TUBB3和TopoⅡ表达与老年女性乳腺癌患者术后化疗临床预后的回顾性分析

董冰，汪洁

1.上海市静安区中心医院（复旦大学附属华山医院静安分院）普外科，上海200040；2.复旦大学附属华山医院普外科，上海200040

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年1月—2014年6月于复旦大学附属华山医院及静安分院收治的手术治疗后接受辅助化学治疗的女性乳腺癌病例，进行生存情况电话回访。病例纳入排除标准：（1）年龄在60～79岁之间的女性乳腺癌患者，所有患者入院前、术前均未做过肿瘤方面治疗。（2）术后均接受以下3种化学治疗：A组紫杉类方案，即环磷酰胺+紫杉类，其中紫杉类为多西他赛（75 mg/m2，静脉滴注，第1天）或紫杉醇脂质体（135 mg/m2，静脉滴注，第1天）；B组蒽环类方案，即环磷酰胺+蒽环类，其中蒽环类为吡柔比星 50 mg/m2（静脉滴注，第 1天）或表柔比星（80～100 mg/m2，静脉滴注，第1天）；C组蒽环类联合紫杉类方案，从上述方案蒽环类药物（静脉滴注，第1天）和紫杉类药物（静脉滴注，第2天）中各选一种自由组合，剂量同前。每一种化疗方案中环磷酰胺的剂量要求按500 mg/m2（静脉滴注，第1天）计算，21 d为1个化疗周期。(3)完成3年临床随访且随访期内复发、死亡及存活等资料记录齐全的病例。排除以下病例：（1）未存留病理组织者；（2）未接受或完成至少3年临床随访的病例；（3）经免疫组化检测，肿瘤组织TopoII和TUBB3的表达均为阴性者。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫组化检测 获取研究对象肿瘤标本的病理蜡块，每份石蜡标本均经4m连续切片2张，采用免疫组化即用型二步法分别检测Topo II和TUBB3的表达。检测Topo II的一抗为鼠抗人拓扑异构酶II单克隆抗体（北京中杉金桥生物技术有限公司），二

抗为二步法免疫组化检测试剂（北京中杉金桥生物技术有限公司）。检测 TUBB3的一抗为微管蛋白 3抗体（北京博奥森生物技术有限公司），二抗为兔超敏二步法免疫组化检测试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）。用PBS代替一抗做阴性对照，阳性乳腺癌组织做阳性对照。TUBB3阳性定位为肿瘤细胞质内存在均匀的棕褐色颗粒或棕黄色颗粒；Topo II阳性定位为肿瘤细胞的细胞核内存在棕褐色或棕黄色着色颗粒。根据患者阳性细胞数规定：阳性细胞数＞75%，称之为（+++）；阳性细胞数为26%～75%，称之为（++）；阳性细胞数为10%～25%，称之为（+）；阳性细胞数＜10%，称之为（-）。TUBB3和Topo II检测结果为（-）和（+）可判定为阴性，若结果为（++）和（+++）则可判定为阳性。

1.2.2 临床病例分期判断 采用乳腺癌临床病理分期(AJCC)第七版进行判断。

1.3 统计分析 用SPSS19.0统计软件对数据进行分析，采用2分析构成比，＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基本资料 符合本研究病例共计209例，年龄＜65岁98例，≥65岁111例，平均年龄（68.3±6.4）岁。乳腺癌临床分期均为IIA期以上，其中IIA期67例、IIB期74例、IIIA期68例。接受紫杉类方案化疗者65例，接受蒽环类方案化疗者73例，蒽环类联合紫杉类方案化疗者71例。第3年随访终末时共有58例患者发生复发转移和死亡，复发率为20.57%（43例），死亡率为7.18%（15例）。见表1。

2.2 按年龄分级3年复发与死亡情况 3年随访终止时，＜65岁患者的复发率为16.33%（16/98)，≥65岁患者的复发率为24.32%（27/111），2组比较差异无统计学意义（2=2.04，＞0.05）。年龄≥65岁与＜65 岁患者之间的死亡率差异无统计学意义（2=1.19，＞0.05）。见表 2。

表1 乳腺癌术后随访3年生存情况（ ，%）

2.3 3种化疗组各年转归情况分析 3种化疗组患者的年龄与临床分期差异无统计学意义（2年龄=0.455，＞0.05；2临床分期=0.252，＞0.05）。3年随访终止时，接受3组治疗方案的患者之间临床预后为缓解、复发和死亡的构成比总体上不尽相同（2=12.37，＜0.05），3组中接受紫衫类治疗组死亡与复发例数较多，接受紫衫+蒽环类缓解例数较多。见表3。

2.4 TUBB3和Topo II基因表达组之间乳腺癌患者的术后化疗复发和死亡率比较 209例乳腺癌患者中TUBB3阳性102例，占48.80%；Topo II阳性101例，占48.32%；TUBB3和Topo II共表达6例，占2.88%。剔除TUBB3和TopoII共表达6例后，TUBB3和TopoII基因表达组患者的年龄与临床分期差异无统计学意义（2年龄=0.122，＞0.05；2临床分期=0.127，＞0.05）。3年随访终止时，TUBB3阳性组患者的复发率（27.45%，28/102）高于Topo II组（14.85%，15/101）（2=4.82，＜0.05）。TUBB3 阳性组死亡率为9.80%，Topo II阳性组死亡率为4.95%，差异无统计学意义（2=1.75，＞0.05）。TUBB3 和Topo II共表达6例随访终止时未发生复发和死亡。见表4。

2.5 TUBB3和TopoII基因表达与3种化疗方案转归情况分析 因TUBB3和Topo II共表达例数较少，故本研究剔除TUBB3和Topo II共表达患者，进一步分析不同基因表达组接受3种化疗方案后的总体转归情况。剔除TUBB3和TopoII共表达6例后，3种化疗方案组患者的年龄与临床分期差异无统计学意义（2年龄=0.119，＞0.05；2临床分期=0.283，＞0.05）。203例患者在接受A组、B组和C组化疗后在随访第3年时，102例 TUBB3表达组的3组化疗方案间缓解、复发和死亡例数构成比差异有统计学意义（Fisher2=9.55，=0.042），101例 Topo II 表达组3组化疗方案间缓解、复发和死亡人数构成比差异有统计学意义（Fisher2=8.68，=0.045）。TUBB3表达组3组化疗方案的缓解、复发和死亡例数构成比总体上不同于TopoII组（2=7.58，＜0.05），TUBB3 表达组缓解人数构成比（62.74%，64/102）低于Topo II组（80.20%，81/101）。见表5。

3 讨论

TUBB3和TopoⅡ 是预测患者OS的重要预后因素，TUBB3与TopoⅡ 基因表达与患者存活相关[3]。本研究发现3年随访终止时，TUBB3阳性组患者的复发率高于Topo II组，但TUBB3阳性组与Topo II组之间的死亡率差异无统计学意义，提示 TUBB3和Topo II与老年女性乳腺癌患者临床预后相关。

TUBB3是良好的紫杉类化疗敏感性预测因子，并且可能是紫杉类继发耐药的重要原因，在化疗前及化疗过程中检测其表达有助于化疗方案的选择[7]。TUBB3表达可能是非小细胞肺癌中多西紫杉醇化学耐药性的预测标记[8]，高 TUBB3表达可能与基于紫杉烷的化疗有关[9]。高TUBB3mRNA对无病生存率（disease-free survival，DFS）和OS具有预后意义，早期乳腺癌中TUBB3的转录活性是不良的预后因素[10]，TUBB3在诊断乳腺癌细胞脑转移方面起关键作用[11]。本研究发现TUBB3表达组患者分别接受紫杉类、蒽环类和蒽环类联合紫杉类化疗后在随访第3年时3个化疗组间缓解、复发和死亡例数构成比差异总体上有统计学意义，其中以蒽环类联合紫杉类化疗方案的无病生存率存最高，可能与TUBB3是紫杉类化疗敏感性预测因子有关。

表2 乳腺癌术后随访3年不同年龄段的生存情况（ ，%）

表3 乳腺癌术后随访3年不同化疗方案生存情况()

表4 乳腺癌术后随访3年TUBB3和TopoⅡ 表达组生存情况（ ,%）

表5 乳腺癌术后随访3年TUBB3和TopoⅡ 表达组不同化疗方案转归情况

TopoⅡ 表达作为乳腺癌的增殖标志物和预后因子[12]，也是蒽环类化疗药物疗效的敏感性预测指标[13]，可以作为蒽环类药物的疗效预测指标及乳腺癌预后指标[14]。本研究发现TopoII表达组患者分别接受紫杉类、蒽环类和蒽环类联合紫杉类化疗后在随访第3年时3个化疗组间缓解、复发和死亡人数构成比总体上差异均有统计学，以蒽环类联合紫杉类化疗方案的无病生存率存最高，该结果可能与TopoⅡ 是蒽环类化疗药物疗效的敏感性指标有关。

TopoⅡ 与人表皮生长因子受体-2可能有助于选择基于蒽环类的新辅助化疗的患者[15]。本研究中研究对象均为老年女性患者，且乳腺癌临床分期均为 IIA期以上，发现 TUBB3基因表达组经化疗后第3年的缓解率低于Topo II基因表达组，提示接受紫杉类、蒽环类和蒽环类联合紫杉类化疗时，相对于TopoII基因表组而言，TUBB3表达可能是临床预后较差相关因素，而Topo II基因表达则相对地预后较好。

[1] 李文涛，贾琳娇，丁超，等．三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2和 -微管蛋白Ⅲ基因在乳腺癌组织中的表达及其临床意义 [J]．中华实验外科杂志，2014，31（5）：947-949．

[2] 钟科．TUBB3和TOP2A与晚期乳腺癌患者临床病理特征及与紫杉类联合蒽环类药物治疗疗效的关系 [J]．第三军医大学学报，2016，38（14）：1659-1663．

[3] Xu YC,Zhang FC,Li JJ, .RRM1,TUBB3,TOP2A,CYP19A1,CYP2D6:difference between mRNA and protein expression in predicting prognosis of breast cancer patients[J].Oncol Rep,2015,34(4):1883-1894.

[4] 谢宗玉，程流泉，杨镇．乳腺浸润性导管癌磁共振扩散加权成像表观扩散系数与预后因子表达的关联性分析 [J]．中国医学影像学杂志，2015（3）：183-187．

[5] 张艳霞，马东华，孙冬霞，等．乳腺癌分子分型与新辅助化疗前后GST-和Topo-Ⅱ表达的相关性研究 [J]．现代中西医结合杂志，2015（24）：2643-2645,2651．

[6] 熊剑华．TopoⅡ mRNA在乳腺癌中的分布规律和预后及蒽环类药物疗效的观察 [J]．当代医学，2015（30）：66-67．

[7] 项友群，胡孝渠，郭贵龙，等．乳腺癌 3-微管蛋白表达与紫杉类药物化疗耐药的相关研究 [J]．中华全科医学，2014，12（5）：719-720．

[8]KairaK,Takahashi T,MurakamiH, .Theroleof III-tubulin in non-small cell lung cancer patients treated by taxane-based chemotherapy[J].Int J Clin Oncol,2013,18(3):371-379.

[9]KairaK,Serizawa M,KohY, .Expressionof excisionrepair cross-complementation group 1,breast cancer susceptibility 1,and III-tubulininthymicepithelialtumors[J].JThoracOncol,2011,6(3):606-613.

[10]PentheroudakisG,Batistatou A,KalogerasKT, .Prognostic utility of-tubulin isotype III and correlations with other molecular and clinicopathological variables in patients with early breast cancer:a translational Hellenic Cooperative Oncology Group(HeCOG)study[J].BreastCancerRes Treat,2011,127(1):179-193.

[11]KanojiaD,MorshedRA,ZhangL, . III-Tubulinregulates breastcancer metastasestothebrain[J].Mol CancerTher,2015,14(5):1152-1161.

[12]Tokiniwa H,Horiguchi J,Takata D, .Topoisomerase II alphaexpressionandtheKi-67labelingindexcorrelatewithprognostic factors in estrogen receptor-positive and human epidermal growth factor type-2-negative breast cancer[J].Breast Cancer,2012,19(4):309-314.

[13]马平．TopoⅡ、p53、Ki-67、c-erbB-2在乳腺癌组织中的表达 [J]．现代肿瘤医学，2011，19（8）：1545-1547．

[14]Di Leo A,Biganzoli L,Claudino W, .Topoisomerase II alpha as a marker predicting anthracyclines'activity in early breast cancer patients:ready for the primetime[J].Eur J Cancer,2008,44(18):2791-2798.

[15]Chen S,Huang L,Liu Y, .The predictive and prognostic significance of pre-and post-treatment topoisomerase IIin anthracycline-based neoadjuvant chemotherapy for local advanced breast cancer[J].Eur J Surg Oncol,2013,39(6):619-626.