猪伪狂犬病的诊治实例及免疫体会

宁慧波，陈同煜，李 聪

[1.海博莱生物科技咨询（北京）有限公司，北京 海淀 100086；2.山东农业大学动物科技学院，山东 泰安 271000]

猪伪狂犬病（Swine Pseudorabies,PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的多种家畜及野生动物共患的一种急性热性传染病。不同年龄、品种的猪均易感。主要通过呼吸道、生殖道、胎盘、乳汁、气溶胶等途径感染传播。该病主要导致种猪严重繁殖障碍，仔猪神经症状、腹泻及高死亡率，生长肥育猪呼吸道病综合征；以非化脓性脑膜炎及神经节炎、内脏实质器官坏死和梗死为特征[1]。我国于20世纪40年代末在猫中首次发现伪狂犬病病毒，60年代初在猪群中也出现了该病毒流行。自2010年后，该病从北向南席卷全国，给养殖业造成很大的经济损失[2]。目前对该病的防控尤为重要，需采取综合性的防治措施。

1 猪场发病情况

2016年10月，山东某规模化猪场（1 000头）大批母猪出现流产、早产现象，发病率达24%。哺乳仔猪表现神经症状、口吐白沫，有的呈犬坐式，快速死亡；仔猪发病率达65%，病死率达40%。采取多种治疗措施，疗效不佳。2016年11月，笔者应邀到现场进行诊治，了解猪场病情已经持续1个月，无特效疗法，经了解该猪场对肥猪的疫苗免疫意识淡薄。

2 流行病学

该场为了扩大规模，于2016年6月开始陆续引种，为了降低生产成本，母猪配种前只免疫1次猪伪狂犬病疫苗，仔猪在45日龄左右进行伪狂犬病疫苗免疫。妊娠70~90 d的母猪陆续发生流产、早产情况。哺乳仔猪在3~15日龄开始发病，很快在整个猪群蔓延传播，发病率高，病程短，仔猪死亡率快速升高。同时，场内饲养的狗也陆续死亡。

3 临床症状

妊娠母猪流产（图1）；哺乳仔猪精神沉郁，眼睑肿胀（图2）；盲目走动、站立不稳、转圈；呈犬坐式（图3）；口吐白沫（图4）；保育猪及肥猪无明显临床症状。

图1 妊娠母猪流产

图2 哺乳仔猪精神沉郁，眼睑肿胀

图3 呈犬坐式

图4 口吐白沫

4 剖检变化

大脑表面充血、出血（图5），肺充血、水肿（图6），肝脏表面有黄白色坏死灶（图7），肾脏表面有针尖大出血点（图8）。

图5 大脑表面充血、出血

图6 肺充血、水肿

图7 肝脏表面有黄白色坏死灶

图8 肾脏表面有针尖大出血点

5 实验室诊断

选取病猪的脑、扁桃体、肝脏、淋巴结等组织，分别取0.5 g左右加入2 mL左右PBS混合研磨至匀浆状态，反复冻融3次，进行猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、蓝耳病病毒及圆环病毒2型的RT-PCR检测；采取剖检猪的脑、肾脏、肺脏、淋巴结、肝脏及扁桃体，使用10%中性福尔马林溶液固定，常规制作石蜡切片，HE染色，镜检。同时对种猪及各阶段仔猪进行血液采集（表1），采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测猪伪狂犬病gE抗体，所使用的抗体检测试剂盒均为西班牙海博莱公司的相关产品。

表1 各阶段猪采血情况

5.1 PCR检测检测结果

通过对送检病料的RT-PCR的检测发现，猪伪狂犬病病毒为阳性，扩增条带大小为300 bp左右，猪瘟病毒、圆环病毒2型、蓝耳病病毒均为阴性（图 9）。

图9 送检组织病原检测结果

5.2 病理组织学检测结果

通过显微镜观察，可见脑膜下充血，小动脉及毛细血管周围形成管套，胶质细胞增生，出现典型噬神经元现象（图10-A和图10-B）；肾间质出血，肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落（图11）；肺脏呈典型间质性肺炎病变，淋巴细胞浸润，纤维细胞增生，间质增宽，部分区域实质充血、出血（图12）；肝脏小叶结构不清，肝细胞变性、坏死、脱落，增生的结缔组织将原肝组织分割包围形成大小不等、形态各异的小叶（图13-A和图13-B）。

图10 猪脑病理切片

图11 猪肾脏病理切片

图12 猪肺脏病理切片

图13 猪肝脏病理切片

5.3 ELISA检测结果

ELISA检测发现种猪及商品猪群伪狂犬病野毒感染比例非常高（图14），猪场伪狂犬病感染压力较大。结合流行情况、临床症状、病理剖检及实验室检测确定该场为PRV感染发病。

图14 伪狂犬病gE抗体阳性率

6 防治方案

6.1 紧急免疫接种

对全场公猪及经产母猪肌注免疫伪狂犬病活疫苗喜可净（GN）1头份（使用A3稀释液），间隔3周后再加强免疫1次。所有10日龄内仔猪喷鼻免疫GN 1头份（使用红色稀释液），10日龄以上哺乳仔猪及保育猪全部肌注免疫GN 1头份（使用A3稀释液）。紧急接种后将伪狂犬病免疫程序调整为：后备母猪22和26周龄分别肌注免疫GN 1头份（使用A3稀释液）；公猪及经产母猪每3个月肌注免疫GN 1头份（使用A3稀释液）；仔猪1日龄喷鼻免疫GN 1头份（使用红色稀释液），10周龄及14周龄分别肌注免疫GN 1头份（使用A3稀释液）。

6.2 隔离封锁、严格消毒

将发病母猪立即与假设健康母猪分开栏舍隔离饲养、对体况差不能吃奶、呼吸道症状明显、有神经症状、无治疗价值的仔猪立即淘汰；产房严格按全进全出操作，对清空产房采用氯制剂、碱制剂等消毒药品轮换进行消毒，工作服、鞋、帽等用消毒液浸泡消毒。

6.3 加强生物安全

对病死动物尸体、流产物、死胎及排泄物等做无害化处理；严格限制外来人员和车辆进入场内，禁止场内工作人员串舍；严禁犬、猫等动物进入猪场，同时加强灭鼠工作。

6.4 提高饲养管理

做好猪舍内粪污清理工作；加强猪舍通风换气、保持猪舍干燥；降低饲养密度，消除各方面的应激因素；适当增加母猪的饲喂量，饲料添加电解质多维、葡萄糖等营养抗病因子，保证猪群营养平衡需求。

6.5 病猪对症治疗

为了控制猪伪狂犬病引起的继发感染，对发病猪舍母猪饲料添加70%阿莫西林400 g/t、包被恩诺沙星300 g/t、电解质多维2 kg/t，葡萄糖5 kg/t，连用5 d；并对发病母猪肌注头孢噻呋钠4mg/kg体重，每日1次，连用3 d；同时辅助使用黄芪多糖注射液15 mL/头，每日1次，连用3 d，以增强非特异性免疫功能。

6.6 跟踪调查

采取上述综合措施1周后，猪群发病开始减少，加强免疫伪狂犬病疫苗1周后，猪群基本恢复正常生产。3个月后再次检测种猪及各阶段仔猪伪狂犬病gE抗体，结果显示伪狂犬病野毒阳性率较之前明显降低（图15），说明处理方案取得了较好的效果。

图15 采取措施后伪狂犬病gE抗体阳性率

7 诊治体会

7.1 不良后备母猪的引入是猪伪狂犬病不稳定的重要因素

在猪场中，为了保证猪群正常生产，因此要不断引入后备母猪。持续不断的引种增加了猪伪狂犬病的感染风险，造成猪伪狂犬病的散发或者流行。该猪场分多次引入后备母猪，最终猪场开始发病。故引入后备母猪时应做好伪狂犬病野毒的检测，坚决杜绝伪狂犬病野毒阳性猪的引入，运输途中减少应激，到场后进行严格充分的隔离，确保引种后猪群的整体稳定性。

7.2 种猪群长期带毒增加仔猪感染几率

目前母猪带毒普遍存在，带毒的妊娠母猪可通过胎盘感染胎儿，带毒的泌乳母猪可通过乳汁感染哺乳仔猪[3]；公猪带毒危害更大，配种时可通过接触污染的阴道黏膜或精液等途径感染[4]。其次种猪长期带毒排毒，增加了猪群通过鼻对鼻直接接触经呼吸道水平感染几率。因此，要对种猪群进行定期监测，及时淘汰阳性猪只。

7.3 易感动物多增加了伪狂犬病防控的难度

PRV的自然宿主是猪，同时也可以感染犬、猫、牛、绵羊、鼠等多种动物[3]。猪是PRV感染后唯一可以存活的物种，其他动物感染后均以死亡告终。本场饲养的犬增加了PRV传播的几率，所以猪场应严禁犬、猫等动物进入，同时加强灭鼠工作。

7.4 免疫忽视是猪伪狂犬病不稳定的诱因

近几年，随着猪病复杂化，人们更多地关注圆环病毒病、蓝耳病、流行性腹泻、口蹄疫，而忽视伪狂犬病防控。很多猪场自认为是伪狂犬病阴性场，因此放松了该病的免疫。对于后备猪只免疫1次就进行配种，商品猪只免疫1次，且免疫时间过早，忽视仔猪喷鼻免疫及肥猪阶段的加强免疫，造成哺乳仔猪早期感染发病及中大猪出现免疫空白而成为野毒感染阳性猪，导致生长肥育猪与种猪之间形成循环感染，增加了该病的不稳定性。

7.5 优质的疫苗及优秀的方案是成功防控猪伪狂犬病的保障

猪用疫苗的质量通常从3个方面进行评价。

7.5.1 毒株 毒株的好坏主要由毒株的安全性、免疫原性和稳定性所决定。国际上主流猪伪狂犬病疫苗为Bartha K61株。该毒株是自然弱毒株，安全性高、免疫原性好、无毒力返强的风险。Bartha K61株gE基因缺失疫苗[5]，可以区别野毒和疫苗毒，有利于猪场伪狂犬病的净化。

7.5.2 效价 伪狂犬病疫苗效价单位是TCID50（组织培养半数感染量）或CCID50（细胞培养半数感染量）。我国伪狂犬病疫苗效价标准为103.7TCID50/头份，国际优秀疫苗效价一般不低于105.0TCID50/头份。疫苗中有效抗原含量高，可以刺激机体产生更高的保护性抗体，从而更有效地阻断病毒的循环感染。

7.5.3 佐剂 疫苗佐剂一般分为油质佐剂和水质佐剂：油质佐剂注射应激大，产生抗体较慢，抗体维持时间长；水质佐剂好抽易打，应激小，抗体产生快，但抗体维持时间短。A3佐剂是一种新型佐剂，其主要成分为树脂和左旋咪唑，不含油成分，注射应激非常小。其与疫苗同时作用，能够更好地诱导细胞免疫与体液免疫，从而使得疫苗作用持久有效。

面对当前伪狂犬病感染压力，既要选择优质的疫苗，也应因地制宜地采取优秀的免疫方案，从而为猪伪狂犬病的防控提供保障。

8 小结

目前伪狂犬病已成为养猪业中最主要的疾病之一，尽管研究表明PRV基因发生了一定的变异[6-7]，但是与经典毒株属于同一血清型。现有经典毒株疫苗依然能为猪提供良好的免疫保护[8-9]。作为养猪生产者，应该利用现有的手段去解决问题，而不应过多地纠结病毒变异问题。伪狂犬病的防控及净化是一套系统工程，我们要提高防控意识，切实做好生物安全、确保后备猪gE阴性、制定合理免疫程序等相关工作。

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