环境因子对冬青卫矛白粉病菌分生孢子萌发的影响

高国伟+周小林+岳弘辰+迟梦宇+黄金光

摘要：自2014年以来，青岛地区冬青卫矛白粉病日趋严重，近三年发病率均在70%以上，对园林景观造成严重影响。粉状白粉菌（Erysiphe alphitoides）是引起冬青卫矛白粉病的病原菌，为进一步研究粉状白粉菌分生孢子生物学性状，在室内对分生孢子不同温度、碳源、时间等条件下的萌发率进行了研究。结果表明，粉状白粉菌分生孢子在28℃黑暗条件下置于清水中培养36 h萌发率最高。

关键词：冬青卫矛白粉病；粉状白粉菌；孢子萌发；环境因子

中图分类号：S436.8+5文献标识号：A文章编号：1001-4942（2017）12-0090-03

Abstract Euonymus japonicas powdery mildew has occurred seriously in Qingdao region since 2014 with the incidence rate up to 70%， which has serious impacts on landscape. Erysiphe alphitoides infecting E.japonicas in China was firstly reported in 2017.The rate of spore germination was investigated under different temperature， carbon sources and culture time. The results showed that the germination rate of E.alphitoides conidia was the highest in distilled water at 28℃ under darkness conditions for 36 hours.

Keywords Powdery mildew of Euonymus japonicas；Erysiphe alphitoides；Spore germination；Environmental factors

冬青卫矛（Euonymus japonicas Thunb）又名大叶黄杨、正木，常用作绿篱、绿球及各种造型，在全国分布广泛，是重要的常绿观赏植物。冬青卫矛白粉病能够引起叶片皱缩，新梢变白、畸形、生长受阻，严重时造成叶片和嫩枝干枯死亡。此病在日本、美国、欧洲等都有分布。在国内，1948年，凌立曾记载四川有冬青卫矛白粉病[1]。1991年，冯红对四川冬青卫矛白粉病进行了初步研究并鉴定其病原菌为Oidium euonymi-japonicae（Arcang.） Sacc.[2]。1995年，李士竹等首次在山东泰安市发现报道了冬青卫矛白粉病，其病原菌亦为O.euonymi-japonicae，但未发现其有性时期[3]。2001年，姜淑霞等对冬青卫矛白粉病的有性时期进行了室内诱发，发现了其有性阶段，并通过镜检确定为叉丝壳属（Microsphaera）（子囊菌亚门，核菌纲，白粉菌目）[4]，但在田間仍未发现有性阶段。2014—2017年，冬青卫矛白粉病在青岛地区发病严重，发病率高达70%以上。为有效地防控冬青卫矛白粉病，作者通过病原形态学及分子生物学方法首次明确了冬青卫矛白粉病病原菌为粉状白粉菌（Erysiphe alphitoides），首次发现了冬青卫矛白粉病病原菌自然条件下的有性阶段，为冬青卫矛白粉病的综合治理提供了一个新的理论依据[5]。为进一步研究粉状白粉菌分生孢子生物学性状，本研究在室内对分生孢子不同温度、时间、碳源等条件下的萌发率进行研究，以期为后续化学药剂及生防因子的筛选奠定基础，也为青岛地区冬青卫矛白粉病防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试病原材料为青岛市城阳区内公路两侧绿篱自然发病且病斑新鲜的冬青卫矛叶片。

1.2 试验方法

试验组采用悬滴法进行孢子萌发试验[6]。根据孢子萌发需求设置不同温度、时间、碳源条件，每隔12 h进行观察和统计，记录孢子萌发率。分生孢子萌发率（%）=（萌发孢子总数/被查孢子总数）×100[7]。

1.2.1 温度对孢子萌发影响的试验 用无菌水冲下冬青卫矛病叶上产生的分生孢子，配制成浓度为104～105个/mL的孢子悬浮液[8]，滴于凹面载玻片上，然后置于23、25、28℃培养箱中黑暗条件下保湿培养，每处理重复3次，每隔12 h进行镜检并统计分生孢子萌发率。

1.2.2 碳源对孢子萌发影响的试验 将冬青卫矛病叶上的分生孢子分别使用不同碳源：2%蔗糖溶液、2%葡萄糖溶液、冬青卫矛叶片煮沸液和清水配制成浓度为104～105个/mL的孢子悬浮液，滴于凹面载玻片上，置于28℃培养箱中黑暗条件下保湿培养，每处理重复3次，每隔12 h进行镜检并统计分生孢子萌发率。

1.2.3 培养时间对孢子萌发影响的试验 将冬青卫矛病叶上的分生孢子用无菌水配制成浓度为104～105个/mL的孢子悬浮液，滴于凹面载玻片上，置于28℃培养箱中保湿培养，在12、24、36、48 h分别观察统计分生孢子萌发率。

1.3 数据处理

采用Microsoft Excel进行数据统计。

2 结果与分析

2.1 不同温度对孢子萌发的影响

培养36 h后，白粉菌孢子芽管过长，孢子悬浮液内有其它杂菌菌丝生长，不再便于计数，所以孢子培养至36 h。孢子萌发率如图1所示，22℃和25℃条件下孢子萌发率并无太大差异，28℃条件下孢子萌发率最高，36 h时可达32%左右。表明，孢子最适萌发温度是28℃。

2.2 不同碳源对孢子萌发的影响

不同碳源营养条件下，36 h培养过程中孢子萌发率如图2 所示，清水处理孢子萌发率最高，2%葡萄糖次之，叶片煮沸液中孢子萌发率最低。表明无任何营养物质的清水中孢子萌发率最高，碳源营养物质对于孢子的萌发没有影响。endprint

2.3 不同时间对孢子萌发的影响

不同时间记录的孢子萌发率如图3所示，培养后孢子萌发率逐渐增加，且12～24 h时间段内增加较快，24～36 h时间段内萌发率增加较慢，36 h后萌发率几乎不再增加。所以冬青卫矛白粉病菌分生孢子培养以36 h为宜。

3 讨论与结论

冬青卫矛作为栽植面积大、分布广泛的绿化植物，对于改善生态环境有重要作用。近年来，冬青卫矛白粉病危害逐年加重[10，11]。通过分析环境因子对白粉病菌分生孢子萌发的影响，明确白粉病菌孢子萌发的条件，便于下一步针对白粉病进行室内药效测定。而白粉病菌作为专性寄生菌，不能在培养基上培养，必须分离到室外发病植株上的白粉病菌分生孢子进行试验。室外环境复杂多样，孢子悬浮液中难免会混有杂菌，杂菌菌丝生长在一定程度上会影响孢子萌发的观察。且野外生长的不同植株不同叶片上的孢子，其成熟度有差异，所以室内试验必须使用同一批次采自室外同一叶片上的分生孢子。

本研究结果表明，培养36 h是孢子萌发高峰；28℃为孢子萌发最适温度；清水中孢子萌发率最高，碳源营养物质对于孢子的萌发没有影响。前期研究结果表明，随着相对湿度的增加，孢子萌发率随之增高[9]。而不同碳源营养液有不同的相对湿度，在以上几种孢子培养液中，每100 g水种蔗糖溶解度為199.4 g，葡萄糖为87.67 g，可知相对湿度清水>2%葡萄糖>2%蔗糖，所以清水最利于孢子萌发。综上所述，白粉病菌分生孢子在28℃黑暗条件下置于清水中培养36 h后可得到最大萌发率。

参 考 文 献：

[1] Ling L.Host index of the parasitic fungi of Szechwan， China[J]. Plant Disease Repororyer，1948，173（Suppl）：1-38.

[2] 冯红. 大叶黄杨白粉病的初步研究[J]. 四川林业科技，1992，13（3）：57-60.

[3] 李士竹，刘振宁，陆燕君. 山东新纪录——大叶黄杨白粉病[J].山东林业科技，1995（1）：40-42.

[4] 姜淑霞，贾文，李存华，等. 冬青卫矛白粉病菌有性阶段初报[J].山东农业大学学报，2001，32（3）：377-378.

[5] Huang J G， Chi M Y， Sun X M， et al. First report of powdery mildew caused by Erysiphe alphitoides on Euonymus japonicas and its natural teleomorph stage in China[J]. Plant Disease，2017， DOI： 10.1094/PDIS-09-16-1297-PDN.

[6] 方中达. 植病研究方法[M].第三版.北京：中国农业出版社，1998.

[7] 臧睿，黄丽丽.苹果树腐烂病菌分生孢子萌发及其影响条件研究[J].西北农业学报，2007，16（1）：64-67.

[8] 张新春，黄荣辉. 1种使孢子快速萌发的好方法[J]. 中国瓜菜，2008（6）：40-41.

[9] 刘建伟，高婀娜，陈凤歌，等. 冬青卫矛白粉病发生规律及药效防治试验[J]. 湖北林业科技，2015（4）：29-31.

[10]周江鸿，夏菲，车少臣. 北京市2015年冬青卫矛白粉病流行原因与防控对策分析[J]. 园林科技，2015（3）：28-31.

[11]戴明勋，窦延堂，邢光耀，等. 聊城市城区冬青卫矛白粉病消长规律及病情相关性分析[J]. 安徽农业科学，2008，36（9）：3754-3755.endprint