高胆红素对干、湿化学法测定血氨的影响

李海宁，李小佩，宋晓东，刘 波，张春艳

(南京医科大学：1康达学院,2康达学院附属医院,江苏连云港222100)

0 引言

肝性脑病是指在排除其他已知脑疾病前提下,继发于肝功能紊乱的一系列严重的精神神经综合征,主要临床表现为意识障碍、行为异常和昏迷［1］。血氨是一个反映肝功能严重损伤与否的良好指标,肝脏严重损伤时,血氨浓度升高,是引起肝性脑病的重要原因［2－5］。临床血氨的测定过程中,由于肝炎患者的血清标本多为高胆红素性血清标本,对血氨的测定有一定的干扰,导致血氨的检测结果明显低于实际水平,甚至出现负值这种明显偏离临床的现象［6］。为此,本研究通过湿化学法与干化学法比较高胆红素血清原标本和稀释后标本的血氨浓度,发现采用稀释去除胆红素的方法或采用准确性、特异性较好的干化学法来检测肝病患者血氨水平,可获得准确的检测结果。

1 资料和方法

1.1 标本来源选取南京医科大学康达学院附属医院自2017年6月至2018年6月收治的重度黄疸肝病患者40例作为观察组,其中男22例,女18例,年龄40～65岁,平均年龄为(53.6±3.5)岁,胆红素含量＞100 μmol/L；同时期正常对照组40例,其中男23例,女17例,年龄42～66岁,平均年龄为(54.2±3.6)岁,胆红素含量＜19 μmol/L。两组标本年龄、性别等无明显差异,具有可比性。

1.2 方法两组患者体内的胆红素及血氨测定均采用全自动生化分析仪完成,所选试剂为仪器的配套试剂。对照组与观察组分别给予干化学法及湿化学法进行检测,分别对比两组行不同检测方法下的血氨浓度。根据前期倍比稀释标本的实验结果,标本的胆红素浓度选择相应的稀释倍数,使稀释后胆红素浓度降至19 μmol/L以下,再分别给予干化学法及湿化学法进行检测,对比观察组去除高胆红素前后行不同检测方法下的血氨浓度。

1.3 统计学处理所得数据通过SPSS18.0软件进行分析,以±s的形式对数据进行表示,计量资料采取t-检验,P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组干、湿化学法检测的血氨浓度比较行湿化学检测的患者血氨浓度为(38.69±7.06)mmol/L,行干化学法检测的患者血氨浓度为(85.15±9.06)mmol/L,组间比较,差异有统计学意义(t＝4.042,P＜0.05)。

2.2 观察组稀释法去除高胆红素前后的血氨浓度比较湿化学法检测去除高胆红素后血氨浓度为(85.63±8.02)mmol/L,与未去除高胆红素前(38.69±7.06)比较,差异有统计学意义(t＝4.474,P＜0.05)。干化学法检测去除高胆红素后血氨浓度为(88.00±8.73)mmol/L,与未去除高胆红素前(85.15±9.06)比较,差异无统计学意义(t＝0.227,P＞0.05,图1)。

2.3 对照组干、湿化学法检测的血氨浓度比较行湿化学法检测的患者共40例,血氨浓度为(46.55±8.87)mmol/L,行干化学法检测的患者共40例,血氨浓度为(49.76±8.89)mmol/L,组间比较,差异无统计学意义(t＝0.256,P＞0.05),这与之前的文献报道［7］相一致。

3 讨论

目前临床血氨检测过程中的影响因素较多,比如溶血、脂血、高胆红素、标本运输时间及保存等,导致检测结果的差异大、准确性差,从而严重影响临床的诊疗工作［8－10］。 血氨测定方法中,以湿化学法(谷氨酸脱氢酶法)和干化学法最为常见。湿化学法具有特异性高、标本用量少及快速的优点［11］,其主要的原理是R1试剂含有少量乳酸脱氢酶,在预反应中除去血浆中干扰氨测定的丙酮酸,氨在谷氨酸脱氢酶作用下与α-酮戊二酸、NAD(P)H反应,在340 nm吸光度的下降与血氨浓度成正比,通过与标准液比较,即可计算出标本中氨的含量。干化学法检测血氨具有避免交叉污染、操作简便、反应快速的优点,是临床血氨检测的常用方法。标本加样后所有的反应均在一张干片中进行,并可通过分布层去除大分子物质的干扰,血浆中氨通过半透膜到达指示层与氨指示剂发生反应,呈深蓝色,颜色的深浅与标本中氨含量成正比［12］。

湿化学法测定血氨时,标本中高浓度的胆红素会吸收一定的光波,胆红素经血红素加氧酶作用后生成胆绿素,再经还原酶作用生成间接胆红素的过程中可提供2个H+,起到抗氧化的作用［13］,其大量存在时影响谷氨酸脱氢酶法中的氧化反应,对血氨检测造成干扰。而干化学法具有较高的特异性和准确性,血浆中的氨通过半透膜到达指示层与氨试剂反应,可消除标本本身高胆红素的影响,对血氨检测结果影响较小。本研究测定结果显示应用湿化学法及干化学法对高胆红素血症患者的血氨检测,干化学法结果明显高于湿化学法,其检测结果差异具有统计学意义(P＜0.05)。湿化学法测定高胆红素血症患者血氨水平时,稀释法去除高胆红素可以有效提高血氨水平,稀释前后的检测结果差异有统计学意义(P＜0.05)；而干化学稀释前后的血氨水平差异无统计学意义(P＞0.05),这与之前的报道干化学法在分析性能上优于湿化学法也是一致的［14］。

多数肝病患者的血清标本高胆红素水平较高,而高胆红素在血氨的测定过程中具有负干扰作用,湿化学法难于准确检出患者的血氨水平,甚至出现负值这种明显偏离临床的现象。而干化学法相较于湿化学法则能提供相对准确的血氨检测结果,协助临床准确判断患者血氨水平,及时给予有效的治疗措施。同时,由于干、湿化学法测定血氨浓度的差异性,建议复查时选择同一方法去检测,真实地反映血氨浓度的变化情况［15］。

4 结语

对于一般标本,湿化学法与干化学法血氨浓度检测水平基本一致,可以采用低成本湿化学法检测血氨水平,而对于高胆红素血症患者的标本,由于检测结果受检测方法及胆红素浓度的影响,则应采用稀释的方法或采用准确性、特异性较高的干化学法来检测,从而获得准确的血氨检测结果。