中药制剂归芪饮口服液稳定性的研究

王玉霞 刘文利 李 丽 王玉坤 王尚明 （山东迅达康兽药有限公司 山东 济南 250300）

邓学兵 （南京日升昌生物技术有限公司 江苏 南京）

韩征军 （山东省莱州市柞村畜牧兽医站）

经验交流

1.1 材料

中药制剂归芪饮口服液稳定性的研究

王玉霞 刘文利 李 丽 王玉坤 王尚明 （山东迅达康兽药有限公司 山东 济南 250300）

邓学兵 （南京日升昌生物技术有限公司 江苏 南京）

韩征军 （山东省莱州市柞村畜牧兽医站）

按照《兽用中药、天然药物稳定性试验技术指导原则》考察中药制剂有效成分在不同温度、湿度等因素的影响下随时间的变化规律。经过高温试验和长期试验研究发现，归芪饮口服液的各项指标均符合有关规定，产品有效期可以定为2年。

归芪饮 稳定性 高温试验 长期试验

药品稳定性是指药品在特定条件和时间内保持稳定的能力。药品的稳定性常用来预测药品的有效期。本公司研制了一种能够增强动物免疫力的中药制剂归芪饮口服液。为了确定产品的有效期，对主要成分考察在不同温度、湿度等条件影响下随时间变化的规律，并通过运算确立产品的有效期，为产品的包装运输、储存提供依据。

1 材料与方法

1.1.1 供试药物 归芪饮口服液中试生产样品3批，生产批号：2015062601、2015062701、2015062801。

1.1.2 主要试剂 葡萄糖标准溶液、5%苯酚溶液、黄芪甲苷标准品(中国药品生物制品检定所)、色谱级乙睛(M erck公司)、色谱级甲醇(T id ea公司)、双蒸水、其他试剂均为分析纯。

1.1.3 主要仪器 高效液相色谱仪LC-20A T(日本岛津)、0haus Discovery电子天平(DHAUS)、HH-4数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)、PH S-25型pH计(上海精密科学仪器有限公司)、G N P-9050型隔水式恒温培养箱(上海精宏实验设备有限公司)、YXQ.SG 41.280手提式不锈钢蒸汽消毒器(上海华线医用核子仪器厂)、M JP-250型霉菌培养箱(上海精宏实验设备有限公司)、Y于875洁净工作台(吴江市佳运通空调净化设备有限公司)、LH 5-150sc(H)恒温恒湿培养箱(常州诺基仪器有限公司)、754N型紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)、SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)。

1.2 方法

1.2.1 标准曲线的制定以及含量的侧定 黄芪甲苷标准曲线的制作以及含量的测定方法，多糖标准曲线的制作以及含量的测定方法参照邓学兵(2013)[1]的方法。

1.2.2 高温试验 经典恒温法：取一批样品(批号2015062601)在不同温度下恒温0-96h，然后测定样品中黄芪甲苷和多糖的含量，根据阿伦尼乌斯定律计算、预测药剂有效期，了解高温对其稳定性的影响。

1.2.3 长期试验 取归芪饮口服液中试样品3批，市售包装。试验在温度在25±2℃，相对湿度为60%士10%条件下进行，放置12个月。每3个月取样1次，分别于第0、3、6、9、12月取样，按稳定性重点考察项目进行检测。并就重点项目继续考察18、24、36个月。

2 结果

2.1 高温试验计算原理及试验结果

表1a 不同温度条件下黄芪甲苷的含量(批号2015062601)

计算原理：在大多数情况下药物的分解属一级速率方程C=Coe-kt产。进一步整理得到log C=log Co-tx K/2.303，以时间t为自变量，以Log C为因变量计算可得斜率b，然后计算速率K=-2.303xb}。然后根据阿伦尼乌斯定律logK=logA-Ea/(2.303RT)(K=Ae-Ea/RT)以1/T(T的倒数)为自变量，以logK为因变量做线性回归分析，求出298K下的速率常数K。时间h(h)=0.1054/K298k。按照以上原理，将测定好的数据参考苏银法(2004)[2]的处理方法制作下列表格。通过高温试验的数据分析(见表la、lb、2a、2b)可知黄芪甲苷的有效期时间为1.87年，多糖的有效期为1.95年。

表1b 不同温度条件下黄芪甲苷有效时间的计算

表2a 不同温度条件下多糖的含量(2015062601)

表2b 多糖有效时间的计算(2015062601)

2.2 长期试验数据及统计分析结论

试验结果表明：归芪饮口服液3批中试样品在25±2℃，相对湿度为60%±10%条件下放置12个月。其性状、鉴别、含量、相对密度、pH值、微生物限度均在质量标准范围内。结果见表3、4、5，并按照表格里面的数值计算产品的有效期的制定是否合理，以及质量标准中含量底限的设置是否合理。

2.2.1 长期试验结果分析 批次2015062601。（1）计算原理：在确定有效期的统计分析过程中，一般选择可以定量的指标进行处理，通常根据药物含量变化计算，按照长期试验测定数值，以实测标示量%对时间进行直线回归，获得回归方程，求出各时间点计算标示量%，然后计算标示量(y')P=0.95单侧可信限的置信区间为y'±z，将各点连接可得分布于回归直线两侧的曲线，取质量标准中规定的含量底限(一般为90%)，在纵坐标90%处做水平线与置信区间下限线“y'-z”相交的横坐标的时间就是所得值，即为药品的期限。式中，偏tπ-2-概率0.05，自由度N-2的t单侧分布值，N为数组；X。-给定自变量；X-自变量X的平均值；其中式中Lyy-y的离差平方和；Lxy-xy的离差乘积之和；b-直线斜率；（2）对表3中的数据进行分析，黄芪甲苷的分析结果见表3a，多糖的分析结果见3b；以时间为自变量，黄芪甲苷实测标示量%为因变量进行回归，得回归方程y=100.8-0.3033x，R=0.9014；按95%可信限进行统计分析，得结果表3a；（3）以时间为自变量，多糖实测标示量%为因变量进行回归，得回归方程y=99.796一0.3657x，r=0.9261；按95%可信限进行统计分析，得3b；（4）经过分析批次2015062601中黄芪甲苷含量维持在初始值的90%(57.5µg/ml)以上的有效期是24.1个月，含量不低于55.0µg/ml(86%)的有效期为31.8个月。批次2015062601中多糖含量维持在初始值的90 %(66.6µg/ml)以上的有效期是24.5个月，多糖含量不低于65.0µg/ml(87%)的有效期是31.6个月。

表3 长期试验不同取样时间考察结果(批号201506260l)

表3a 长期试验稳定性数据分析-黄芪甲苷(2015062601) (%)

表3b 长期试验稳定性数据分析-多糖(2015062601) (%)

2.2.2 长期试验结果分析-2009062701 对表4中黄芪甲苷、多糖的数据进行分析，结果见4a、4b。（1）以时间为自变量，黄芪甲苷实测标示量%为因变量进行回归，得回归方程y=101.01-0.2997x, r=0.8571；按95%可信限进行统计分析，得表4a。（2）以时间为自变量，多糖实测标示量%为因变量进行回归，得回归方程y=100.18-0.4017x,r=0.9951；按95%可信限进行统计分析，得表4b。（3）经过分析批次2015062701中黄芪甲苷含量维持在初始值的90%(55.4µg/ml)以上的有效期是23.4个月，黄芪甲苷含量不低于55.0µg/ml(89.4%)的有效期为24.5个月。批次2015062701中多糖含量维持在初始值的90%(67.9mg/ml)以上的有效期是23.2个月。多糖含量不低于65.0mg/ml(86%)的有效期是31.9个月。

表5 长期试验不同取样时间考察结果(批号2015062801)

表4 长期试验不同取样时间考察结果(批号200906270l)

表4a 长期试验稳定性数据分析-黄芪甲苷(2015062701) (%)

表5a 长期试验稳定性数据分析-黄芪甲苷(2015062801) (%)

表4b 长期试验稳定性数据分析-多糖(2015062701) (%)

表5b 长期试验稳定性数据分析-多糖(2015062801) (%)

3 讨论

（1）从高温试验的结果可以看出，两种主要成分的有效期大于1.87年。（2）本产品制定了质量标准，设定了两种成分的底限值，通过长期试验可以看出，两种主要成分的含量维持在90%以上时，时间都超过了24个月，并且含量的90%都大于我们设定的底限。（3）在考察期间，pH值、相对密度、外观性状、薄层鉴别、微生物限度等均符合《归芪饮质量标准(草案)》中规定的质量要求和2015年版《中华人民共和国兽药典》二部附录有关合剂的规定。结合高温试验，确定产品的有效期为24个月。（4）通过试验的方法以及数据统计可以较好的确定产品的有效期，不仅节约了时间，试验结果还准确。

2.2.3 长期试验结果分析一2009062801 对表5中黄芪甲苷、多糖的数据进行分析，结果见5a, 5b。（1）以时间为自变量，黄芪甲苷实测标示量%为因变量进行回归，得回归方程y=100.12-0.3623x, r=0.9902；按95%可信限进行统计分析，得表5a。（2）以时间为自变量，多糖实测标示量%为因变量进行回归，得回归方程y=99.836-0.3273x,r=0.9904；按95%可信限进行统计分析，得表5b。（3）经过分析批次2015062801中黄芪甲苷含量维持在初始值90%(57.8µg/ml)以上的有效期是24.6个月，不低于55.0µg/ml(85.5%)的有效期为34.7个月。批次2015062801中多糖含量维持在90%(68.65mg/ml)以上时的有效期是26.3个月，多糖含量不低于65.0mg/ml(85.2%)时的有效期是38.0个月。

[1] 邓学兵, 马光友, 刘俐君等. 中药制剂归芪饮口服液提取工艺优化试验[J]. 中国动物保健, 2013,15(5)： 16-19.

[2] 苏银法. 经典恒温法药物稳定性试验数据的电子表格处理程序[J].医药导报, 2004, 23(3)： 198-199.

[3] 赵康虎, 刘元瑞. 利用电子表格Exce12000预测药物有效期[J]. 中国现代应用药学杂志, 2001, 18(6)： 478-479.

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2017-08-17）