参黄补益颗粒的含量测定方法研究

陈 婷

（福建省肿瘤医院药剂科，福建 福州 350014）

近年来，中药药理、药效研究表明，补益气血的中药能促进骨髓造血功能的修复，促进放化疗等引起的骨髓功能损伤的修复，从而提高癌症患者的生活质量并延长其生存期[1]。参黄补益颗粒的处方是中医科专家长期在临床使用的验方，由汤剂制成颗粒剂，本处方是由黄芪、淫羊藿等几味中药组成，具有益气生血，补肾填精的功效。适用于放、化疗后白细胞减少，贫血及免疫功能低下者。本研究采用HPLC法测定参黄补益颗粒中淫羊藿苷的含量[2]。

1 仪器与试药

Agilent1200型快速液相色谱仪（美国安捷伦），RE-2000型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），HHS21-8电热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂），LIBRORAEU-210型电子天平（日本岛津），SHZ-ⅢB型循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂），DHG-9145A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒新科技有限公司）。

淫羊藿苷对照品（批号：110737-200415，含量测定用），黄芪、淫羊藿、甘草、肉苁蓉等药材购于福建省尤溪仙锦药业有限公司，党参购于安徽省本草国药饮片有限公司，乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 参黄补益颗粒的制备：取处方量黄芪、党参、淫羊藿、肉苁蓉、甘草等，加80%乙醇浸泡0.5 h，回流提取2次，每次1.5 h，合并提取液。将提取液浓缩至适量；加入阿胶粉、糊精、甜菊苷及水适量，混匀，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。制得的本品为褐色或棕褐色的颗粒或粉末，气香、味甘。依据《中国药典》2015年版一部附录ⅠC颗粒剂下规定，对制得的三批样品（101112、101114、101116）的粒度、水分、溶化性进行了检查，三批样品粒度均＜15%，水分＜6%，均在5min内全部溶化，符合药典规定，检查合格。

2.2 色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（伊利特 Hypersil ODS2，4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相A为0.2%磷酸溶液，流动相B为乙腈，按下表1进行梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长270 nm，柱温40 ℃[3]。淫羊藿苷分离度为1.63，分离良好，理论塔板数为170339。见表1。

表1 梯度洗脱

2.3 样品提取方法。对照品储备液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，加入甲醇，制成每1 mL含40 µg淫羊藿苷的溶液，即得。

供试品溶液的制备：称取参黄补益颗粒约2.5 g于25 mL容量瓶中，加入适量的蒸馏水，超声直至颗粒完全溶解后，取出，放冷至室温，然后加入流动相稀释至刻度，摇匀，所得即为供试品溶液。

阴性对照液的制备：除药物外，称取其他各原料按相同方法制成颗粒，按照供试品溶液的制备方法制备，即得。

结果见图1，表明除药物外的其他原辅料对测定无干扰，淫羊藿苷的保留时间约为28.6 min。

2.4 线性关系考察：精密量取上述淫羊藿苷对照品储备液各0.5、1.0、2.0、5.0、7.0 mL分别于10 mL量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀，连同储备液本身，制得浓度10.0～200.0 µg/mL的淫羊藿苷对照品溶液。过滤，精密吸取各浓度对照品溶液的续滤液10 µL进样，按上述色谱条件进行分析。以峰面积对对照品溶度进行线性回归，淫羊藿苷的线性方程为A＝14.38C－0.058，r=0.999 9，结果表明，在10.0～200.0 µg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.5 加样回收率试验：精密称取参黄补益颗粒9份，每份0.3g，分别加入淫羊藿苷对照品适量，按上述方法制备高、中、低浓度的供试品溶液各3份，精密吸取10 µL进样分析。按下式计算回收率，结果表明淫羊藿苷的回收率均在95%～105%，RSD值均＜2%，结果符合要求。

式中 A为样品中被测成分含量 B为加入对照品量 C为实际测出成分含量

图1 参黄补益颗粒HPLC色谱图

2.6 重复性试验：制备供试品溶液6份，每份精密吸取10µL其续滤液，进样测定淫羊藿苷的峰面积。结果，RSD值为0.77%，表明该方法重现性符合规定。

2.7 精密度试验：制备供试品溶液，精密吸取10 µL其续滤液，连续进样6次，测定淫羊藿苷的峰面积。结果RSD值＜2%，表明该方法精密度良好。

2.8 稳定性试验：精密吸取“2.7”项下的供试品溶液，每隔2 h进样1次，测定淫羊藿苷的峰面积，结果RSD值为0.29%，实验结果表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.9 样品测定：取参黄补益颗粒剂三批样品（101112、101114、101116）制备供试品溶液，按外标法计算供试品中各有效成分含量，结果见表2。

表2 三批样品测定结果（n＝3）

3 讨 论

本处方中的黄芪、党参、淫羊藿、甘草、肉苁蓉等对白细胞介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子（TNF）等细胞因子具有诱生作用并可以提高其活性，进而诱导肿瘤细胞凋亡。临床使用的汤剂煎液体积大，味苦，服用携带不便且易发霉不能久贮，本研究将其制成颗粒剂后，既保持了汤剂吸收快，显效迅速的特点且其体积小，运输、携带、服用方便，同时加入的矫味剂甜菊苷掩盖了中药的苦味，提高了患者的依从性。淫羊藿苷是淫羊藿的主要成分，因此我们选择淫羊藿苷作为质量控制标准[4]，方法简便、快速，而且结果可靠，可对参黄补益颗粒的质量进行控制。

[1] 陈义萍,徐勇.补中益气汤治疗肿瘤研究进展[J].亚太传统医药,2016,12(16)：65-67.

[2] 龙国友,李开斌,刘兴鹏,等.HPLC法测定芪胶升白胶囊中朝藿定C和淫羊藿苷的含量[J].药物分析杂志,2015,35(4)：719-722.

[3] 俞吉,朱裕林,桑冉,等.高效液相色谱法测定骨疏灵颗粒中淫羊藿苷含量[J].实用药物与临床,2015,18(6)：691-693.

[4] 杨炳川,杨浩然,方应权,等.HPLC法测定复方玄驹胶囊中淫羊藿苷的含量[J].中国药房,2015,26(9)：1282-1283.