烷基胺-N-氧化物，总容量为1000ml。以75r/min 速度转1h，取适量过滤。取环孢素对照品+溶出介质制成对照品溶液。取对照品溶液10μL、供试品溶液10μL 测定溶出量。

2.2 系统适用性实验

环孢素对照品取100mg，环孢素B、C、G、H 和异环孢素A、H 分别取3mg，添加四氢呋喃-水（80：20）溶液制成50ml 混合液，制成系统适用性溶液,线性范围0.35-202.76μg/ml，相关系数0.9998-1.0000。

2.2.1 精密度、稳定性、回收率试验 使用对照品溶液连续进样10μL×6 次，平均含量96.82%，相对标准偏差≤0.1%，表明精密符合要求。取样品F 制成供试品溶液，分别测定每间隔2h 测定一次，共测定5 次，环孢素相对标准偏差≤0.1%，表明稳定性符合要求。取环孢素对照品50mg 共9 份，加四氢呋喃-水（80：20）分别制成浓度80%、100%、120%的溶液各3 份，总计9 份，色谱条件下分析计算回收率；回收率结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.2.2 环孢素胶囊溶出试验 溶出介质：（1）水1000ml；（2）0.1mol/L 盐酸1000ml；（3）磷酸缓冲液（pH6.0）1000ml；（4）0.1mol/L 盐酸+0.5%十二烷基硫酸钠1000ml；（5）0.1mol/L 盐酸+1%十二烷基硫酸钠1000ml。取样品F、G，分别在每种介质中加6 粒，以100r/min 速度转，分别于5min、15min、30min、45min、60min、75min 取样，共取样6 次,计算平均溶出度。见表2。

2.2.3 环孢素软素胶囊溶出试验 溶出介质：（1）水1000ml；（2）0.1mol/L 盐酸1000ml；（3）采用2.3 中的拟溶出介质1000ml。取样品A、B、C，分别在每种介质中加6 粒，以750r/min 速度转，分别于5min、15min、30min、45min、60min、75min 取样，共取样6 次,计算平均溶出度。见表3。

2.4 溶出度测定结果

环孢素胶囊和软胶囊溶出度见表2。环孢素胶囊中样品F、样品G 的采用0.1mol/盐酸（含1%十二烷基硫酸钠）为溶质时，转速100r/min，转时1h，溶出度＞100%，环孢素软胶囊样品A、样品B、样品C 以拟胃液为溶出度时，转速75r/min，转时1h，溶出度＞100%。

3.讨论

国家药品标准对环孢素胶囊制定的标准是以水为溶出介质，以100r/min 转时45min，限度70%；美国对环孢素胶囊制定的标准是以0.1mol/L 盐酸（含0.5%十二烷基硫酸钠）为溶出介质，以150r/min 转时1.5h，限度80%[2]。本研究中，以水为溶出介质时，环孢素胶囊转速100r/min，转时1h 无法完全溶出；环孢素软胶囊转速75r/min，转时1h 无法完全溶出。本研究结果显示环孢素胶囊中样品F、样品G 的采用0.1mol/盐酸（含1%十二烷基硫酸钠）为溶质时，转速100r/min，转时1h，溶出度＞100%，环孢素软胶囊样品A、样品B、样品C 以拟胃液为溶出度时，转速75r/min，转时1h，溶出度＞100%。表明，环孢素胶囊及软胶囊溶出度采用高效液相色谱法测定是可行的。

表2 环孢素胶囊的溶出度测定结果

表3 环孢素软胶囊的溶出度测定结果

综上所述，采用高效液相色谱法测定环孢素胶囊以及软胶囊溶出度是可行的，其中环孢素胶囊检测以0.1mol/盐酸（含1%十二烷基硫酸钠）为溶出介质可完全溶出，环孢素软胶囊适宜检测采用拟胃液为溶出介质可完全溶出。