玛咖不同提取物对雄性精子生成的影响

韦会平(通讯作者) 陈恺

（攀枝花学院医学院 四川 攀枝花 617000）

在我们以往对“玛咖不同提取物对雄性小鼠交配能力的影响”研究中，已经发现玛咖能显著提高雄性小鼠的交配能力，其药用活性成分主要存在于水提物中，且可能是多种成分共同作用的结果。本文在此基础上，进一步以攀枝花产玛咖为研究对象，通过动物试验观察其对雄性小鼠精子生成能力的影响，揭示玛咖提高小鼠性功能可能的作用机制。

1.材料与方法

1.1 药品与试剂

玛咖由攀枝花三博士科技有限公司提供，为产自四川省攀枝花市海拔3300的格萨拉风景区的正品晒干黄玛咖。苯甲酸雌二醇由宁波第二激素厂生产（批号20151121）。其它试剂均为市售分析纯。SZX7型体视显微镜(日本，Olympus公司)；DMILLED 型倒置显微镜（德国，Leica公司），SC-100-01-02-C型一次性精子计数板（荷兰，Leja公司），Direct-Q5型MilliQ超纯水器（美国，Millipore公司）。其它有低温高速离心机、电子天平、微量移液器、手术器械、眼科剪、眼科镊、持针钳、酒精灯等。

1.2 试验动物

6～8周龄清洁级昆明系小鼠，购于重庆市中药研究所动物中心（动物合格证号SCXK(渝)20150006），雌、雄各半，体重18～22g。雌鼠群养，雄鼠单笼饲养，控制光照时间为每日7:00～18:00，饲喂普通饲料，自由饮水。

1.3 玛咖提取物的制备玛咖样品粉碎，过40目筛，依次分别用10倍体积的石油醚、无水乙醇、蒸馏水在50℃下磁力搅拌回流提取3次，每次30 min，回收溶剂，再分别用1%聚山梨酯溶解，得到醚提取物、醇提取物、水提取物三种不同的混悬剂。另取等量玛咖粉末样品，混合用蒸馏水作溶剂进行提取，同样的方法制备得到混合水提取物的混悬剂。所有混悬剂玛咖含量均相当于生药250mg/mL.

1.4 试验方法

1.4.1对雄鼠体重及性器官重量的影响50只成年雄性小鼠随机平均分为6组：对照组（0.9%生理盐水）、醚提取物组（5 g生药/kg BW）、醇提取物组（5g生药/kg BW）、水提取物组（5 g生药/kg BW）及混合水提取物组（5g生药/kg BW），各组均连续灌胃给药28d，灌胃容积均为0.2mL/10gBW，qd。试验期满后，将雄鼠颈椎脱臼致死，并解剖分离雄性性器官及附属组织（睾丸，附睾，精囊和腹侧前列腺），清洗附着的结缔组织，精确称重并计算脏器系数[4]。

1.4.2 对雄鼠精子生成的影响 雄鼠睾丸置于4mL37℃、0.9%生理盐水中，用眼科剪剪碎，37℃温育20min，使精子游离出来，过滤残余组织后充分混匀，覆盖矿物油至37℃保存。附睾尾精子悬液的制备同上[5]。采用一次性精子计数板分别对睾丸、附睾尾精子悬液进行精子计数，计算睾丸精子日生成量（Daily Sperm Production,DSP），其计算公式为：DSP=睾丸总精子数/精子平均生成时间。其中，小鼠精子平均生成时间为4.84d[6]。

2.结果与分析

2.1 对雄鼠体重及性器官重量的影响结果见表1。玛咖不同提取物对雄鼠体重及睾丸、附睾和精囊脏器系数的影响与对照组相比无显著差异。

表1 玛咖不同提取物对雄鼠体重及性器官脏器系数的影响（±s，n=10）

表1 玛咖不同提取物对雄鼠体重及性器官脏器系数的影响（±s，n=10）

注：与对照组比较，*代表P＜0.05，**代表P＜0.01

组别 增加体重（g） 睾丸脏器系数 附睾脏器系数 精囊脏器系数对照组 18.53±1.87 0.671±0.091 0.225±0.083 0.113±0.077醚提取物组 17.82±1.69 0.658±0.097 0.221±0.059 0.108±0.046醇提取物组 18.12±2.01 0. 664±0.0630.226±0.074 0.112±0.069水提取物组 18.08±2.14 0.681±0.088 0.231±0.094 0.109±0.081混合提取物组 17.97±1.79 0.675±0.074 0.227±0.088 0.113±0.068

2.2 对雄鼠精子生成的影响结果见表2。

玛咖不同提取物中醚提取物组、醇提取物组对雄鼠睾丸总精子数、DSP以及附睾尾总精子数无显著影响，而水提取物组、混合水提取物组都可以显著提高雄鼠睾丸总精子数、DSP以及附睾尾总精子数（P＜0.05）。混合水提取物组都的雄鼠睾丸总精子数、DSP以及附睾尾总精子数显著高于水提取物组。

表2 玛咖不同提取物对雄鼠精子生成的影响（±s，n=10）

表2 玛咖不同提取物对雄鼠精子生成的影响（±s，n=10）

注：与对照组比较，*代表P＜0.05，**代表P＜0.01

附睾尾总精子数（107/g）对照组 89.32±6.17 18.45±1.26 13.53±1.33醚提取物组 88.12±8.74 19.24±1.94 14.15±1.67醇提取物组 91.56±6.54 18.92±1.36 13.88±2.01水提取物组 116.15±7.17* 23.00±1.49* 16.01±1.27*混合水提取物组 128.93±5.78** 25.37±1.18** 18.49±1.09**组别 睾丸总精子数（106/g）睾丸精子日生成量（106/g•d）

3.结论与讨论

本试验中，各试验组对雄鼠体重及睾丸、附睾和精囊脏器系数都无显著影响，而仅混合水提取物组和水提取物组而对睾丸总精子数、DSP以及附睾尾总精子数有显著的增加作用。这充分说明，玛咖能显著提高雄性小鼠的精子生成能力，其活性成分主要存在于水提物中。以往的很多试验都证明，玛咖能显著提高试验动物的性功能[3-4,6-9]。本试验结果与与Gonzales C等人的研究结果较为一致[8]。

本试验中，攀产玛咖在用石油醚、乙醇先行提取后，再用水提取得到的水提取物，和不用石油醚、乙醇先行提取，而直接用水提取得到的混合水提取物的药用功效存在显著差异。后者的睾丸总精子数、DSP以及附睾尾总精子数均显著高于前者。这充分说明在用石油醚、乙醇和水依次提取玛咖的过程中，可能有部分药用活性成分进入了石油醚或乙醇的提取物中，导致水提取物的药用功效显著降低。而混合水提取物中，存在多种成分的共同作用，导致其对雄鼠精子生成的影响更为显著。

有研究资料表明，关于玛咖提高雄性性功能的机制，可能与其中含有的玛咖酰胺、玛咖烯以及丰富的精氨酸和果糖等关系密切[10-11]。王曦晨等人的研究表明，玛咖水提浸膏具有提高半去势大鼠的交配能力和阴茎勃起功能的作用，其机制可能与调整失衡的血清性激素水平有关[4]。我们以往对攀产玛咖的测定分析表明，玛咖中生物碱、水溶性多糖、精氨酸、Zn的含量都较高[12]。现代科学研究证明，这些成分本身与动物的性能力、精子的生成或活力等都有一定关系。本试验中，玛咖混合水提取物对雄性小鼠精子生成能力的影响要显著高于水提取物，这证明玛咖对小鼠性功能的影响极有可能是这些成分共同作用的结果。

综上所述，本试验充分表明，玛咖能显著提高雄性小鼠的精子生成能力，药用活性成分主要存在于水提物中，且可能是多种成分共同作用的结果。

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