全自动血凝仪CA-7000性能及生物参考区间的验证与评价

李家明 赖语扬 徐成坤 杨淑君 刘文俊

全自动血凝仪CA-7000性能及生物参考区间的验证与评价

李家明 赖语扬 徐成坤 杨淑君 刘文俊

目的 了解攀钢集团总医院检验科实验室新购SYSMEX全自动血凝仪CA-7000的性能指标是否符合相关要求以及上海太阳试剂厂商提供的参考区间能否直接应用于临床。方法 ① 批内不精密度：取新鲜混合血浆〔凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）为3个浓度水平，凝血酶时间（TT）、D-二聚体、纤维蛋白原降解产物（FDP）为正常浓度水平〕连续测定各20次，计算标准偏差（SD）、变异系数（CV）。② 日间不精密度：采用两个水平的质控品，每天测定1次，连续20 d，计算SD、CV。③ 携带污染率：测定稀释的血浆3次后，测定原浓度血浆3次，再测定稀释的血浆3次，计算携带污染率。④ 线性范围：测定5个浓度的样本，与理论值作比较，计算y＝ax+b。⑤ 准确性：重复测定蒸馏水复溶后的FIB定值血浆、D-二聚体、FDP质控品（低值、高值）10次，计算均值和FIB的相对偏差。⑥ 正确度评价：选用国家卫生和计划生育委员会凝血5个批次室间质控品为正确度评价物，计算偏倚率。⑦ 生物参考区间的验证：选择20个健康体检人群进行生物参考区间转移的验证，计算R值。结果 ① 批内不精密度：不同水平PT、APTT、FIB的CV分别为0.46%～1.06%、0.47%～2.66%、1.99%～3.92%，正常水平TT、D-二聚体、FDP的CV分别为0.71%、4.24%、7.05%。② 日间不精密度：正常水平PT、APTT、FIB、TT的CV分别为2.62%、2.1%、8.9%、2.0%，异常水平PT、APTT的CV分别为2.85%、3.1%。③ 携带污染率：FIB为0.42%，D-二聚体为3.58%，FDP为1.96%。④ 检测线性范围：FIB为0.8～5.7 g/L，D-二聚体为0.50～30.00 mg/L，FDP为12.50～110.00 mg/L。⑤ 准确性：FIB相对偏差为7.15%，CV＜15%，D-二聚体/FDP均在质控范围内。⑥ 生物参考区间的验证：总样本R值为0.96。⑦ 正确度评价结果：除一个批号的APTT偏倚处在上限外（15.28%），其余各指标均合格。结论 本实验室新购的全自动血凝仪SYSMEX CA-7000各项性能指标基本符合要求，太阳试剂厂商提供的参考区间可以使用。

血凝仪； 太阳试剂； 性能验证与评价； 生物参考区间

凝血项目是临床用于出凝血异常疾病筛选与诊断的重要实验室检测指标［1-2］，凝血酶原时间（PT）常用于外源性和共同途径的筛选以及抗凝药物（口服抗凝剂）疗效监测；活化部分凝血活酶时间（APTT）是内源性凝血系统的筛选以及抗凝药物（普通肝素）疗效监测的重要指标；纤维蛋白原（FIB）和凝血酶时间（TT）是出血性与血栓性疾病常用的筛查指标，也用于抗凝药物和止血剂的疗效监测［3-5］。本实验室采用上海太阳生物技术有限公司试剂，参照相关规定和要求［6］，对全自动血凝仪CA-7000仪器的分析性能及试剂厂商提供的生物参考区间进行验证，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 仪器采用日本SYSMEX公司生产的CA-7000全自动血凝仪，试剂采用上海太阳生物技术有限公司的血凝试剂（简称太阳试剂）（PT试剂批号2001307，参考范围为10～14 s；APPT试剂批号Y2012196，参考范围为22～38 s；FIB试剂批号2031095，参考范围为2～4 g/L；TT试剂批号2021162，参考范围为10～16 s）。正常凝血质控品批号182025，异常凝血质控品批号183020；D-二聚体质控品低值批号2081010，高值批号2083010；纤维蛋白原降解产物（FDP）质控品低值批号2086009，高值批号2088009。用太阳试剂的校准品定标，以及配套的清洗剂。

1.2 方法及判断标准

1.2.1 批内不精密度 取患者的新鲜血浆配制成不同浓度水平的混合血浆（其中PT、APTT分为正常值、中度异常值和高度异常值3种水平；FIB分为正常值、低值和高值3种水平；TT、D-二聚体、FDP为正常浓度水平），连续测定混合血浆20次，计算标准偏差（SD）和变异系数（CV）。评判标准按照WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》：PT正常值CV≤3.0%，中度和高度异常值CV≤8.0%；APTT正常值CV≤4.0%，中度和高度异常值CV≤8.0%；FIB正常值CV≤6.0%，低值和高值CV≤12.0%；TT、D-二聚体、FDP的CV均≤6.0%

1.2.2 日间不精密度 采用两个浓度水平的非定值质控品，参考美国临床和实验室标准协会（CLSI）EP-15A《精密度和正确度性能的用户验证指南》文件，用CA-7000全自动血凝仪每天测定1次，连续测定20 d，计算SD和CV值。

1.2.3 携带污染率 选取对倍稀释的FIB、D-二聚体、FDP血浆分别连续测定3次（j1、j2、j3），然后连续测定原浓度血浆3次（i1、i2、i3），再连续测定对倍稀释的血浆3次（j4、j5、j6），最后计算携带污染率。评判标准要求FIB、D-二聚体、FDP的携带污染率均≤10%。

1.2.4 线性范围评价 分别选取线性范围上下限高值和低值的标本，制备成5个浓度梯度，每个样本测定2次，用实测值均值与理论值计算y＝ax+b，并作相关回归分析。要求FIB、D-二聚体、FDP的相对偏差均应＜10%，r＞0.975，α＝1±0.05范围内为合格，观察高值、低值浓度之间的线性关系。

1.2.5 准确性评价 测定蒸馏水复溶后的定值FIB、D-二聚体和FDP质控品（低值、高值）各10次，FIB计算均值和相对偏差，D-二聚体与FDP计算测定均值。

1.2.6 生物参考区间的验证 参考CLSI C28-A2《临床实验参考值范围的定义与确认》［7］，从体检中心选取20例健康体检者，其中男性9例，女性11例；年龄 18～76岁，平均（47±29）岁。观察 PT、APTT、FIB及TT的检测结果，与太阳试剂厂商提供的参考区间作比较，并计算R值（R值＝落在参考范围内的标本数/总试验标本数），要求R＞0.95。

1.2.7 正确度评价 参考《临床检验方法评价》［8］，选用国家卫生和计划生育委员会凝血室间质评物（5个批号），用CA-7000连续测定2次，得到平均值，再与卫生部临检中心回报靶值比较，计算偏倚〔偏倚＝（测定值－靶值）/靶值×100%〕。允许偏倚PT、APTT＜15%，FIB、TT、INR＜20%。

2 结果

2.1 批内不精密度评价 PT、APTT、FIB 3个浓度水平的批内不精密度符合卫生行业标准WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》的要求，正常浓度水平项目TT、D-二聚体、FDP的CV均小于10%，符合要求。见表1，表2。

表1 PT、APTT、FIB不同浓度水平的批内不精密度

表2 单水平项目TT、D-二聚体、FDP的批内不精密度

2.2 日间不精密度评价 PT、APTT两种水平质控品及TT日间不精密度较好，但FIB的CV略大。见表3。

（四）普法的生动性与执法过程的结合不够紧密，实效性不强。部分单位在落实“谁执法谁普法”责任制的过程中，仍存在着应付思想，缺乏创新意识，个别部门的普法还停留在“送法上门、定点接访、发放资料”老三样，普法工作缺乏生动性。普法工作仍然停留在单一性、灌输式的单向传播，缺乏与普法对象的有效沟通，与执法过程不能有效衔接，普法需求和供给存在脱节，没有针对群众的法律需求实施精准普法，普法实效差。大部分单位尚未将责任制的落实与自身的行业特点、部门文化紧密结合，推进“谁执法谁普法”工作的进一步提升。

2.3 携带污染率评价 FIB、D-二聚体、FDP 3项指标均符合要求。见表4。

表3 不同水平质控品日间不精密度

表4 FIB、D-二聚体、FDP的携带污染率

2.4 线性评价 FIB、D-二聚体和FDP的线性均能满足临床和实验室需要。见表5，图1～3。

表5 FIB、D-二聚体、FDP的线性评价

图1 FIB的线性评价

图2 D-二聚体的线性评价

图3 FDP的线性评价

2.5 准确性评价：FIB相对偏差为7.15%，CV＜15%，符合要求；D-二聚体、FDP低值和高值均在质控范围内。见表6。

表6 FIB、D-二聚体、FDP准确性评价结果

2.6 生物参考区间的验证实验 20例健康体检人群PT、APTT、FIB、TT检测结果显示，总样本R值为0.96，符合相关要求。见表7。

表7 健康体检人群PT、APTT、FIB、TT检测结果

2.7 正确度评价 我室5个批号的PT均＜15%，FIB、TT、INR均＜20%，但有一批号APTT偏倚结果超过15%。见表8。

表8 2017卫生部凝血室间质评物5个批号的正确度评价

3 讨论

PT正常、中度异常和高度异常值的批内CV分别为0.63%、0.46%、1.06%；APTT正常、中度异常和高度异常值的CV批内分别为0.47%、0.57%、2.66%；FIB正常、低和高值的CV批内分别为1.99%、3.92%、3.61%；单水平项目TT、D-二聚体、FDP的CV批内分别为0.71%、4.24%、7.05%，均符合相关标准要求。PT、APTT两种水平质控品及TT日间不精密度较好，但FIB的变异略大。在携带污染率方面，FIB、D-二聚体、FDP中最大的为3.58%，均小于判定标准。我们参考平均斜率法，对CA-7000全自动血凝仪测定FIB、D-二聚体、FDP的线性范围进行了评价，分析发现三者的相对偏差均＜10%，r＞0.975，α＝1±0.05，均符合要求；线性范围分别为 0.8～5.7 g/L、0.5～30.00 mg/L、2.50～110.00 mg/L，范围宽，能够满足实验室和临床需要。准确性评价：FIB相对偏差CV＜15%，符合要求；D-二聚体/FDP低值和高值均在质控范围内。正确度评价结果显示，允许偏倚PT、APTT＜15%，FIB、TT、INR＜20%；除APTT一个批号的偏倚为15.28%外，其余各指标均符合要求。由于国家卫生和计划生育委员会凝血室间质评物的靶值是按太阳试剂+各种仪器进行分组统计确定，不同的仪器分析结果差异较大，笔者认为最好是相同的试剂和相同的仪器（即相同的检测系统）进行分组统计，结果才具有更好的可比性。

在实验室检验人员和临床医生日常工作中，生物参考区间作为疾病诊断、解释检验结果临床意义的重要指标，其建立并不统一。据有关权威机构调查显示［9］，约20%的实验室自行确定凝血4项指标的参考区间上下限，约80%的实验室直接使用全国操作规程、试剂或仪器厂商等提供的参考区间。如果按照国际化学委员会提出的实验室生物参考区间的建立方法要求［10］，其程序复杂，且受年龄、性别、民族、地区等因素以及方法学差异的影响，同一项目采用不同检测系统和检测方法的结果也有差异；即便仪器和检测方法相同，但试剂来源不同，检测结果也会产生系统误差［11］，而实验室自行制定生物参考区间有一定难度。基于以上种种原因，各实验室简单地引用文献或不加验证的直接使用厂商给定的参考范围是有缺陷的［12-13］，最好依据实验室的实际情况建立适合自己的参考区间。依据CLSI C28-A2文件推荐临床实验室生物参考区间确立的要求，如果引用权威书刊、厂家试剂说明书或转移其他医院实验室的生物参考区间应当通过验证。

本实验室用太阳试剂在SYSMEX CA-7000全自动血凝分析仪上对20例健康体检人群进行PT、APTT、TT、FIB 检测，计算 R 值，要求 R＞0.95［14］，按照CLSI CA28-A2文件要求，90%健康者测定结果在引用的参考范围内，就可实现生物参考区间的转移。本实验室检测20例健康体检人群PT、APTT、FIB、TT的结果，总样本R值为0.96，符合R＞0.95的标准，通过实验验证，表明可以直接引用上海太阳试剂说明书提供的PT、APTT、FIB及TT的参考区间。

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Verifying and evaluating automated blood coagulation analyzer CA-7000: its performance and biological reference interval

Li Jiaming, Lai Yuyang, Xu Chengkun, Yang Shujun, Liu Wenjun. Department of Clinical Laboratory, Pangang Group General Hospital, Panzhihua 617000, Sichuan, China (Li JM, Xu CK, Yang SJ, Liu WJ); Department of Laboratory, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan, China (Lai YY)
Corresponding author: Li Jiaming, Email: 706714508@qq.com

Objective To verify whether the performance indexes of the newly purchased SYSMEX automatic coagulation analyzer CA-7000 conform to the relevant standards and whether the reference interval provided by SUNBIO Shanghai can be directly applied to the clinic. Methods ① Within-run imprecision: freshly mixed plasma [prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (APTT), fibrinoge (FIB)，three different concentration respectively; thrombin time (TT), D-Dimer, fibrin degradation product (FDP), normal concentration],measured 20 times in a row, then computed the standard deviation (SD), the coefficient of variation (CV). ② Daytime imprecision: by using the quality control materials with two different concentration, measured once per day for 20 days,then calculate SD and CV. ③ Carryover rates: after the diluted plasma samples were measured by three times, the plasma samples in original concentration were measured three times again, then the first step was repeated, and then calculated carryover rate. ④ Linear range: measured the samples with five different concentrations and compared the measured value with theoretical values, then calculated y＝ax+b. ⑤ Accuracy: dissolved by double distilled water, the standard plasma samples with fixed FIB value, D-Dimer and FDP quality control materials (low value and high value) were repeatedly measured 10 times, then calculate mean and relative deviation of the FIB.⑥ Accuracy rating: choose 5 different batches of quality control material came from 5 different blood coagulation laboratories, which was accredited by NHFPC, as the correct assessment products to calculate bias.⑦ Validation of biological reference interval: 20 healthy volunteers were enrolled for validating the biological reference interval transfer, calculated R-values. Results ① In-batch imprecision: in different level of PT, APTT and FIB, the CV were 0.46%-1.06%, 47%-2.66%, and 1.99%-3.92%, respectively; in normal level of TT, D-Dimer and FDP, the CV were 0.71%, 4.24%, and 7.05%, respectively. ② Daytime imprecision: CV of normal level PT,APTT，FIB, and TT were 2.62%, 2.1%，8.9%, and 2.0%, respectively; CV of abnormal level PT and APTT were 2.85% and 3.1%. ③ Carryover rates: FIB was 0.42%, D-Dimer was 3.58%, FDP was 1.96%. ④ Detection of linear range: FIB was 0.8-5.7 g/L, D-Dimer was 0.5-30.00 mg/L, FDP was 2.50-110.00 mg/L.⑤ Accuracy: the relative deviation of FIB was 7.15%, CV ＜ 15%, the ratio of D-Dimer/FDP was in the context of quality control.⑥ Validation of biological reference interval: the total sample R value was 0.96. ⑦ Accuracy evaluation results: all the indexes were qualified except that a bias from a batch of APTT which exceeded the upper limit.Conclusion The performance indicators of our new full-automatic blood coagulation analyzer, SYSMEX CA-7000, conform to the relevant standards; and the reference range provided by SUNBIO can be used directly.

Coagulation analyzer; Reagent; Performance verification; Biological reference region

617000 四川攀枝花，攀钢集团总医院检验科（李家明、徐成坤、杨淑君、刘文俊）；646000 四川泸州，西南医科大学检验系（赖语扬）

李家明，Email：706714508@qq.com

10.3969/j.issn.1674-7151.2017.04.008

2017-09-18）

张耘菲 杨程伍）

2018第十五届中国检验医学暨输血仪器试剂博览会

中国（国际）检验医学暨输血仪器试剂博览会（CACLP春季会）始创于1991年，它的前身是全国医学检验用品产供销联谊会，经过26年来的不断发展和壮大，CACLP春季会已成为国内规模最大、参展企业最多、展会内容最丰富、专业性最强、影响力最广、参会人数最多的专业性商业展览会。该展会每年3月举办一届，在厦门、西安、青岛、重庆等城市巡回展出，已成为全世界规模最大的体外诊断商业展。

1 会议名称：2018年第十五届中国检验医学暨输血仪器试剂博览会

2 会议地点：重庆国际博览中心

3 会议时间：2018年3月18日至20日