高效液相色谱仪测定食品中苏丹红

□ 王晓琴 广东省惠州市食品药品检验所

高效液相色谱法优点显著，有着非常广泛的用途，在环境监测领域、临床化学领域、药物研究领域、食品检验领域、石油化学领域以及生命科学领域等都有一定的应用。而当前国内外对于苏丹红的测定基本上采用的是高效液相色谱仪，笔者在本文中选用LC5500高效液相色谱仪对于食品中的苏丹红进行测定研究，该种液相色谱仪具有灵敏度高、稳定性能好的特点，其最低检测浓度可以达到0.01μg/kg，测定苏丹红的保留时间的标准偏差为0.85%～2.95%，峰面积相对标准差为0.95%～1.65%；梯度洗脱基线平直，无漂移，噪声低，样品回收率能够达到80%～95%。

1 材料与方法

1.1 试剂

正己烷A.R.、丙酮色谱纯、甲酸A.R.、乙腈色谱纯、三氧化二铝、纯水重蒸馏水、苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。苏丹红Ⅰ为指示剂，苏丹红Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为A.R.，苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ标准储备液。

1.2 仪器

LC 5500高效液相色谱仪、254nm紫外检测器、多孔硅胶型键合相YWG一CH,颗粒度10u、微量注射器、P-101高压泵(双泵)、恒温柱箱、超声波清洗器。

1.3 色谱条件

检测器：紫外-可见光检测器、色 谱 柱 M18柱、5.6mm ×480mm，10μm，流动相A液（B泵），0.1%甲酸-乙腈+丙酮，B液(A泵)0.1%甲酸-水+乙腈。梯度洗脱程序如下。

开 始0min时，B液85%，A液35%；15min时，B液 85%，A液35%；33min时，B液 150%，A液0%；40min时，B液150%，A液0%；45min时，B液 85%，A液 35%；50min时，B液85%，A液35%。

进样量20μL。绘制苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ标准色谱图。

2 结果与讨论

2.1 灵敏度测试

将苏丹红混合溶液（0.2 μg/mL）加入HPLC之中，然后再绘制出其色谱图像，取苏丹红溶液5g，那么其最低检测浓度为0.04 μg/kg。

2.2 重复性实验

根据实验方法将苏丹红混合液（10μg/ML）进行连续的8次测定，对其保留时间与峰面积进行测定，然后计算其算数平均值、偏差以及标准差，得到实验结果如下。

苏丹红1R平均值 8.55，标准差0.121，CV 1.68%；苏丹红1 A平均值158545，标准差1831.4，CV 1.14%。

苏丹红2R平均值12.33，标准差0.2953，CV 2.954%；苏丹红2A平均值332013，标准差5473.6，CV 1.60%。

苏丹红3R平均值18.25，标准差0.3066，CV 2.32%；苏丹红3A平均值472762，标准差4565.2，CV 0.95%。

苏丹红4 R平均值26.88，标准差0.1565，CV 0.84%；苏丹红4 A平均值430633，标准差6902.3，CV 1.63%。

2.3 线性关系实验

苏丹红Ⅰ、II、III、Ⅳ标准系列混合溶液配制采用苏丹红I、II、III、Ⅳ标准储备液配制标准系列混合溶液，浓度分别为2.0、1.5、2.5、3.0、3.5μg/mL，根据其实验仪器测定锋面面积，以此绘制出其校准曲线。

苏丹红I、Ⅱ、III在2.0～3.5μg/mL，苏丹红Ⅳ在2.0～ 3.0μg/mL的区间都呈现出了较好的拟合线性关系。它们相关系数分别为0.98877、0.98850、0.98840、0.98834。 从 而证明出了苏丹红标准溶液的浓度与其峰面积基本上属于单调的正比例函数关系，其峰面积随着浓度的增加而增加。

2.4 样品测定和加标回收率试验

分别取辣椒油3g和香辣脆5g各4份,然后对这两种样本中所含的苏丹红成分进行测定，根据前文的方法将辣椒油样品和香辣脆样品加入苏丹红四种标准溶液之中，然后测定其浓度，最后计算其平均回收率，如下。

辣椒油和香辣脆的8份加标量都为25.0 μg，辣椒油4份测得量分别是：15.5、19.0、16.5、15.0，香辣脆4份测得量分别是：16.5、14.5、17.0、14.5。辣椒油4份回收率为：80%、90.5%、85.5%、80% ，香辣脆4份回收率为：75.5%、85%、75.5%、78.6%。

上述实验结果表明，所选定的两种样本中都未测得苏丹红，但是所测定的回收率的值偏低，这也许是由于A2l03活性以及基质干扰等因素的影响，具体是什么原因还需要进一步的验证研究，对于不同厂家与批号的A2l03需要通过实验来确定其活性成分以及程度，然后在选取实验所需要的A2l03。

3 结论

通过本文的研究可知，采用高效液相色谱仪法测定食品中苏丹红成分的方法具有较高的灵敏性和准确性，且具备良好的线性关系，是一种高效、实用的检测方法。