一起猪弓形虫和链球菌混合感染的诊断与防治

郎利敏，王克领，张立宪，游 一，徐引弟，焦文强，胡德林

（1.河南省农业科学院畜牧兽医研究所，河南 郑州 450002；2.商水县畜牧局动物卫生监督所，商水 466100）

猪弓形虫病是由刚第弓形虫引起的一种人兽共患原虫病，以高热稽留、呼吸困难、死亡为主要特征，磺胺类药物对其有良好的治疗效果，其他药物无效[1]。猪链球菌病是由致病性链球菌引起的一种急性、败血症型、脑膜脑炎型的人兽共患传染病，以高热、气喘、神经症状、关节肿大、皮肤发红、急性死亡等为主要特征[2]。

随着集约化、规模化养猪业的发展，饲养密度增加，猪免疫抑制性疾病、猪群抵抗力下降等因素的存在，目前猪弓形虫病和链球菌病在猪场时有发生，由于这两种疫病在临床症状、剖检病理变化方面和猪瘟、蓝耳病、伪狂犬病等有相似之处，很容易发生误诊；另外近些年由于抗生素类药物的大量使用，猪链球菌对很多抗生素类药物产生耐药性，如果不能及时使用敏感药物治疗，会造成极大的损失。2017年8月，河南开封某肥育猪场发生一起猪弓形虫和链球菌混合感染疫情，由于未能及时确诊和采取正确的措施，损失严重，现将本次疫情的诊断过程、治疗结果和体会报告如下。

1 发病情况

发病猪场存栏50 kg左右肥育猪600头，2017年8月初猪群出现发烧、减食，病猪呼吸困难，皮肤发红，有的急性死亡。发病前期使用替米考星和氟苯尼考治疗7 d，未能控制疫情，期间注射了猪瘟疫苗和伪狂犬病疫苗，仍不见好转，然后使用磺胺六甲氧嘧啶拌料，病猪注射复方长效磺胺，疫情稍有缓解，但每天会出现3～5头病猪，仍有急性死亡病猪。本次疫情持续20多天，无法控制，遂来河南省农业科学院动物疫病诊断中心就诊。

2 临床症状

病猪高热，体温41.5～42.0℃，精神沉郁，采食量下降或废绝，呼吸困难，呈明显的腹式呼吸，眼结膜潮红，发病初期头部、四肢、腹下出现紫红色出血斑，后期全身紫红色，个别猪有神经症状、跛行，有急性死亡，死亡猪口、鼻流出淡红色泡沫状液体。

3 剖检病变

剖检病死猪3头，淋巴结肿大、出血，切面有灰白色干酪样坏死灶；肺脏紫红色，弥漫性大叶性肺炎，肺间质增宽，充满黄色胶冻样水肿液（图1）；胸腔、心包腔有少量淡黄色透明渗出液；心肌肿大，表面有少量出血点；肝脏肿大，质硬，暗红色，有大量灰白色、灰黄色粟粒大小坏死灶，有鲜红色出血点（图2）；脾脏肿大、出血，边缘有少量梗死灶；有2头皮下水肿，脂肪黄染，有1头后肢关节肿胀，内有黏稠、浑浊关节液。

图1 肺间质增宽，充满胶冻样水肿液

图2 肝脏大量坏死灶、出血点

4 实验室检测

4.1 弓形虫检测

4.1.1 弓形虫体检测 无菌操作取病猪的肝、脾、肺门淋巴结等涂片，干燥固定，经姬姆萨氏法染色后，低倍镜观察，发现少量半月形的弓形虫滋养体，胞浆呈浅蓝色，核呈深蓝紫色，偏于虫体一端，核与尖端之间有颗粒。

4.1.2 弓形虫血清抗体检测 采集病猪血清7头份、同群健康猪血清6头份，使用中国农业科学院兰州兽医研究所生产的弓形虫抗体间接血凝检测试剂进行弓形虫抗体检测，结果发病猪弓形虫抗体呈阳性6头，阳性率 86%，同群健康猪弓形虫抗体呈阳性只有1头，阳性率17%。

4.2 细菌分离、鉴定和药敏试验

4.2.1 细菌分离培养 无菌操作取病死猪的心血、肝、脾、淋巴结等组织分别涂抹接种普通营养琼脂平板、绵羊鲜血营养琼脂平板，37℃培养，观察至24 h后，普通营养琼脂平板上无细菌生长，鲜血琼脂平板上形成半透明、表面光滑湿润、灰白色露滴样的小菌落，呈明显的β溶血。挑取典型菌落，涂片，革兰氏染色镜检，可见革兰氏阳性球菌或球杆菌，散在或成双，部分呈短链状排列（图3）。

图3 猪链球菌菌体形态

4.2.2 细菌PCR鉴定 参照文献[3-4]根据猪链球菌gdh基因序列设计引物，上游引物：5-GCAGCGTAT TCTGTCAAACG-3′，下游引物：5-CCATGGACAGAT AAAGATGG-3′，PCR扩增的产物为689 bp大小的片段，引物由上海生工生物工程公司合成，按照常规PCR检测方法进行核酸提取和扩增，PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶进行电泳，扩增出了689 bp大小的预期目的条带（图4），证明本次分离到的为链球菌。

图4 链球菌PCR扩增结果

4.2.3 细菌药敏试验 参照文献[5]，采用 K-B纸片扩散法进行试验。将分离鉴定好的细菌接种于绵羊全血琼脂平皿，涂匀，选取常用的抗生素的药敏纸片贴于培养基上，于 37℃培养 24 h，测量抑菌圈直径，根据抑菌圈的大小判定分离株对药物的敏感性。结果表明，对链球菌（SS）高度敏感的药物有：阿莫西林、头孢氨苄、头孢噻肟、利福平、头孢拉定、恩诺沙星 、头孢噻呋 ；中度敏感药物：头孢他啶、氯霉素；耐药药物：林可霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、红霉素、磺胺六甲氧嘧啶、复方新诺明、多西环素。

4.3 病毒核酸检测（PCR）

采集发病猪的肺脏、脾脏、淋巴结、脑组织等，应用常规PCR方法，进行猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、蓝耳病病毒的核酸检测，均为阴性。

5 综合防治措施

综合发病情况、临床症状、剖检变化和实验室检测结果，确诊该起疫情为猪弓形虫和链球菌混合感染。

（1）将病猪隔离、单独饲养，部分病程较长、病情严重的猪淘汰并实行严格的无害化处理。清除粪污，采用3%烧碱水溶液对全场地面及用具进行彻底消毒，杜绝猫、狗在猪场活动，做好灭鼠工作。

（2）考虑到该猪场磺胺类药已经使用7 d（磺胺类药物连续使用不得超过7 d），且刚停止使用该药，根据链球菌药敏试验结果，先全群饲料中添加10%阿莫西林预混剂1 kg/t饲料、10%恩诺沙星预混剂2 kg/t饲料、扶正解毒散1 kg/t饲料，混匀，连用7 d后停药，再饲料添加磺胺氯达嗪1 kg/t饲料、扶正解毒散 1 kg/t饲料，混匀，连用7 d。饮水中添加优质电解质多维1 kg/t、葡萄糖5 kg/t，自由饮用，连用 15 d。

病猪注射头孢噻呋，按说明书使用，肌肉注射0.1 mg/kg体重，每天1次，连用4次。期间新发病猪使用磺胺间甲氧嘧啶注射，采用上述措施3 d后，猪群中新发病例明显减少，部分病猪精神、食欲等有所好转；1周后猪群基本正常，有零星发病猪，使用磺胺药注射后很快治愈，两周后猪群全部恢复正常，期间有17头严重病猪治疗无效，死亡。

6 小结与体会

（1）当前猪场弓形虫病和链球菌病都是较为常见的疫病，相关病例报道很多，但有关两者混合感染的报道较为少见。本病例通过采用实验室检测、加强饲养管理、交替使用对弓形虫有效的磺胺类药物和对链球菌敏感的药物，很快控制了疫情，取得了良好的治疗效果，说明对本次疫情诊断正确、治疗措施得当。

（2）弓形虫病存在发病快、死亡率高等特点，只有磺胺类药物对其有效，如能及时确诊、及时用药，能很快得到控制[6]。但是，弓形虫病和链球菌病、猪瘟、蓝耳病、猪肺疫等在临床症状上很相似，难以区分，生产中经常出现误诊，不能及时采取有针对性的措施而贻误病情，造成较大的伤亡。因此，猪场出现疫情时，应及时到专业机构进行实验室检测，尽早确定发病原因，采取相关措施。

（3）磺胺类药物经常被猪场用来治疗链球菌病，但近年来有文献报道链球菌已经对磺胺类药物产生了耐药性[7-9]。本次病例药敏结果表明：该场分离的链球菌对复方新诺明、磺胺六甲氧嘧啶均为耐药，这也是本次病例在发病期间使用过磺胺类药物，却未能控制疫情的原因。伴随着我国养猪业的快速发展，抗菌药物滥用导致细菌的耐药性越来越严重，因此猪场应在发生疫情时，不仅要及时确诊病原，还要在有细菌性病原感染时，进行药敏试验，筛选出对本场菌株敏感的药物，正确添加，才能及时控制疫情，减少损失。

[1]宣长和，任凤兰，孙福先.猪病学[M].北京：中国农业科技出版社，1996：448-452.

[2]蔡宝祥.家畜传染病学[M].第4版.北京:中国农业出版社，2001：91-99.

[3]何孔旺，倪艳秀，王继春，等．猪链球菌分子流行病学[J]．中国人畜共患病杂志，2002，18（5）：45-47．

[4]徐引弟，王治方，李海利，等.传染性胸膜肺炎和猪链球菌混合感染的诊断与防治[J]．养猪，2017（2）：103-104.

[5]郝春艳，王利勤，王晶珏.猪链球菌的分离鉴定及药敏试验[J]．动物医学进展，2010，31（5）：124-128.

[6]张玲娟.猪弓形虫病的诊断与治疗[J]．中国畜禽种业，2016（2）：105-106.

[7]易新健，刘准，凌云志，等.猪链球菌耐药现状分析及防控[J]．养猪，2017（4）：107-108.

[8]闫若潜，赵明军，张志凌，等．河南省致病性猪链球菌血清型及耐药性状况调查[J]．河南畜牧兽医（综合版），2007，28（5）：25-27．

[9]刘静，李贤贤，张鹏，等.猪链球菌的分离鉴定及对常用抗菌药物的耐药性[J]．中国兽医杂志，2012，48（7）：30-33.