雪菊水提物对东莨菪碱和亚硝酸钠所致小鼠记忆障碍的影响

岳志敏 陈新梅 夏梦瑶 李艳苹

(山东中医药大学药学院，山东 济南 250355)

雪菊，学名蛇目菊、两色金鸡菊，双色金鸡菊种植物，在新疆昆仑山一带，民间称之为“清三高花”，现代研究表明雪菊其有降血糖、降血压、降血脂的功效[1]。长期以来昆仑雪菊被当地居民当花茶饮用，新疆维吾尔医院也作为一种维药材应用[2]。目前，已从雪菊中分离鉴定出300多种天然成分[3]，其中含有黄酮类物质含量高达12% ，远超过其他各种菊花类。研究表明，黄酮类化合物可有效地清除体内的氧自由基，阻止细胞的退化、衰老及癌变[4]。本实验通过考察不同浓度的雪菊提取液在对抗东莨菪碱和亚硝酸钠所致记忆障碍的影响，为雪菊在益智保健等方面的应用提供科学依据。

1 实验材料

1.1 仪器

XZC-5A 型小鼠跳台仪(山东省医学科学院设备站提供)。

1.2 试剂

雪菊(新疆润元本草有限公司)；氯化钠(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)；氢溴酸东莨菪碱注射液(遂成药业股份有限公司)；亚硝酸钠(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)。

1.3 动物

质量18～22 g，SPF级雄性昆明种小鼠。由山东鲁抗医药股份有限公司质检中心实验动物室提供。动物合格证编SCXK(鲁)20160007。

2 实验方法与结果

2.1 雪菊的提取及不同剂量组给药浓度的配制

称取雪菊5.0 g，研碎成粗粉后，按料液比1∶10加入蒸馏水50 mL。90 ℃浸渍20 min，用16层纱布过滤，挤压出全部滤液后，再向滤渣中加入50 mL蒸馏水重复以上操作。合并两次滤液得原液。

该浸出液原液总黄酮含量为11.14mg/mL，为高剂量组的直接用药；取部分原液用蒸馏水稀释为原液浓度的1/2，为中剂量组给药浓度，即总黄酮含量为5.57 mg/mL；取部分原液稀释为原液浓度的1/4，为低剂量组给药浓度，即总黄酮含量为2.78 mg/mL[5]。

小鼠每天给药两次，每次0.1 mL/10 g，高、中、低剂量组分别按如上浓度给药，空白组给等体积生理盐水(0.9%的NaCl水溶液)。

2.2 雪菊提取液对东莨菪碱致记忆获得障碍模型小鼠的影响

雄性小鼠40只，在实验室中适应饲养7 d之后，按照体重随机分成4组，每组10只。分别为空白组，雪菊提取液低、中、高剂量组。小鼠每日自由取食，不限摄食量及饮水量。每日注意观察每组小鼠排泄情况及健康状况。

在连续灌胃给药21 d后，在末次给药30 min后、跳台训练30 min前，用东莨菪碱注射液以1.5 mg/kg的剂量腹腔注射，跳台训练时间为3 min，24 h后进行跳台行为学实验。记录小鼠5 min内受到电击的总次数，定义为跳台错误次数。小鼠第一次跳下平台的时间记为潜伏期。

结果表明，与空白组相比，低、中、高剂量组的跳台错误次数均有不同程度的减少，表明不同浓度的雪菊水提物对小鼠记忆获得障碍均有不同程度的改善作用，且中剂量组具有极为显著的差异性，低剂量组和高剂量组的数据也均呈现不同程度的显著性差异。

表1 雪菊提取液对东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍模型的影响Table 1 Effects of coreopsis tinctoria water extract on memory impairment in mice induced by scopolamine

注：与空白组比较，***P<0.001，**P<0.01，*P<0.05

2.3 雪菊提取液对亚硝酸钠致记忆巩固障碍模型小鼠的影响

另取小鼠40只，分组及给药同2.2项。

在连续灌胃给药21 d后，末次给药30 min后跳台训练，在跳台训练后，立即皮下注射亚硝酸钠，剂量为100 mg/kg，跳台训练时间为3 min。24 h后进行跳台行为学实验，跳台实验为5 min。

表2 雪菊提取液对亚硝酸钠致小鼠记忆获得障碍模型的影响Table 2 Effects of coreopsis tinctoria water extract on memory impairment in mice induced by natrium nitrosum

注：与空白组比较，**P<0.01，*P<0.05

经跳台实验数据检测，发现与空白组相比，低、中、高剂量组的小鼠跳台错误次数均有明显的减少，呈现统计学显著差异，且中剂量组不仅极为显著地减少了跳台错误次数，潜伏期与空白组相比也有较为显著的延长。

3 讨 论

雪菊水提物对东莨菪碱所致记忆获得障碍模型小鼠影响的数据表明，雪菊提取液对修复记忆获得障碍具有明显改善作用，原因可能是雪菊提取物总黄酮对于具有中枢和周围神经的抑制作用的较低浓度东莨菪碱造成抑制的大脑皮质有显著的拮抗作用，其改善作用可能与增强中枢胆碱能神经系统有关，从而修复了东莨菪碱引起的健忘倾向，降低了小鼠细胞因摄入部分东莨菪碱而造成的细胞麻痹作用。

雪菊水提物对亚硝酸钠所致记忆巩固障碍模型小鼠影响的数据表明，雪菊提取液对修复记忆巩固障碍也有明显改善作用，可能与雪菊水提取物能够有效解除小鼠亚硝酸钠中毒而引发的记忆巩固障碍有关。

通过对不同浓度雪菊提取物总黄酮对东莨菪碱及亚硝酸钠所致两种记忆障碍影响作用的实验研究，以及综合本实验组前期探索雪菊水提物对乙醇所致记忆再现障碍模型小鼠的影响[6]，发现雪菊总黄酮水提液在整个记忆过程所致障碍中均呈现有效的改善作用，并且改善效果均呈现显著性差异。其作用机制可能与雪菊水提物中的总黄酮能够清除自由基[7]，抗氧化等作用有关。

小鼠跳台实验做为动物行为学的测试方法，存在一定个体差异，且实验环境、动物饮食及昼夜节律对实验结果也有一定的影响[8]，因此本课题组同时也考察了另外一种行为学测试工具——避暗仪，对雪菊水提液的作用进行考察，实验结果与本研究所采用的跳台仪的结果基本一致，这从另一个侧面也证实了雪菊水提液对记忆障碍具有确切的作用。

[1] 方煊,李雅丽,陈新梅.雪菊黄酮对脂肪变肝细胞的降脂效果[J].温州医科大学报,2016,46(10):720～723.

[2] 张燕，李琳琳，木合布力·阿布力孜 等.新疆昆仑雪菊5种提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(7):166～169.

[3] 江虹，秦勇.雪菊活性成分提取及引种研究进展[J].天津农业科学，2015，21(8)：46-50.

[4] 方瑞萍，唐辉，黄剑 等.雪菊的药理作用及营养成分的分析方法研究进展[J].材料导报A:综述篇,2014,28(10):143～146.

[5] 邢佰颖，陈新梅，秦乐 等.昆仑雪菊总黄酮对小鼠负重游泳的影响[J].化工时刊，2017，31(1)：9～11.

[6] 秦乐，陈新梅，邢佰颖 等.雪菊总黄酮对小鼠体重及记忆再现障碍的影响[J].化工时刊，2017，31(2)：10～12.

[7] 刘博奥，刘继国，刘伟 等.天山雪菊不同溶剂提取物的抗氧化活性研究[J].中国酿造，2014,33(3)：71～75.

[8] 李运明，匡永勤，孙年怡 等.神经科学研究中动物行为学实验设计需要考虑的几个问题[J].西南军医，2015,17(5)：595～597.