病毒性肝炎及肝癌患者血清GP73的表达及意义

万晓华，刘向祎，王凡，文江平，郭拥军，王胜来

(首都医科大学附属北京同仁医院检验科，北京 100730)

病毒性肝炎及肝癌患者血清GP73的表达及意义

万晓华，刘向祎，王凡，文江平，郭拥军，王胜来

(首都医科大学附属北京同仁医院检验科，北京 100730)

目的探讨血清高尔基体蛋白73(GP73)在病毒性肝炎及肝癌患者中的表达及临床意义。方法病例资料来源于2013-2015年首都医科大学附属北京同仁医院。应用双抗体夹心ELISA方法测定192例健康对照组、118例乙型肝炎组、131例丙型肝炎组和78例肝癌组患者的血清GP73水平。结果乙型肝炎组、丙型肝炎组和肝癌组患者的GP73浓度均明显高于健康对照组，差异均有显著统计学意义(P＜0.01)；在乙型肝炎患者中，HBeAg阳性组GP73浓度和HBV-DNA含量明显高于HBeAg阴性组，差异均有显著统计学意义(P＜0.01)；肝癌组患者的GP73与甲胎蛋白(AFP)呈正显著相关性(r=0.433，P＜0.01)。结论 与健康对照组比较，GP73在不同肝炎组及肝癌组患者中均明显增高，且随着疾病进展，GP73有明显增高趋势，表明血清GP73测定在病毒性肝炎及肝癌的诊断及监测疾病进程中具有重要意义。

高尔基体蛋白73；病毒性肝炎；乙型肝炎；丙型肝炎；肝癌

高尔基体蛋白73(Golgi protein-73。GP73)是新近发现的一种肝细胞癌相关蛋白[1-2]。肝细胞癌是一种恶性程度高、进展快、预后差的常见的恶性肿瘤，它的发生与乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染密切相关。在我国，HBV感染是肝脏疾病的主要病因，大约7.8%的人口携带HBV，近年来，HCV感染也呈日益增高的态势[3-4]。本研究应用双抗体夹心酶联免疫法，分别检测了乙型肝炎组(包括乙型肝炎HBeAg阳性组和乙型肝炎HBeAg阴性组)，丙型肝炎组、肝癌组和健康对照组的血清GP73水平，探讨GP73在不同病例组中的GP73的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例资料来源于2013-2015年首都医科大学附属北京同仁医院。本研究病例组分为三组，分别选取经临床确诊的乙型肝炎组患者118例(包括乙型肝炎HBeAg阳性组58例和乙型肝炎HBeAg阴性组60例)、丙型肝炎组患者131例和肝癌组患者78例。其中乙型肝炎HBeAg阳性是指血清学检测结果为乙肝表面抗原(HBsAg)阳性、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)阴性、乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性、乙型肝炎e抗体(HBeAb)阴性、乙型肝炎核心抗体(HBcAg)阳性的样本，乙型肝炎HBeAg阴性是指血清学检测结果为HBsAg阳性、HBsAb阴性、HBeAg阴性、HBeAb阳性、HBcAg阳性样本。健康对照组来源于本院体检科的健康对照人群，选取192例，经临床确认为身体健康者，包括肝脏生化指标正常、无肝脏疾病史、无酗酒史、无病毒性肝炎史及B超显示肝脏正常者。本研究健康对照组、乙型肝炎组、丙型肝炎组和肝癌组的中位年龄(范围)分别为43(21～56)岁、38(18～72)岁、41(22～62)岁和44(27～71)岁，性别构成情况男性/女性分别为88/104、66/52、72/59和46/32。

1.2 检测方法

1.2.1 样本采集 采用带有惰性分离胶的进口真空采血管分别抽取对照组和患者空腹静脉血4 mL，自然凝集30 min，室温4 000 r/min离心15 min分离血清，-80℃保存待测。

1.2.2 血清学检测方法血清GP73检测试剂盒由北京热景生物技术股份有限公司(北京)提供高尔基体蛋白73(GP73)定量测定试剂盒，采用双抗体夹心ELISA方法检测；乙型肝炎及丙型肝炎样本均采用雅培i2000SR发光免疫分析仪及配套试剂盒检测，乙型肝炎检测项目包括乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)。丙型肝炎检测丙型肝炎抗体；乙型肝炎HBV DNA含量检测试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司(广州)提供商品化试剂盒，采用ABI7300荧光实时定量PCR系统(Applied Biosystems,CA，USA)；肝癌组血清AFP测定采用UniCel DXI 800全自动化学发光分析仪，血清AFP检测试剂和相应校准品均由美国贝克曼库尔特公司提供。所有操作严格按照仪器及使用说明进行。

1.3 统计学方法应用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量数据以中位数和(或)百分位数表示，多组间比较采用Kruskal-Wallis检验，两组间比较采用Mann-Whitney检验，相关性采用Spearman相关性分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 血清GP73在不同组的分布特征 192例健康对照组的GP73浓度中位数(95%可信区间)为39.90(19.57～99.72)ng/mL，乙 型 肝 炎 组 为 58.35(24.25～210.08)ng/mL，丙型肝炎组为 67.30(12.54～290.56)ng/mL，肝癌组为200.40(31.59～556.79)ng/mL。与健康对照组比较，乙型肝炎组，丙型肝炎组和肝癌组患者的GP73浓度均明显高于对照组，差异均有显著统计学意义(P＜0.01)。此外，乙型肝炎组和丙型肝炎组患者的血清GP73浓度均明显低于肝癌组，差异均有显著统计学意义(P＜0.01)，见表1。

表1 血清GP73浓度百分位数在不同组的分布特征(ng/mL，中位数)

2.2 乙型肝炎HBeAg阳性及HBeAg阴性组患者的血清GP73及HBV DNA含量比较 乙型肝炎HBeAg阳性组患者的血清GP73浓度中位数(95%可信区间)为66.65(20.16～251.57)ng/mL，乙肝HBeAg阴性组血清GP73浓度中位数(95%可信区间)为48.85(21.46～154.39)ng/mL。如表2所示，健康对照组、乙型肝炎HBeAg阳性组及HBeAg阴性组血清GP73浓度差异有显著统计学意义(P＜0.01)。两两比较后发现，HBeAg阳性组和HBeAg阴性组GP73浓度均明显高于对照组，差异均有显著统计学意义(P＜0.01)，且GP73浓度HBeAg阳性组明显高于HBeAg阴性组，差异有显著统计学意义(P＜0.01)。

表2 乙型肝炎不同组别血清GP73和HBV DNA含量的分布特征

本研究中，乙型肝炎HBeAg阳性组明显高于HBeAg阴性组HBV DNA含量，差异有显著统计学意义(P＜0.01)。HBeAg阳性组HBV DNA含量中位数(95%可信区间)为5.41×106(0～7.97×108)IU/mL，其中有5例HBV DNA检测阴性，53例HBV DNA检测阳性。HBeAg阴性组HBV DNA含量中位数(95%可信区间)是 2.85×102(0～1.89×108)IU/mL，其中有 31例HBV DNA检测阴性，19例HBV DNA检测阳性。

2.3 血清GP73与乙型肝炎HBV DNA含量的关系 118例乙肝病例中，HBV-DNA阴性组46例，HBV DNA阳性组72例。HBV DNA阴性组的GP73浓度中位数(95%可信区间)为55.65(24.70～205.01)ng/mL，HBV DNA阳性组的GP73浓度中位数(95%可信区间)是59.30(17.73～233.79)ng/mL。与HBV-DNA阴性组比较，GP73浓度在HBV DNA阳性组差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.4 肝癌组GP73和AFP表达的相关性 本研究分别检测了78例肝癌组血清GP73和AFP浓度，GP73浓度中位数(95%可信区间)是200.40(31.59～556.79)ng/mL，AFP浓度中位数(95%可信区间)是131.51(1.80～8.75×104)ng/mL。相关性分析发现GP73和AFP呈明显的正相关(相关系数为0.433，P＜0.01)。

3 讨论

GP73是一种常驻高尔基体Ⅱ型跨膜糖蛋白，在正常人中仅在胆囊上皮细胞中表达，在肝细胞中几乎不表达；肝细胞受到病毒感染可引起GP73的高表达，肝癌患者中也发现肝细胞GP73表达量明显上调且血清的GP73含量也显著增高[1,5-6]。本研究表明，与健康对照组比较，GP73在肝癌组及各乙型肝炎组及丙型肝炎组均明显增高。

对于慢性乙型肝炎患者，本研究及文献[7-9]表明，血清GP73含量明显高于健康对照组。许正锯等[7]在对573例慢性HBV感染者研究发现血清GP73水平与慢性HBV感染者病情进展呈正相关关系，在不同血清HBV DNA含量之间比较，患者血清GP73水平差异无统计学意义，与本研究结果一致。鹿雷明[8]研究发现GP73是反映HBV相关性肝病患者进展重要指标，并与肝损害程度显著相关。Xu等[9]对253例不同病理类型的慢性乙型肝炎患者研究发现，GP73是一个反映肝炎疾病进展程度的有效标志物，血清GP73的水平与HBV DNA的复制水平并不相关，这与本研究一致。但Xu等[9]对比HBeAg阳性的乙型肝炎和HBeAg阴性的乙型肝炎血清GP73含量无统计学差异，而本研究中，乙型肝炎HBeAg阳性组的GP73水平显著高于HBeAg阴性组。

对于丙型肝炎患者，国外有报道GP73在含量明显高于健康对照[10-11]，但国内鲜有文献报道。Riener等[10]研究发现HCV感染者GP73明显高于健康对照组，并提示GP73是HCV感染肝脏疾病进展的有效标志物。Hu等[11]通过细胞培养研究发现，HCV感染的细胞GP73分泌量增加，当GP73含量增加时，HCV的复制量也进一步加剧，反之，GP73不表达或表达量很少时，HCV复制受抑制，这一现象从细胞及蛋白水平暗示了HCV和GP73正相关的作用机制，从而为GP73在HCV患者的抗病毒治疗中的作用提供了新的思路。

肝癌是第五大常见癌症和癌症的第三个死亡的主要原因之一，慢性乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒(HCV)感染是肝癌发生发展的重要病因之一。AFP是肝癌诊断的重要血清标志物[12-13]。本研究发现，肝癌组GP73明显高于健康对照组，且GP73和AFP有明显的相关性。血清GP73有望成为一个有用的指标，用以监测疾病的进展和HBV或HCV感染，进而早期预防肝癌的指标[3]。多项研究发现当GP73和AFP联合检测可明显提高诊断效率，有利于原发性肝癌的诊断与鉴别诊断[13-15]。付超等[16]研究发现，肝细胞癌患者不同治疗阶段，GP73也略有不同，原发性肝细胞癌治疗后组患者血清GP73含量明显低于治疗前组，而复发患者和肝转移癌患者没有明显差异，提示GP73对肝癌的预后和复发有辅助诊断的价值。

本研究存在以下局限：(1)各组病例数相对较少；(2)丙型肝炎组未能同时检测HCV RNA的情况，从而无法探究在丙型肝炎组血清GP73含量与HCV RNA的关系；(3)由于肝癌组病例数较少，本研究未对肝癌组依据病理分级进一步分组比较。对于GP73在病毒性肝炎及肝癌中的临床意义，更深入的研究依赖于病例数的进一步加大及病理分组的进一步细化。

综上所述，与健康对照组比较，GP73在不同肝病病例组均有明显增高，尤其在肝癌组，增高幅度更为明显。GP73有望成为乙型肝炎和丙型肝炎等肝癌高危人群筛查的良好指标。

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Expression and clinical significance of serum GP73 in patients with virus hepatitis and liver cancer.

WAN Xiao-hua,LIU Xiang-yi,WANG Fan,WEN Jiang-ping,GUO Yong-jun,WANG Sheng-lai.Department of Clinical Laboratory,Bejing Tongren Hospital,Capital Medical University,Beijing 100730,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of serum Golgi protein-73(GP73)in healthy controls and patients with virus hepatitis and liver cancer.MethodsSerum samples were obtained from patients who admitted to Beijing Tongren Hospital,Capital Medical University from 2013 to 2015.By Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA),serum GP73 was measured in 192 healthy controls,118 patients with HBV infection,131 patients with HCV infection and 78 patients with liver cancer.ResultsThe GP73 value in different liver diseases group was significantly higher than that in the healthy controls,respectively(P＜0.01).The GP73 value and quantitative HBV DNA of HBeAg-positive group were significantly higher than those of HBeAg-negative group,respectively(P＜0.01).GP73 had the significant positive correlation with AFP in liver cancer group(r=0.433,P＜0.01).ConclusionCompared with the healthy controls,GP73 in patients with different liver diseases is significantly increased.These results suggested that GP73 might play an important role in the diagnosis of liver diseases and monitor of disease progression.

Golgi protein-73(GP73);Virus hepatitis;Hepatitis B;Hepatitis C;Liver cancer

R512.6

A

1003—6350（2017）23—3872—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.23.028

北京市首都临床特色项目(编号：z141107006614007)；北京市优秀骨干人才项目(编号：2016-2018)

刘向祎。E-mail：13693328516@163.com

2017-04-28)