一种复方抗菌喷剂抑菌效果的试验观察

黄慧颖 高静贤

一种复方抗菌喷剂抑菌效果的试验观察

黄慧颖 高静贤

目的 观察复方抗菌喷剂的抑菌效果。方法 分别参考GB15979－2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C4抑菌性能试验和《消毒技术规范（2002年版）》抑菌环试验方法，对该复方抗菌喷剂的抑菌效果进行评价。结果 该复方抗菌喷剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率均＞99.9%，该复方抗菌喷剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌环直径平均值分别为9.01 mm、12.12 mm。结论 该复方抗菌喷剂对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌均具有较强的抑菌效果。

复方抗菌喷剂；壳聚糖季铵盐；有机硅季铵盐；抑菌效果

复方抗菌喷剂是以壳聚糖季铵盐和有机硅季铵盐作为主要成分的外用液体喷剂。该产品具有促进创面愈合，抑菌预防创面感染的功效，为了解该产品的抑菌作用，文章采用两种不同的检测方法对该产品进行了抑菌效果的检测。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验样品 试验用复方抗菌喷剂主要成分为壳聚糖季铵盐和有机硅季铵盐，产品性状为液体。

1.1.2 试验菌株 大肠杆菌（8099），金黄色葡萄球菌（ATCC6538）。

1.1.3 培养基及试剂 营养琼脂培养基、0.03 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.2）、定性滤纸片（将滤纸片制成直径为5 mm的圆片，经压力蒸汽灭菌处理后，烘干备用）。

1.1.4 主要仪器 生物安全柜、培养箱、游标卡尺。

1.2 试验方法

抑菌性能试验与抑菌环试验分别参考GB15979－2002《一次性使用卫生用品卫生标准》[1]附录C4和《消毒技术规范（2002年版）》[2]2.1.8.2的方法进行。

1.2.1 菌液制备 取大肠杆菌（8099）、金黄色葡萄球菌（ATCC6538）的新鲜培养物，用5 ml 0.03 mol/L 磷酸盐缓冲液（以下简称PBS） 洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用PBS稀释配制试验浓度菌悬液，备用。

1.2.2 抑菌性能试验 取上述菌悬液，分别在4管被试样液（5 ml）和4管对照样液（与被试样品同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理）内滴加100 μl上述菌悬液（回收菌数为1×104cfu/ ml～9×104cfu/ ml），混匀，作用时间分别为2 min、5 min、10 min、20 min。作用至规定时间后，分别将被试样液（0.5 ml）及对照样液（0.5 ml）投入到含有PBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2～3个稀释度，分别吸取0.5 ml，置于两个平皿，用凉至40～45℃的营养琼脂培养基15 ml作倾注，转动平皿使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板。35℃培养48 h，作活菌菌落计数。试验重复3次，按公式计算抑菌率（计算公式：X = （A－B）/ A × 100%，X：抑菌率（%），A：对照样品平均菌落数，B：被试样品平均菌落数。）如抑菌率≥50%～90%，则产品有抑菌作用，如抑菌率≥90%，则产品有较强抑菌作用。

1.2.3 抑菌环试验 （1）抑菌片的制备：取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加20 μl样液，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置培养箱（37℃） 中烤干，或置室温下自然干燥后备用。（2）阴性对照样片的制备：取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水20 μl，干燥后备用。（3）试验菌的接种：用无菌棉拭子蘸取浓度为 5×105cfu/ml～5×106cfu/ml试验菌悬液，在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次，平板应转动 60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿，置室温干燥 5min。（4）抑菌剂样片贴放：每次试验贴放1个染菌平板，每个染菌平板贴放4片试验样片，1片阴性对照样片，共5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距25 mm以上，与平板的周缘相距15 mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，放置于37℃培养箱中，培养16～18 h观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径 （包括贴片） 并记录。试验重复3次。（5）抑菌作用的判断：抑菌环直径大于7 mm者，判为有抑菌作用。

表1 复方抗菌喷剂对大肠杆菌的抑菌率

表2 复方抗菌喷剂对金黄色葡萄球菌的抑菌率

表3 复方抗菌喷剂对大肠杆菌的抑菌环直径

表4 复方抗菌喷剂对金黄色葡萄球菌的抑菌环直径

2 结果

2.1 抑菌性能试验结果

试验结果表明，复方抗菌喷剂原液分别作用2 min、5 min、10 min、20 min，对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌抑菌率均＞99.9%（表1、表2），该产品对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用。

2.2 抑菌环试验结果

经测量，复方抗菌喷剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌环直径均大于7 mm（表3、表4），抑菌环直径平均值分别为9.01 mm，12.12 mm。结果表明，该复方抗菌喷剂对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌作用。

3 讨论

近年来，壳聚糖季铵盐及有机硅季铵盐已被越来越广泛的应用到医疗领域[3-4]，本文研究的复方抗菌喷剂中主要的抗菌成分即为壳聚糖季铵盐和有机硅季铵盐。壳聚糖是甲壳素的脱乙酰基产物，是一种白色无定型、半透明、略有珍珠光泽的固体。壳聚糖由于原材料不同和制备方法的差异，导致相对分子质量也从数十万到数百万不等。壳聚糖只能溶解于一些稀的无机酸和大多数有机酸中，不能直接溶于水中[5]，这在很大程度上限制了壳聚糖的应用。壳聚糖可经过季铵化修饰成为壳聚糖季铵盐[6]。壳聚糖季铵盐是聚阳离子化合物，具有良好的水溶性、絮凝性、生物相溶性、吸湿保湿性和抗菌性等特点[7]。有机硅季铵盐是一类新型阳离子表面活性剂，被广泛应用于日化及纺织品整理中，表现出很好的抑菌作用[8]。以壳聚糖季铵盐及有机硅季铵盐作为主要抗菌成分的复方抗菌喷剂经GB15979－2002《一次性使用卫生用品卫生标准》中抑菌性能试验方法和《消毒技术规范（2002 年版）》中抑菌环试验方法检测，试验结果均显示出该产品对以大肠杆菌为代表的革兰氏阴性菌和以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌均具有很好的抑菌性能。

[1]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局. GB15979－2002一次性使用卫生用品卫生标准[S]. 2002.

[2]中华人民共和国卫生部. 消毒技术规范[S]. 2002.

[3]冯小强，李小芳，杨声. 壳聚糖季铵盐的抗菌抑菌活性及其在医药领域的应用[J]. 中国食品工业，2011（6）：40-42.

[4]王楠，廉云敏，高岚，等. 有机硅季铵盐浸泡纯钛对白假丝酵母菌生长的抑制作用[J].国际口腔医学杂志，2017，44（2）：175-178.

[5]蒋挺大. 壳聚糖[M]. 北京：化学工业出版社，2001：9-12.

[6]王浩. 壳聚糖的改性研究进展及其应用[J]. 成都纺织高等专科学校学报，2017，34（1）：187-194.

[7]钟婧，洪艳，陈勇. 壳聚糖季铵盐的最新研究进展[J]. 中国组织工程研究与临床康复，2008，12（6）：1115-1118.

[8]苏晓明，钟宏，余新阳. 有机硅季铵盐的合成方法及应用[J]. 成都纺织高等专科学校学报，2008，25（3）：9-11.

Investigation on the Bacteriostatic Effect of Compound Antibacterial Spray

HUANG Huiying GAO Jingxian Biosafety Evaluation Center, Jiangsu Institute of Medical Device Testing, Nanjing Jiangsu 210019, China

Objective To study the bacteriostatic effect of the compound antibacterial spray. Methods Thehygienic standard for disposable sanitary productsGB15979-2002 bacteriostasis test of appendix C 4 andtechnical specification for disinfection (2002 Edition)bacteriostatic ring test were used to investigate bacteriostatic effect of the compound antibacterial spray. Results The bacteriostatic rates of compound antibacterial spray to Escherichia coli and Staphylococcus aureus were more than 99.9%. The diameter of bacteriostatic rings of Escherichia coli and Staphylococcusaureus were 9.01 mm and 12.12 mm, respectively. Conclusion Compound antibacterial spray has strong bacteriostatic effect on Gram negative bacteria and gram positive bacteria.

江苏省医疗器械检验所生物安全评价中心，江苏 南京210019

compound antibacterial spray; chitosan quaternary ammonium salt; organic silicon quaternary ammonium salt; bacteriostatic effect

R187

A

1674-9316（2017）27-0148-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2017.27.079