人凝血酶原复合物的小鼠急性毒性实验研究

郭心怡，张宝献，曹长雷，杨柳，王猛，滕世超

（1.华兰生物工程重庆有限公司，重庆涪陵 408100；2.长江师范学院，重庆涪陵408100）

人凝血酶原复合物的小鼠急性毒性实验研究

郭心怡1，张宝献1，曹长雷2＊，杨柳1，王猛1，滕世超1

（1.华兰生物工程重庆有限公司，重庆涪陵 408100；2.长江师范学院，重庆涪陵408100）

采用完全随机法对小鼠分组，通过剂量摸索性实验、预实验和最大耐受剂量实验对人凝血酶原复合物在小鼠体内的急性毒性进行了初步研究。结果表明：人凝血酶原复合物的最大浓度为16IU/mL，最大体积为0.5mL/20g鼠次；尾静脉注射后，小鼠行为、活动、体重、死亡等指标以及摄食、饮水、大小便均未发生异常；人凝血酶原复合物对小鼠的最大耐受量为800IU/kg，人凝血酶原复合物注射显示的临床剂量安全无毒。

人凝血酶原复合物；最大耐受剂量；毒性

人凝血酶原复合物（Human prothrombin complex concentrate，PCC）是从人的混合血浆中分离提取的一种组分，属于血浆蛋白制剂，主要成分有自身凝血酶原、凝血酶原转化因子、抗乙型血友病因子和凝血酶原[1]。在临床上，PCC主要用于治疗乙型血友病、因维生素K缺乏或患肝病而引起的出血等症状[2]。近年来，随着PCC分离技术的不断发展和安全性的不断提高，PCC使用量正在逐年增加。国内相关学术研究主要聚焦在PCC的分离纯化、功能机制、临床应用和安全性等方面[3-8]，PCC的毒性研究国内还尚未报道，为此，本文探究了PCC对小鼠机体的毒性效应，对PCC在小鼠体内的急性毒性进行了初步研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物

远交品系小白鼠（重庆市中药研究院实验动物研究所采购，华兰生物工程重庆有限公司饲养），昆明种属，个体2～3月龄、18～22g，雄（♂）、雌（♀）各半。生产许可证号：SCXK（渝）2012-0006，使用许可证号：SYXK（渝）2009-0001。

表1 人凝血酶原复合物小鼠剂量摸索性实验情况

表2 人凝血酶原复合物小鼠临床给药后观察结果

1.2 实验样品

华兰生物工程重庆有限公司生产的人凝血酶原复合物（批号：201208001）和人凝血酶原复合物稀释剂（批号：201206004）。

1.3 动物分组

采用随机法进行分组，将雌雄随机分开并对小鼠采用染色法编号，头部位为1号、右前肢为2号、右肋部为3号、右后肢为4号、尾根为5号、左后肢为6号、左肋部为7号、左前肢为8号、背部为9号、不染色为10号、其余编号重复；最后将实验动物以软件法按体重降序标号，用Excel“RAND”函数随机编号。

1.4 剂量选择及剂量分组

1.4.1 剂量摸索性实验

利用少量小鼠摸索，找出0%、100%估计致死量；测定半数致死量或浓度（LD50或LC50）；依据临床指导用量找出PCC最大给药量、静脉注射最大给药体积，取12只小鼠，禁食12h，不禁水。依据PCC常用给药量、10倍最大给药量和100倍最大给药量剂量设计3组，每组4只。

1.4.2 预实验

预实验以最大静脉注射给药体积进行，给药后连续观察7天，全程记录。

i值计算方式如下：

1.5 PCC最大耐受剂量实验方法

取雌雄各半的小鼠20只，不禁水但禁食12h。性别分开并按设计的给药浓度和体积，连续两次给药，每次间隔6h，记录小鼠的各种行为与反应。重复观察7天。

2 实验结果

2.1 剂量摸索性实验

取小白鼠12只，分别以设定的PCC临床剂量对小白鼠进行尾静脉注射，连续观察7天，全程记录小白鼠精神状态和死亡情况。结果表明，药物浓度在人凝血酶原复合物0%～100%的剂量范围是200～2 000IU/kg，见表1。

2.2 预实验

取小白鼠16只，随机分成4组，实验前禁食12h，不禁水。结果表明：药物浓度在人凝血酶原复合物0%～100%的剂量范围是400～1 600IU/kg，没有检测出Dmax和Dmin，因此，按照设计给药浓度每组4只动物继续，见表2。

2.3 最大耐受剂量实验

根据上面系列预实验得出人凝血酶原复合物0%～100%致死剂量为8～12IU，致死范围较窄、药物毒性反应较灵敏，但并不能得出10%～100%以及测LD50较理想的70%致死剂量，为此，再次进行了人凝血酶原复合物最大耐受剂量实验，得出小鼠对于人凝血酶原复合物的最大耐受量为40IU/mL。

3 结论

按照试验设计，观察了20只小鼠的饮水、摄食、体重变化情况、行为活动以及死亡等指标进，没有发现任何异常。根据人凝血酶原复合物最大耐受剂量实验得出，小鼠的最大耐受量推算为800IU/kg，临床剂量安全无毒。

[1]焦丽华,赵辉,余伟,等.人凝血酶原复合物致血栓形成机制及其评价方法[J].中国输血杂志,2009,22(8):701-703.

[2]曹海军,杜晞,叶生亮,等.凝血酶原复合物制备过程吸附条件的研究[J].中国输血杂志,2012,25(7):655-659.

[3]焦丽华,代旭兰,刘文芳.凝血酶原复合物的制备及其临床应用进展[J].中国输血杂志,2008,21(9):737-741.

[4]邱家山,徐琦,方为茂,等.人凝血酶原复合物分离纯化工艺的研究进展[J].生物技术通报,2006(2):17-20.

[5]刘欣晏,王凤山,仲立军,等.采用两步凝胶吸附法制备人凝血酶原复合物的工艺研究[J].中国生化药物杂志,2008,29(1):26-29.

[6]周志忠,曹艳花,林妙,等.冷沉淀与凝血酶原复合物联合在大出血中的应用[J].海南医学院学报,2009,15(9):1073-1074.

[7]王兆钺.凝血酶原复合物的临床应用[J].血栓与止血学,2008,14(5):238-240.

[8]赵铠,章以浩,李河民.医学生物制品学[M].2版.北京:人民卫生出版社,2007.

Study of Acute Virulence Experimenton White Mouse of Human Prothrombin Complex Concentrate

Guo Xin-yi1,Zhang Bao-xian1,Cao Chang-lei2*,Yang Liu1,Wang Meng1,Teng Shi-chao1
(1.Hualan Biological Engineering Company Limited of Chongqing,Chongqing Fuling 408100;2.Yangtze Normal University,Chongqing Fuling 408100)

s:Acute virulence of human prothrombin complex concentrate in white mouse had been studied with absolute random sample from dosage groping experiment and beforehand experiment to maximum patience experiment during June to July in 2013.The result showed that the maximal consistence of human prothrombin complex concentrate was 16IU/mL,with the maximal volume 0.5mL/20g.After tail mainline twice one day,all white mouses had no abnormity on feeding、drinking、relieving the bowels、activity、weight、death et al.The maximum patience dosage of human prothrombin complex concentrate in white mouse was 800IU/kg,which displayed innocuity on clinic dosage.

Human prothrombin complex concentrate;Maximum patience dosage;Virulence

R973 文献标志码：A

2096-0387（2017）06-0072-03

教育部“春晖计划”合作科研项目（Z2015129）；重庆市教委科研项目（KJ1712308）。

郭心怡（1981—），女，山东巨野人，本科，工程师，研究方向：药物学、血液制品。

曹长雷（1981—），男，山东邹城人，硕士，副教授，研究方向：动物生态学。