食源性沙门氏菌血清型鉴定及耐药性研究

王 静，钱 晶，庞芳芹，王国红，康立超

（新疆农垦科学院农业部食品质量监督检验测试中心，新疆 石河子 832000）

0 引言

沙门氏菌是一种全球性重要的人畜共患病原菌，又是最常见的引起细菌性食源性疾病的病原菌。发展中国家每年大约有2 000万人感染沙门氏菌，导致大约20万人死亡，其中55%由食源性沙门氏菌感染；欧美发达国家也受沙门氏菌的威胁[1-2]。食源性沙门氏菌在畜禽健康、人类公共安全及食品安全研究等方面都具有重要意义。沙门氏菌大部分感染是由于饮用被污染的水或食用被污染的食物，如新鲜和加工肉类、家禽、鸡蛋、乳制品和新鲜农产品等，从而引起食物中毒，甚至死亡[3]。中国每年约3亿人因沙门氏菌感染而患病，占病原菌食源性疾病总数的70%—80%[4]。食源性疾病对人类健康危害很大，是重要的公共卫生问题。中国细菌性食物中毒中，70%—80%是由沙门氏菌引起，而在引起沙门氏菌中毒的食品中，90%以上是肉类等动物性产品，其中鸡是沙门氏菌最大的储存储主[4，13]。生禽肉中沙门氏菌检出率各地也不一样，2011年，薛成玉等对黑龙江省480份肉类样品中沙门氏菌的污染情况进行了调查，生禽肉沙门氏菌的检出率为19.00%[14]。诸葛石养2013年分析了广西共检测生鸡肉样品158份，阳性36份，检出率 22.78%，血清型以德尔卑沙门氏菌为主[15]，与杨修军报道吉林省食源性沙门氏菌检出率28.33%相近[16]。2010—2012年，尹明远调查了乌鲁木齐市生鸡肉的沙门氏菌的感染率，达到9.14%，以肠炎沙门氏菌为主[11]。

在人类临床治疗、农业及畜牧业生产中，抗生素仍然是对付各种病原菌的首选药物。抗生素广泛使用及滥用产生的选择性压力使得很多病原菌，包括沙门氏菌出现了多重耐药（Multi—dru gResistance，MDR）现象。监测数据表明，整个沙门氏菌属的多重耐药率已从20世纪90年代的20%增加到了21世纪初的70%[5]。病原菌耐药性的不断增强将使现有抗生素失去相应的治疗功效。由于耐药性可通过食物链或环境在人与食品、人与人或人畜之间传递，正在快速增加的沙门氏菌耐药性不但给食品性动物生产和公共卫生安全造成极大的危害，同时对全球食品安全和人类健康也是一个巨大的威胁[6-7]。J.Breuil等对25 526株沙门氏菌进行耐药性监测，结果发现，从1994年到1997年，沙门氏菌对6种常用抗生素的耐药率均超过了70%，对萘啶酸的耐药率上升了69%。S.C等人对1 710株人源、动物源、食源性沙门氏菌进行耐药性监测，除头孢噻呋外，所有菌株对12种常用抗菌药物均有明显的耐药性，其中动物源性沙门氏菌的耐药率为98%，人源性沙门氏菌的耐药率为95%，食源性沙门氏菌的耐药率92%[3，17]。张秀丽等[18]对河南省食源性和禽源性沙门氏菌的耐药性研究发现，沙门氏菌整体耐药率达到100%。新疆食源性沙门氏菌的报道主要是在乌鲁木齐市的调查，主要是肉与肉制品。而新疆餐饮食品中沙门氏菌的污染很低[8]，关于沙门氏菌的耐药性方面报道则更少[9-12]。

本实验以9类11种食品样品共计360份样品为研究对象，按照GB4789.4—2010进行沙门氏菌分离鉴定及血清分型，用VITEK—2及AST—GN13药敏卡进行药物敏感性试验，以了解新疆食源性沙门氏菌的菌型分布与耐药情况，有助于食品卫生的监督检查和管理。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品

试验材料来自2016年新疆及兵团的6个市或师的送检样品，包括肉与肉制品100份（生禽肉50份和熟肉制品50份）、水产及其制品30份（动物性淡水产品20份和动物性海水产品10份）、豆制品40份 （即食发酵豆制品30份和即食非发酵豆制品10份）、冷冻饮品20份、速冻米面制品20份（速冻面米熟制品）、地方食品 60份（凉皮、凉面、拌面、抓饭等）、餐饮食品60份（街头流动快餐10份和学生餐50份）、儿童食品20份（学校周边即食儿童食品）和坚果及籽类10份（熟制坚果与籽实食品），9类11种食品样品共计360份。

1.1.2 主要试剂和仪器

缓冲蛋白胨水 （BPW）、四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂和营养琼脂等，购自北京陆桥技术股份有限公司，科玛嘉沙门氏菌显色培养基购自郑州博赛生物技术股份有限公司，GN卡和AST—GN13卡来自法国梅里埃公司，沙门氏菌诊断血清购自宁波天润生物药业有限公司。标准鼠伤寒沙门氏菌（ATCC14028）购自中监所。

1.2 方法

1.2.1 分离鉴定

按照GB 4789.4—2010标准执行，生化鉴定按照VITEK—2无菌操作说明进行实验，选用GN鉴定卡。血清学鉴定按照血清试剂盒产品说明书进行实验。

1.2.2 药敏实验

将菌液稀释到0.50—0.63麦氏浊度，吸取145 μL加入到 3 mL 0.45%盐水中混匀，选用AST—GN13卡，按照VITEK—2说明书上机实验。

2 结果与分析

2.1 分离鉴定

360份样品中分离到7株沙门氏菌 （编号为1—7，0为标准菌株），其中生禽肉中分离到6株，3株肠炎沙门氏菌，2株鼠伤寒沙门氏菌，1株山夫登堡沙门氏菌。熟制坚果与籽实食品中分离到1株肠炎沙门氏菌（表1）。

表1 沙门氏菌血清型分布Table 1 Serotype distribution of Salmonella

2.2 药敏实验

7株食源性沙门氏菌对头孢唑林、头孢替坦、阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素5种抗生素的耐药率为100%，对呋喃妥因耐药率为57.14%，对氨苄西林和氨苄青霉素/舒巴坦耐药率为28.57%（表2），标准沙门氏菌株也对头孢唑林、头孢替坦、阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素5种抗生素有耐药性。1号和5号菌药敏结果完全一样且是同一血清型 （肠炎沙门氏菌），6号菌与0号标准菌株药敏结果完全一样，均是鼠伤寒沙门氏菌，2号菌和4号药敏结果完全一样，3号和7号药敏结果完全一样，但都不是同一种血清型。血清型与药敏结果没有相关性。

3 结论与讨论

本次共检测9类11种食品样品共计360份样品，在50份生禽肉中分离到6株沙门氏菌，占生禽肉样品数的12%，血清型以肠炎沙门氏菌为主。坚果及籽类也检出一株肠炎沙门氏菌，新疆地区生禽肉沙门氏菌血清型以肠炎沙门氏菌为主。

目前，国内外对沙门氏菌的防治通常选用传统的抗生素类药物，有研究表明，在动物中使用抗生素造成非伤寒沙门氏菌产生耐药性，这种耐药菌可通过食品或直接接触感染人。由耐药菌引起的沙门氏菌爆发流行，在世界各国都有发生。本实验发现，沙门氏菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素等氨基糖苷类的药物和头孢唑林、头孢替坦等头孢类药物100%耐药。食源性沙门氏菌对常用抗菌药物的耐药性日趋严重，且耐药谱越来越广，不但给食品安全造成极大危害，也对人类健康产生巨大威胁。

本文只针对新疆兵团9类11种食品进行了沙门氏菌分离鉴定和耐药性研究，期望实验结果能为建立公共卫生预警数据库和开展食品安全危险性评估提供科学依据。

表2 沙门氏菌药敏试验Table 2 Antimicrobial susceptibility test of Salmonella

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