COX-2、PHH3与Her-2阳性型乳腺癌新辅助化疗疗效及预后的关系

樊新咏 温燕芳

(韶关市第三人民医院普外科，广东 韶关 512123)

COX-2、PHH3与Her-2阳性型乳腺癌新辅助化疗疗效及预后的关系

樊新咏 温燕芳

(韶关市第三人民医院普外科，广东 韶关 512123)

目的 研究COX-2及PHH3的表达状态与Her-2阳性型乳腺癌新辅助化疗疗效及预后的关系。方法 对48例Her-2阳性型乳腺癌患者资料进行回顾性分析，研究各例患者肿瘤组织COX-2、PHH3的表达状态，并找出其与疗效及预后的内在联系。结果 COX-2高表达组有8例达到CR，13例达到PR，低表达者有5例达到CR，9例达到PR，两组相比较，差异有统计学意义(P<0.05)，PHH3高表达组有7例达到CR，12例达到PR，低表达者有6例达到CR，10例达到PR，两组相比较，差异有统计学意义(P<0.05)。术后随访期间，COX-2及PHH3高表达组的无病生存率均低于低表达组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 COX-2及PHH3的表达状态能预测Her-2阳性型乳腺癌的新辅助化疗疗效及预后，高表达者疗效较低表达者好，但其预后较差。

乳腺癌；新辅助化疗；环氧化酶2；磷酸化组蛋白H3

新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NAC)及乳腺癌综合治疗的重要手段之一，能消除局部晚期患者机体的微转移灶，降低肿瘤的临床分期，使一些难以手术的病例转变为可手术切除，也为保乳手术创造了条件，同时可评估乳腺肿瘤细胞对化疗的敏感性。因些NAC应用于局部晚期乳腺癌已经被广泛接受。如能发现预测乳腺癌NAC疗效的标志物对乳腺癌患者的治疗将有重要的意义。有学者认为环氧化酶2(cyclooxygenase,COX-2)、磷酸化组蛋白H3(phospho-histone H3,PHH3)的表达与乳腺癌的发生发展、病理学特征、恶性程度及预后有一定的关系。本研究将就COX-2、PHH3的表达程度与乳腺癌NAC疗效及预后的关系进行探讨。

1 资料和方法

1.1临床资料

回顾性分析我院2009年1月至2016年6月收治的Her-2阳性型局部晚期乳腺癌患者48例，均为原发、单侧、初治、无远处转移，入院前均未接受过手术、放疗、化疗。平均年龄(50.80±6.20)岁，绝经前35例，绝经后13例，入院时肿瘤直径2 cm5 cm患者共16例，超声或触诊发现腋窝淋巴结肿大41例，病理检查结果均为浸润性导管癌，TNM分期Ⅱ期12例，Ⅲa期25例，Ⅲb期11例，全身无重要器官功能不全。

1.2治疗方法

48例患者入院后均在超声引导下行空芯针穿刺活检，标本送病理检查证实为乳腺癌，并行COX-2、PHH3检测，同时行ER、PR、Her-2、Ki-67的检测以利于确定肿瘤的分子分型。化疗方案均为EC序贯T，术前化疗用药为EC(表阿霉素90 mg/m2d1,环鳞酰胺600 mg/m2d1)，每21 d为一疗程，所有患者均完成2～4周期化疗，每隔2个疗程评估疗效，化疗结束后2～3周后转至乳腺外科行手术治疗，其中根治术12例，改良根治术36例。术后标本再次行ER、PR、Her-2、Ki-67、COX-2、PHH3检测。术后完成剩余化疗疗程，并结合具体病例给予规范的内分泌、放疗、靶向治疗等辅助治疗。

1.3免疫组化方法及结果判读

1.3.1实验方法

空芯穿刺活检及术后标本均以10%甲醛溶液固定并送检，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，脱蜡、脱水后再以常规免疫组化SP检测ER、PR、Her-2、Ki-67、COX-2。PHH3免疫组化试剂为兔抗人多克隆抗体即用型，免疫组化染色采用MaxVisin两步法。各步骤均严格按照试剂盒说明书进行。同时由2名本院病理科医生阅片，对表达状态作出判定。

1.3.2结果判定

根据染色细胞的比例和染色强度进行COX-2的半定量分析，以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞判定标准。阳性细胞数以计数10个高倍镜视野为准，<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；染色强度：无色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分，强度与阳性细胞百分数相，0～1分为阴性(-)，2分为(+)，3～4分为(++)，5分以上为(+++)。0～4分为COX-2低表达，5以上分为高表达。PHH3的表达以细胞核出现黄色颗粒沉淀为阳性细胞，阳性细胞数以计数10个高倍镜视野为准，<10%为低表达，≥10为高表达。HER-2蛋白定位于细胞膜和细胞质，阳性者显示为棕黄色颗粒。肿瘤细胞无着色为(-)；任何比例的肿瘤细胞呈弱而不完整的胞膜着色或<10%呈弱且完整着色为(+)；≥10%呈现弱或不一致的、完整的胞膜着色；或≤30%呈现强且完整的胞膜着色为(++)；≥30呈现强且完整的胞膜着色为(+++)。(-)或(+)作为阴性，(+++)认为阳性，(++)则行Fish检测进一步明确。

1.4疗效评定

NAC前及每隔两周期以彩超检查测量肿瘤大小，并评估其体积变化。临床效果按照Millier AB提出的国际实体瘤疗效评价标准进行评估[1]：①临床完全缓解(CR)：临床检查肿瘤完全消失；②临床部分缓解(PR)：肿瘤体积缩小≥50%；③疾病稳定(SD)：肿瘤体积缩小<50%或增大<25%；④疾病进展(PD)：肿瘤体积增大≥25%。总有效率为RR=CR+PR。手术切除标本与化疗前穿刺组织的病理相比较，按照Miller&Payne方法将其分为G1～G5五级[2]，G5：未见浸润性癌残留；G4：有零散分布的浸润性肿瘤细胞，肿瘤细胞减少90%以上；G3：肿瘤细胞显著减少，下降比例为30%至90%；G2：肿瘤细胞减少比例不足30% ；G1：肿瘤细胞未见减少。

1.5统计学处理

采用SPSS 17.0软件对数据包进行分析，计数资料比较采用χ2检验，当有1≤理论频数<5时，采用χ2检验校正公式，无病生存率比较采用Kaplan-Meier分析，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

根据免疫组化及Fish检测结果，最终LuminalB型20例，Her-2型28例，COX-2高表达25例，低表达23例，PHH3高表达21例，低表达27例。通过首次及末次彩超检查，并对肿瘤病灶进行对比，评估结果获得CR13例，PR22例，SD13例，无疾病进展病例。在病理检查方面，G5级5例，G4级19例，G3级11例，G2级13例，无G1病例。

2.1COX-2、PHH3与乳腺癌NAC疗效的关系

COX-2高表达者有8例达到CR，13例达到PR，4例为SD，有4例达到pCR，COX-2低表达者有9例达到CR，5例达到PR，9例为SD，有1例达到pCR。两组RR相比较，COX-2高表达者优于低表达者，其差异存在统计学意义(P<0.05)。

PHH3高表达者有7例达到CR，12例达到PR，2例为SD，有3例达到pCR，PHH3低表达者有6例达到CR，10例达到PR，11例为SD，有2例达到pCR。两组RR相比较，PHH3高表达者优于低表达者，其差异存在统计学意义(P<0.05)。

表1 COX-2/PHH3表达状态与NAC疗效关系

2.2COX-2、PHH3与乳腺癌预后的关系

所有患者均在最后一次术后辅助化疗后进行门诊随访，中位随访时间为40(10～88)个月，无失访病例。至随访结束，29例患者出现局部复发或远处转移，其中4例死亡，27例仍存活。另有2例因其它疾病而死亡。通过Kaplan-Meier分析患者无病生存率，COX-2高表达者的无病生存率低于低表达者，其差异有统计学意义(χ2=4.07，P=0.04)(见图1)，PHH3高表达者无病生存率低于低表达者，差异有统计学意义(χ2=7.89，P=0.00)(见图2)。

图1 COX-2表达状态与DFS的Kaplan-Meier分析

图2 PHH3表达状态与DFS的Kaplan-Meier分析

3 讨 论

恶性肿瘤的发生、进展涉及多种因素及基因的突变，其肿瘤细胞多数进行着无限制的分裂和增殖，检测肿瘤细胞的增殖状态对评估预后及指导治疗有重要的作用。随着生物学研究的深入，肿瘤的基因表达与化疗敏感性的关系也正在引起人们的关注。COX-2是催化花生四烯酸转化为前列腺素的重要限速酶，能够通过多种机制参与肿瘤的发生、发展和转移，在多种恶性肿瘤组织中高表达[2]。同时其在促进肿瘤新生血管生成、肿瘤浸润和转移方面也起着重要作用[3]。陈鹏等[4]认为COX-2的表达与乳腺癌TNM分期及淋巴结转移关系密切，TNM分期越晚，COX-2阳性率越高，淋巴结转移组患者COX-2阳性率明显高于无转移组。本研究认为COX-2的表达状态与Her-2型乳腺癌NAC疗效关系密切，COX-2高表达状态预示着肿瘤对化疗药物越敏感，但高表达者总体无病生存率较差。

PPH3是新近刚发现的5个核心蛋白之一，在真核细胞中与其它组蛋白共同构成染色质中的主要蛋白组分[5]，其表达常在核分裂期间达到最大值，是一种核分裂特异性标志物。有学者研究指出PHH3可用于预测星形细胞癌患者的生存期，也可协助子宫内膜癌的病理分级[6-7]。刘西林等[8]认为，PHH3在乳腺浸润性导管癌组织中的高表达率较正常乳腺组织显明显增高，与乳腺乳腺癌的发生、发展关系密切，其表达与乳腺癌组织学分级呈正相关，组织学分级越高PHH3阳性率越高。本研究认为PHH3的表达状态与Her-2型乳腺癌NAC疗效关系密切，PHH3高表达状态预示着肿瘤对化疗药物越敏感，其总有效率更高。随访发现PHH3高表达者无病生存率较低表达差。

寻找能够较准确预测乳腺癌NAC疗效的标志物对指导临床工作中的决策有重要的意义，可以增加患者的疗效，并提高患者的生存期和生存质量。虽然本研究认为PHH3、COX-2能够预测乳腺NAC疗效及预后，但受制于病例数及实验条件，故仍存在着一定的局限性，其更深入的相关机制也有待进一步研究了解。

[1] 李东松，丁玉芝，江庆斌,等.分子分型和TOPOⅡα对乳腺癌新辅助化疗疗效及预后的预测[J]. 实用临床医学杂志，2016，17(6)：31-34.

[2] 毕丽荣，杨明，王悦增,等.COX-2在乳腺癌组织的表达及其临床病理意义[J].中国实验诊断学杂志，2011，15(9):1569-1571.

[3] Buchanan FG,Holla V,Katkuri S,et al.Targeting cyclooxygenase-2 and the epidermal growth factor receptor for the prevention and treatment of intestinal cancer[J].Cancer Res,2007,67(19):9380-9385.

[4] 陈鹏，韩莹莹，邓军吉,等.COX-2、nm23和c-erbB-2在乳腺癌组织中的表达及其临床意义[J].肿瘤基础与临床杂志，2015，28(2)：99-102.

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[8] 刘西林，张永生，韩洁,等.PHH3和Ki-67在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及其临床意义[J].临床与实验病理杂志，2015，31(11)：1228-1232.

The relationship of COX-2 and PHH3 in response and prognosis for Her-2 positive breast cancer patients with neoadjuvant chemotherapy

FANXin-yongWENYan-fang

(Dept.of General Surgery,3th People’s Hospital of Shaoguan,Shaoguan 512123,China)

Objective:To study the relationship of COX-2 and PHH3 in response and prognosis for Her-2 positive breast cancer patients with neoadjuvant chemotherapy. Methods:48 patients of breast cancer who treated with NAC were included in this retrospective study. Investigated the relationship of COX-2 and PHH3 to response and prognosis.Results:The response rate of high expression of COX-2 is 55%(21/25), it is batter than low expression gruop(14/23)(P<0.05).The response rate of high expression of PHH3 is 55%(19/21), it is batter than low expression gruop(16/27)(P<0.05).The disease-free survival of low expression on COX-2 and PHH3 was longer than high experssion(P<0.05).Conclusion:COX-2 and PHH3 had an effect on response and prognosis of NAC. Low expression of them was batter on prognosis, but worse on response.

breast cancer;neoadjuvant chemotherapy；cyclooxygenase；phospho-histone H3

樊新咏(1983—)，男，湖北黄冈人，主治医师，本科，主要从事普外科临床工作。

R737.9

A

1004-7115(2017)12-1377-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.12.018

2017-10-18)