一例肉鸡新城疫与大肠杆菌病混合感染的诊断

董冠波

2016年10月，山东省某肉鸡场33日龄商品肉鸡发生了一起以体温升高、精神沉郁、呼吸困难、下痢、排黄白色或黄绿色稀粪并混有黏液或血液等、呼吸道和消化道均出现典型症状的疫病。为对此次疫病及时确诊，笔者进行了发病情况、临床症状和病理变化等临床诊断以及细菌分离与鉴定、病毒分离与鉴定等实验室检测，现将整个诊断过程介绍如下。

1临床诊断

1.1发病情况

某养殖场饲养的4，000余只33日龄商品肉鸡突然发病，刚发病时零星死亡，3d后死亡数量迅速增加，1周内共死亡800余只，死亡率达20%。疫病发生后养殖场曾先后利用红霉素、庆大霉素进行药物治疗，均未能有效控制疫情。

1.2临床症状

发病鸡出现体温升高，精神沉郁，呼吸困难，具有呼噜声，咳嗽，眼半闭或全闭，食欲废绝，鼻腔和口腔分泌物增加，口角常有酸臭黏液流出，有摇头和吞咽动作，下痢，粪便呈黄白色或黄绿色稀粪并混有黏液或血液等症状。

1.3病理变化

解剖病死鸡可见嗉囊内充满酸臭味液体；喉头和气管内含大量黏液、充血、出血；心包膜浑浊、增厚、附着灰白色绒毛状渗出物；肝脏肿大、边缘钝圆、附着黄白色纤维素性渗出物；腺胃肿胀、出血、溃疡，肠管变薄；肠道内肿胀，肠黏膜呈广泛性出血。

2细菌分离与鉴定

2.1细菌分离培养与镜检观察

将采集的病死鸡的心脏、肝脏等病料样品分别接种于麦康凯琼脂和营养琼脂，37℃培养至24h后，营养琼脂和麦康凯琼脂分别生长出圆形、隆起、光滑、边缘整齐的无色和粉红色菌落。单菌落经涂片、革兰氏染色及镜检均可见两端钝圆的革兰氏阴性短杆菌，符合大肠杆菌的形态特征。

2.2生化试验

取纯培养的分离菌株接种于各生化反应管中，37℃培养至24h后，可见分离菌株能够发酵葡萄糖、蔗糖、核糖、麦芽糖、乳糖和半乳糖，不能够发酵甘露糖，甲基红试验、吲哚试验均为阳性，H2S产生试验、枸橼酸盐利用试验和V-P试验均为阴性，符合大肠杆菌的生化特征。

2.3致病性试验

将20只昆明系小白鼠随机分为2组（攻毒组和对照组），每组10只，攻毒组小鼠腹腔接种纯培养的分离菌株，0.2mL/只，对照组小鼠接种培养基，隔离饲养。攻毒组小鼠在接种后12h内全部死亡，死亡小鼠的心脏、肝脏等组织经涂片、革兰氏染色和镜检可见革兰氏阴性小杆菌。对照组小鼠无死亡，饮食、精神状态等良好。

2.4药敏试验

分离菌株对13种兽医临床常见药物表现出了不同程度的敏感性，其中高敏药物5种（氟苯尼考、环丙沙星、氧氟沙星和头孢噻肟等），中敏药物3种（阿莫西林等），低敏药物3种（红霉素、四环素等），耐药药物2种（土霉素、庆大霉素）。

3病毒分离与鉴定

3.1病毒分离

取病死鸡的气管、肝脏和心脏等病料样品加入5倍体积灭菌生理盐水捣碎，经0.45μm滤膜过滤除菌后尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚10枚，0.2mL/胚，鸡胚在接种后60～72h集中死亡，死亡鸡胚具有全身充血、出血及爪子发红等典型特征，无菌收集死亡鸡胚的尿囊液。

3.2血凝试验（HA）

采用常规HA试验操作方法测定分离毒株尿囊液对1%鸡红细胞的凝集效价为27。

3.3中和试验（VN）

取分离毒株尿囊液与新城疫阳性血清等量混合均匀，置于4℃过夜，次日尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚10枚，鸡胚接种后均未死亡，至接种后120h，剖检鸡胚可见鸡胚发育正常，未见充血、出血等症状。收集鸡胚的尿囊液，测定其对1%鸡红细胞的凝集效价为20。

3.4致病性试验

将20只7日龄SPF雏鸡20只随机分为2组（攻毒组和对照组），每组10只，攻毒组雏鸡滴鼻接种分离毒株尿囊液，0.1mL/只，对照组雏鸡接种生理盐水，隔离饲养。攻毒组雏鸡在接种后72h内全部死亡，死亡雏鸡表现出高热、呼吸困难、黏膜和浆膜出血等典型症状。对照组雏鸡无死亡，饮食、精神状态等良好。

4综合诊断结果

综合临床诊断以及实验室细菌学和病毒学检测结果，诊断为新城疫和大肠杆菌病混合感染。

5讨论

新城疫和大肠杆菌病均是鸡的常发病和多發病，当鸡群同时感染这2种疫病时，疫情更加严重，死亡率更高。疫苗免疫接种和药物治疗分别是新城疫和大肠杆菌病的主要防治方法，如防治措施得当则可避免2种疫病的发生。但在兽医临床中受母源抗体干扰、疫苗质量、免疫技术和鸡群的健康状态等多种因素困扰，往往造成新城疫疫苗的免疫失败。养殖单位长期大量滥用抗菌药物导致了菌株的耐药性，造成药物预防与治疗大肠杆菌病失败。本病例的发生原因应该是鸡舍通风不良，潮湿，氨气浓度较大，鸡群体液免疫水平降低，鸡群新城疫抗体水平未能有效保护新城疫病毒感染，同时并发大肠杆菌病，而养殖场长期使用的抗菌药物已使大肠杆菌产生了耐药性，导致了药物治疗效果不明显，造成死亡率增加。养殖场收到诊断结果后通过新城疫疫苗紧急免疫接种以及交替使用氟苯尼考等敏感性药物，迅速控制了疫病，将经济损失降至了最低。故在兽医临床养殖中保持通风，避免受潮、受寒、拥挤和刺激等，定期消毒，定期进行抗体监测，保持鸡群具有较高的抗体滴度，交替轮流使用药物，可有效预防新城疫和大肠杆菌病的发生。endprint