牛大肠杆菌病病例报告

李剑静 （广西岑溪市动物疫病预防控制中心 543200）

牛大肠杆菌病是由大肠杆菌引起牛腹泻、肠炎、肠毒血症和败血症的一种急性传染病，甚至引起牛死亡。主要是通过消化道、子宫及脐带等途径传播，患病牛和带菌牛是最主要的感染源。该病的发生与舍棚卫生条件、饲养条件等因素有关。

2017年10月，广西地区某牛场部分牛排稀水样或血样粪便、呼吸急促，养殖户用抗生素和葡萄糖生理盐水进行用药治疗，未见效果，随后有两头牛出现死亡。对病死牛进行解剖，剖开可见肺出血，肝脏有坏死点、肠壁薄。经临床诊断和实验室检测，确诊该病例为大肠杆菌引起牛的死亡，现将诊断结果报道如下。

1 实验室诊断

1.1 细菌分离培养

无菌采取病死牛的肺脏、肝脏接种划线于TSA板和麦康凯琼脂平板，放置37℃培养12~48h，挑取单个菌落进行革兰氏染色、镜检。挑取单个菌落划线接种于伊红美蓝平板上，观察菌落形态。

1.2 病原鉴定

采集病死牛的肺等器官，用RNA病毒抽提试剂盒进行提取RNA，用特异性引物进行RT-PCR检测牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒。

1.3 生化试验

挑取单个菌落进行纯培养，再将菌接到生化微量管进行葡萄糖发酵试验、明胶试验、吲哚试验、甲基红试验、尿素酶试验和H2S试验。

1.4 动物致病性试验

取健康小鼠16只，均分成两组，一组为试验组8只，另一组为对照8只。试验组小鼠按剂量为 0.3ml/只 （1×109CFU/ml）进行腹腔注射，对照组则接种同等剂量的生理盐水。

1.5 药敏试验

用生理盐水稀释分离株纯培养物，吸取150μl稀释过的培养物放到麦康凯琼脂平板上，涂匀，用镊子夹取药敏纸片放入板内并轻轻按压，37℃培养12~24h后观察药敏结果。

2 结果

2.1 细菌分离鉴定

TSA平板和麦康凯琼脂平板接种24h后，TSA板长出边缘整齐、中等大小、半透明的菌落；麦康凯琼脂板长出玫红色菌落。在伊红美蓝平板，可见紫黑色的金属光泽。革兰氏染色镜检可见该菌为两端钝圆、革兰氏阴性短杆菌，符合大肠杆菌的特征。

2.2 病原鉴定

病料经RT-PCR扩增、电泳，未发现有牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒。

2.3 生化试验

葡萄糖糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验为阳性；明胶试验、H2S试验、尿素酶试验为阴性，符合大肠杆菌的特性。

2.4 动物致病性试验

接种6h后，试验组小鼠开始出现精神萎靡、厌食等症状；24h后有5只小鼠出现死亡，死亡率为62.5% （5/8）；48h后，试验组小鼠共死6只，死亡率为75%。对照组小鼠正常。

对死亡小鼠剖检，肺部有出血点、肝肿。无菌采集肺部接种于麦康凯琼脂平板上，结果与病料分离菌一致。

2.5 药敏试验

该菌对头孢曲松、头孢噻肟、阿米卡星、卡那霉素敏感；对链霉素、利福平、庆大霉素、四环素、青霉素G、复方新诺明耐药。

3 小结与讨论

（1）通过临床观察、细菌分离鉴定、病原检测、生化试验、动物致病性试验确诊该病例是由大肠杆菌感染引起的死亡。

（2）拉水样或血样粪便的因素很多，主要有沙门氏菌、牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌、牛轮状病毒、牛冠状病毒感染以及动物的饲舍环境和卫生条件等引起。本次试验未分离到沙门氏菌，RT-PCR也未检测到牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒，这说明该病例是由大肠杆菌感染引起。

（3）大肠杆菌广泛存在于自然界，有些特殊抗原血清型的大肠杆菌具有致病性。 马长宾等[1]报道血清型O101、O78、O141、O44、O15均可引起犊牛腹泻。李玉等[2]报道血清型O35和O78也可使奶牛患有乳房炎。此外，致病性的大肠杆菌除与O抗原有关外，还与K抗原、H抗原等有关。以O157：H7为代表的大肠杆菌引起的急性肾功能衰竭和溶血性尿毒综合症也受到广泛关注。由于血清型的多样性，各地区的优势血清型可能存在差异，因此筛选优势血清型是非常重要的。本次从病死牛病料中分离到1株具有致病性的大肠杆菌，究竟是由哪种血清型引起牛致病，还有待进一步的研究。

近年来，随着养殖规模的不断加大，动物发病的几率也越来越大。养殖户在饲料中盲目加入抗生素防治细菌感染，加之大肠杆菌具有接触传播耐药基因的特征，从而导致细菌产生耐药性，甚至出现多重耐药。尹泽东等[3]报道96株大肠杆菌均出现多重耐药。Lee等[4]报道从韩国家畜粪便中分离株37株大肠杆菌对氨苄青霉素的耐药性最高，四环素和链霉素次之。本次的试验中，大肠杆菌除了对头孢曲松、头孢噻肟、阿米卡星、卡那霉素敏感外，其余对链霉素、四环素等6种药物具有耐药性。因此，在治疗的过程中要先进行药敏试验，再进行用药，以提高药物的使用率，减少耐药菌株的出现。

[1]马长宾,陈文武,王忠山,等.致犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国动物检疫,2015,32（3）:78-82.

[2]李玉,敖日格乐,王纯洁,等.临床型乳房炎奶牛致病性大肠杆菌血清型研究[J].中国奶牛,2010（12）:40-42.

[3]尹泽东,肖康,金志强,等.贵阳市散养户猪、鸡源性大肠杆菌耐药性调查[J].山地农业生物学报,2010,29（1）:85-87.

[4]Lee J H.Antimicrobial resistance of Escherichia coli O26 and O111 isolates from cattle and their characteristics[J].Veteri-nary Microbiology,2009,135（3/4）:401-405.