高效液相色谱法测定蒙药制剂色布如-9中胡椒碱的含量

张海涛 吕 颖

(赤峰市药品检验所，内蒙古 赤峰 024050)

高效液相色谱法测定蒙药制剂色布如-9中胡椒碱的含量

张海涛 吕 颖

(赤峰市药品检验所，内蒙古 赤峰 024050)

目的：建立高效液相色谱法测定蒙药制剂色布如-9中胡椒碱的含量。方法采用DiamonsiL C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm)色谱柱；以甲醇-水(77：23)为流动相；流速1.0 mL·min-1；检测波长343 nm；柱温为30 ℃。结果胡椒碱在4～40 μg·mL-1(r = 0.999 9)范围内线性关系良好，平均回收率为100.74%(n = 9)，RSD为 0.18%。结论本方法简便准确、稳定可靠，可用于蒙药制剂色布如-9的含量测定。

蒙药制剂；高效液相色谱法；色布如-9；胡椒碱；含量测定

蒙药制剂色布如-9丸剂，主要由石榴、干姜、荜茇、白胡椒等9味药组成，具有助消化止泄的功效，蒙医主要用于治疗胃巴达干病，寒性泻等。其中荜茇、白胡椒为臣药，主要含有胡椒碱(piperine)、丁香烯(caryophylene)、胡椒酰胺(pipercide)等化学成分[1]。胡椒碱作为其主要活性成分之一，其化学结构属于桂皮酰胺类，不仅具有抗溃疡[2]、抗氧化[3]、免疫调节及抗肿瘤[4]的作用，而且在众多研究中，作为生物利用度增强剂[5]的应用越来越引起人们的重视。本研究采用高效液相色谱法测定色布如-9中胡椒碱的含量，对有效控制和评价产品质量，具有重要的实际应用价值。

1 仪器与试药

美国沃特世(Waters)高效液相色谱仪(Waters 2695泵，Waters 2487紫外检测器，Empower色谱工作站)，岛津UV-2600型紫外-可见分光光度计，瑞士Precisa型十万分之一电子天平, 昆山舒美KQ-500DE型数控超声波清洗机。

胡椒碱对照品(批号：0775-200203，供含量测定用)，由中国食品药品检定研究院提供；甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂为分析纯；色布如-9丸剂(15 g/瓶，1次1～3g，1日1～2次)，赤峰市翁牛特旗中蒙医院自制制剂。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱对照品约10 mg，置50 mL棕色量瓶中，加无水乙醇溶解、定容、摇匀，制成约200 μg·mL-1的胡椒碱对照品储备液。精密吸取胡椒碱对照品储备液2.5 mL，置50 mL棕色量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备： 取色布如-9样品约0.2 g，精密称定，置50 mL棕色量瓶中，加入无水乙醇40 mL，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放置至室温后，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.1.3 阴性样品溶液的制备：按处方比例制备不含荜茇、白胡椒的阴性样品，按2.1.2项下方法制备操作，即得。

2.2 色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：DiamonsiL C18(250 mm × 4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(77:23)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：343 nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。理论板数按胡椒碱峰计算不低于5000。分别精密吸取胡椒碱对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10 μL，在上述色谱条件下进样测定，色谱图见图1。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察：精密吸取胡椒碱对照品储备液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置25 mL棕色量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录胡椒碱色谱峰面积。以胡椒碱峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)，进行线性回归，得线性方程为Y = 7.376 × 104X - 2.336 × 103， r = 0.999 9(n = 9)。结果表明胡椒碱进样浓度在4～40 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.3.2 精密度试验：精密吸取2.1.1项下对照品溶液10 μL，按2.2项下色谱条件，连续进样6次，测定峰面积，计算胡椒碱峰面积的RSD(n = 6)为0.40%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验：精密吸取2.1.2项下同一供试品溶液10 μL ，分别于0，2，4，8，12，18，24 h进样测定，测得胡椒碱峰面积的RSD(n = 7)为0.78 %。结果表明，供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.3.4 重复性试验：称取同一样品6份，每份约0.2g，精密称定，分别按2.1.2项下方法制备供试品溶液，进样测定。结果胡椒碱含量的RSD为0.82 %，表明重复性良好。

2.3.5 加样回收率试验：精密称取已知含量的同一样品9份，每份约0.1 g，精密称定，分别置50 mL棕色量瓶中，分别加入胡椒碱对照品储备液0.5 ，1.0 ，1.5 mL，各3份，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，分别进样10 μL，结果见表1。

表1 胡椒碱加样回收试验

2.4 样品测定： 按上述建立好的方法对色布如-9进行含量测定。结果见表2。代表性样品色谱图见图1(B)。

表2 色布如-9样品测定结果(X=X ±S, n=3)

3 讨论

本实验通过对流动相、检测波长、样品超声提取时间等条件的筛选，建立了色布如-9中胡椒碱含量的测定方法，比较了流动相甲醇-水[6]不同比例(60:40；70:30；75:25；77:23；80:20；90:10)等度洗脱时色谱峰的分离效果，结果甲醇-水的比例为77:23 时，所得色谱图基线平直，各组分之间可以得到较好分离，峰形良好，保留时间适宜；对胡椒碱对照品溶液在200～700 nm波长范围内扫描，胡椒碱在343 nm波长处有最大吸收，故选择343 nm为检测波长；分别考察了样品超声处理20 min、30 min和40 min的提取量，结果表明超声处理20 min时提取不完全，30 min与40min的提取量无明显变化，故选择30 min作为超声处理时间。

根据胡椒碱的光稳定性研究，避光条件下更有利于胡椒碱的稳定和保存[7]，故在实验操作中使用棕色量瓶，以避免其由于分解而影响结果准确性。

本实验建立的HPLC测定蒙药制剂色布如-9中胡椒碱含量的方法操作简单，灵敏度高，重现性好，结果准确，适用于色布如-9蒙药制剂的质量控制。

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草 [M]. 蒙药卷. 上海：上海科学技术出版社，2004：274-275.

[2] Morikawa T, Matsuda H，Yamaguchi I，et al.New amides and gastroprotective constituents from the fruit of Piper chaba [J].Planta Med，2004，70：152-159.

[3] Price S E，Harris S A D，Deborah J，et al. Piperine，an active ingredient of black pepper attenuates acetaminopheninduced hepatotoxicity in mice [J]. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine，2010，3(12)：971-976.

[4] Sunila E S，Kuttan.G. Immunomodulatory and antitumor activity of Piper longum Linn and piperine [J]. Journal of Ethnopharmacology，2004，90 ( 2- 3) ：339-346.

[5] Kasibhatta R，Naidu M U R. Influence of piperine on the pharmacokinetics of nevirapine under fasting conditions：A randomised，crossover，placebo-controlled study [J]. Drugs R&D，2007，8(6)：383-391.

[6] 国家药典委员会.中国药典 [S]. 一部.北京：中国医药科技出版社，2010：219.

[7] 郭墨亭，夏学进，黄雪松.胡椒碱的光异构化研究 [J]. 食品与发酵工业，2013，39(3)：52-55.

HPLCDeterminationofPiperineinMongolianMedicinePreparationSeBuRu-9

ZHANG Hai-tao,LV Ying

Chifeng Institute for Drug Control， Chifeng 024050，Inner Mongolia，China

Objective：To establish? a method for the determination of piperine in mongolian medicine preparation Se Bu Ru-9. Methods：A DiamonsiL-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) column was used with the mobile phase being chromatographic methanol-water(77:23), flow rate being 1.0 mL·min-1 ,detecting wavelength being 343 nm, the column temperature being 30℃. Results：The linear response range from 4-40 μg·mL-1(r = 0.999 9，n = 6)of piperine；the average recoveries(n = 9)of the method was 100.74% with RSD 0.18%. Conclusion：The method is simple，accurate，reproducible and stable，and can be used for the quality control of mongolian medicine preparation Se Bu Ru-9.

mongolian medicine preparation；HPLC；Se Bu Ru-9；piperine；determination

张海涛，男，1978年生人，硕士，副主任药师，赤峰市药品检验所业务室主任，主要从事药品、食品、保健品、化妆品、医疗器械及药包材等项目的检验、质量标准的制订及相关科研工作。E-mail：zhanghaitao.2001@163.com。

R291.2

B

1006-6810(2017)06-0043-03

2017年1月23日收稿