板蓝根药材中3种核苷高效液相法测定含量分析

赵亚丽

（河南省安阳市第三人民医院中药房，河南 安阳 455000）

神州药房

板蓝根药材中3种核苷高效液相法测定含量分析

赵亚丽

（河南省安阳市第三人民医院中药房，河南 安阳 455000）

R285.5

B

1004-2814（2017）12-1458-02

目的：分析板蓝根药材中3种核苷（尿苷、鸟苷、腺苷）高效液相法测定的含量。方法：用高效液相法测定板蓝根中尿苷、鸟苷、腺苷的含量，保持柱温在30℃，检测波长为254nm，梯度洗脱，流速保持在每分钟0.8mL。结果：尿苷在10.6～265.0 mg/L范围内线性关系良好，鸟苷在10.4 ～260.0 mg/L范围内线性关系良好。腺苷在10.8 ～270.0 mg/L范围内线性关系良好。平均回收率尿苷为101.2%，鸟苷为100.8%，腺苷为101.4%。测定精密度、重视性以及稳定性全部良好。结论：高效液相法测定板蓝根药材中3种核苷快速并且灵敏，检测方法简单，重视性理想，能够用于板蓝根药材的质量控制。

板蓝根；高效液相法测定；核苷

Objective：To analysis three kinds of nucleosides in Radix Isatidis （uridine, guanosine, adenosine）determined by HPLC method. Method: The content of uridine, guanosine and adenosine in Radix Isatidis was determined by HPLC,with keeping the column temperature in 30 degrees Celsius, the detection wavelength 254nm, gradient elution and the flow rate at 0.8ml per minute. Result: Uridine showed a good linear relationship at a range of 10.6 mg/L to 265.0 mg/L. Guanosine showed a good linear relationship at a range of 10.4 mg/L to 260.0 mg/L. Adenosine showed a good linear relationship at a range of 10.8 mg/L to 270.0 mg/L. The average recovery rate was 101.2% in uridine, 100.8% in guanosine and 101.4% in adenosine respectively.Precision of determination, reproducibility and stability are all good. Conclusion: for the three nuclear glycosides in Radix Isatidis and HPLC method is a fast determination method, with sensitive detection, simple operation mode, good reproducibility in determination of Radix Isatidis, which could be used for the quality control of Radix Isatidis.

Radix Isatidis；determination of HPLC；nucleoside

板蓝根属十字花科植物菘蓝的干燥根，性寒味苦，有凉血消斑、清热解毒功效，相关药理研究显示，板蓝根有抗菌、抗内毒素、抗病毒以及抗血小板聚集作用，可以提高机体免疫能力［1］。板蓝根药材和复制剂在临床中获得了比较广泛的应用，在早期对于板蓝根药材的质量控制主要集中于板蓝根药材中的靛玉红、有机酸、靛蓝以及氨基酸的含量测定，但研究显示，其药材中存在的尿苷、鸟苷及腺苷等核苷类成分对病毒核酸有干扰合成的作用，通常为中成药抗病毒活性成分，同时尿苷、鸟苷以及腺苷含量相对比较高，所以现在对于板蓝根中药的质量控制着重于对核苷类成分含量的测定。化学物质组学中显示，不管属于有效化学物质组或是有效化学成分群都对应着独有的功能主治以及某种疾病，所以对板蓝根药材中核苷类成分开展质量控制能够确保板蓝根的抗病毒效果。高效液相法测定板蓝根注射液中尿苷、鸟苷、腺苷含量，操作方式比较复杂，误差率相对比较大，同时对于液相条件要求较为苛刻［2］。本研究对高效液相法测定板蓝根药材中3种核苷高效液相法测定其含量的方法以及价值分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

应用仪器为高效液相色谱仪，其中包括DAD检测器，柱温箱，低压四元梯度泵，自动进样器以及化学工作站，板蓝根药材购买自药店，尿苷、鸟苷以及腺苷对照品。

1.2 方 法

采用0.1%冰醋酸-甲醇二元线性梯度洗脱，0～8min（95%冰醋酸∶5%甲醇），8～20min（90%冰醋酸∶10%甲醇），20～60min（60%冰醋酸∶40%甲醇），流速保持在1min0.8mL，检测波长为254nm，柱温保持30℃，尿苷理论塔板数为5600，鸟苷理论塔板数为8500，腺苷理论塔板数为8200，尿苷拖尾因子为0.96，鸟苷拖尾因子为0.99，腺苷拖尾因子为0.95，相邻峰分离度保持大于1.5。尿苷、鸟苷、腺苷对照品精密称取，加入甲醇溶液，制作每1mL含尿苷、鸟苷、腺苷分别为10μg的溶液，将其作为对照品溶液。选取板蓝根注射液，应用微孔滤膜进行过滤，选取续滤液当作供试品溶液。精密称取尿苷、鸟苷、腺苷对照品，装入10mL量瓶中，取50%甲醇溶液将其稀释到刻度，摇匀，得到尿苷对照品贮存液浓度1.06 g/L、鸟苷对照品贮存液浓度1.04 g/L、腺苷对照品贮存液浓度1.08g/L。对照品贮备液装入10mL量瓶中，取 50%甲醇溶解和稀释达到刻度并摇匀，分别取10μg注入液相色谱仪，同时记录色谱图［3］。

2 结 果

尿苷在10.6～265.0mg/L范围内线性关系良好，鸟苷在10.4～260.0mg/L范围内线性关系良好，腺苷在10.8～270.0mg/L范围内线性关系良好。用2.1色谱条件选取含量测定溶液开展测定，持续进样6次，尿苷峰面积RSD为2.3%，鸟苷峰面积RSD为2.6%，腺苷峰面积RSD为2.4%，显示精密度情况良好。用同一批样品，依照上述方法制定供试品溶液，同时按照2.1色谱条件实施测定，持续测定6次，尿苷平均含量为146.5mg/L，RSD为1.2%，鸟苷平均含量为94.4mg/L，RSD为1.4%，腺苷平均含量为148.9mg/L，RSD为1.6%。按加样回收率测定法，取已知含量的样品，在其中加入高剂量、中剂量以及低剂量对照品溶液，依照上述色谱条件实施测定，计算3种核苷平均回收率，结果显示尿苷平均回收率为101.2%，鸟苷平均回收率为100.8%，腺苷平均回收率为101.4%，测定精密度、重视性以及稳定性全部良好。精密量取对照品溶液以及供试品溶液分别10μg，注入液相色谱仪，依照外标法以峰面积计算，所得结果见表1。

表1 样品含量测定结果 （mg/L）

3 讨 论

依照药典方法利用水提醇沉工艺考察板蓝根药材中核苷类成分的含量，操作比较复杂，测定步骤比较多，误差率高，不能够真实反应板蓝根核苷类成分含量［4］。加入甲醇溶液处理，操作简单，产生的误差比较小，可以真实反应板蓝根核苷类成分含量，并且可以有效控制板蓝根的质量。采取高效液相法测定板蓝根核苷含量灵敏度比较高，回收率高，精密度好，操作方法简单，且能够缩短3种核苷类成分测定时间、降低试剂损耗。

［1］王钢力，聂黎行，迟玉明，等.HPLC法测定板蓝根和板蓝根颗粒中RS-告伊春和腺苷［J］.中草药，2015，25 （5）：507-508.

［2］S.P LI，P LI，C.M LAI，Y.X GONG，KELVIN K.W KAN，TINA T.X DONG,KARL W.K TSIM，Y.T Wang.Simultaneous determination of ergosterol, nucleosides and their bases from natural and cultured Cordyceps by pressurised liquid extraction and high-performance liquid chromatography［J］. Journal of Chromatography A，2013，20（6）：456-458.

［3］WEI-JUN KONG，YAN-LING ZHAO，XIAO-HE XIAO,CHENG JIN，ZU-LUN LI.Quantitative and chemical fingerprint analysis for quality control of Rhizoma Coptidischinensis based on UPLC-PAD combined with chemometrics methods［J］.Phytomedicine，2015，27（6）：742.

［4］H.FAN，S.P.LI，J.J.XIANG，C.M.LAI，F.Q.YANG，J.L.GAO，Y.T.WANG.Qualitative and quantitative determination of nucleosides,bases and their analogues in natural and cultured Cordyceps by pressurized liquid extraction and high performance liquid chromatography–electrospray ionization tandem mass spectrometry（HPLC–ESI–MS/MS)［J］.Analytica Chimica Acta，2016，26（1）：48-49.

2017-09-18