新辅助化疗联合同步放化疗对鼻咽癌外周血淋巴细胞的影响研究

杨 婧 肖 亮

(1. 安徽省肿瘤医院放疗科，安徽 合肥 230001；2. 安徽医科大学附属第一医院放疗科，安徽 合肥 230022)

新辅助化疗联合同步放化疗对鼻咽癌外周血淋巴细胞的影响研究

杨 婧1肖 亮2

(1. 安徽省肿瘤医院放疗科，安徽 合肥 230001；2. 安徽医科大学附属第一医院放疗科，安徽 合肥 230022)

目的 观察中晚期鼻咽癌患者新辅助化疗联合同步放化疗前后外周血淋巴细胞亚群及调节性T细胞的变化，为鼻咽癌免疫治疗提供依据。方法 应用流式细胞术检测58例鼻咽癌患者新辅助化疗联合同步放化疗前后外周血的T淋巴细胞及其亚群、NK细胞、B细胞及调节性T细胞(Treg)的比例。结果 鼻咽癌患者新辅助化疗联合同步放化疗后的外周血Th(CD3+CD4+)、Th/Ts(CD4+/CD8+)、B(CD3-CD19+)的均值较治疗前下降，差异有统计学意义(P<0.05)，Ts(CD3+CD8+)、NK(CD3-CD16+CD56+)的均值较治疗前升高，差异有统计学意义(P<0.05)，T(CD3+)、CD4+CD25+、CD4+CD25+CD127low/-的均值均较治疗前下降，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 鼻咽癌患者新辅助化疗联合同步放化疗后，免疫功能出现明显下降，故适当的免疫治疗对鼻咽癌患者降低并发症、改善预后可能起到积极的作用。

鼻咽癌；新辅助化疗；同步放化疗；淋巴细胞。

新辅助化疗联合同步放化疗现已成为中晚期鼻咽癌的标准治疗模式，以往的报导中，多为常规放疗对鼻咽癌患者外周血淋巴细胞亚群的影响，新的综合治疗下的鼻咽癌患者外周血淋巴细胞的变化尚少有报导。本研究通过测定鼻咽癌患者新辅助化疗联合同步放化疗前后淋巴细胞亚群的变化，判断机体的免疫功能变化，对鼻咽癌综合治疗中免疫治疗的作用提供依据。

1 资料与方法

1.1研究对象 2015年7月到2017年6月我院收治的初治鼻咽癌患者58例，年龄小于70岁，均有鼻咽部病理证实，均有鼻咽部+颈部增强MRI检查，无免疫系统疾病。入院前无其他抗肿瘤治疗或免疫治疗，其中男性40例，女性18例，年龄27～52岁，中位年龄47岁。鼻咽癌一般特征分布见表1。

1.2主要仪器、试剂及淋巴细胞亚群检测方法 采用美国BD公司的FACS AriaⅢ4色流式细胞仪，采用美国BD公司的鼠抗人CD3、CD4、CD16CD56、CD19、CD4CD25CD127单克隆抗体。采用BD公司自动分析软件进行T淋巴细胞亚群和调节性T细胞染色分析，查看各淋巴细胞所占的百分比。

表1 鼻咽癌患者一般情况分布

1.3治疗方法 所有鼻咽癌患者均行2程新辅助化疗后行同步放化疗，新辅助化疗均为多西他赛60 mg/m2，d1+顺铂25 mg/m2d1～3+氟尿嘧啶600 mg/m2CIV120 h方案。化疗结束1月内行放疗，采用Varian trilogy 5339直线加速器，容积旋转调强适形放疗，鼻咽病灶剂量在68～70 Gy之间，放疗期间采用每周方案同步化疗，顺铂/奈达铂40 mg/m2/周×5周同步化疗。分别于新辅助化疗开始前和同步放化疗结束后3个月内抽取晨起空腹静脉血2 ml，EDTA抗凝。用不同荧光标记的单克隆抗体20 μl加入50 μl的EDTA抗凝的外周血，染色10 min，加入红细胞裂解液，裂解15 min， PBS清洗3次，上机检测T细胞亚群比例和调节性T细胞。

1.4统计学处理

2 结 果

鼻咽癌患者新辅助化疗联合同步放化疗后的外周血CD3+CD4+、CD4+/CD8+、CD3-CD19+的均值较治疗前下降，差异有统计学意义(t值分别为8.173、8.544、2.571，P值为<0.001、<0.001、0.015)，CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+的均值较治疗前升高，差异有统计学意义(t值分别为-4.787、-2.610，P值为<0.001、0.014)，CD3+、CD4+CD25+、CD4+CD25+CD127low/-的均值均较治疗前下降，差异无统计学意义(t值分别为1.649、0.301、0.974，P值为0.109、0.765、0.338)。见表2和表3。

表2 新辅助化疗联合同步放化疗前后鼻咽癌患者外周血淋巴细胞亚群比较

免疫指标治疗前治疗后tPCD3+(%)66.687±9.04263.271±14.4491.6490.109CD4+(%)39.110±7.10327.855±9.0188.1730.000CD8+(%)25.836±7.63433.358±10.661-4.7870.000CD4+/CD8+1.643±0.5800.928±0.5208.5440.000CD16+CD56+(%)21.916±9.17426.826±13.132-2.6100.014CD19+(%)8.161±3.8426.023±4.2542.5710.015

表3 新辅助化疗联合同步放化疗前后鼻咽癌患者外周血调节性T细胞比较

3 讨 论

放疗是鼻咽癌首选治疗手段，以往多为常规放疗，现调强适形放疗使鼻咽癌患者5年生存率提高到80%左右[1-2]，新辅助化疗可以降低远处转移率，对提高局部控制率也有一定的作用[3-4]，故对于中晚期鼻咽癌，新辅助加同步联合调强适形放疗成为标准的治疗手段。但机体免疫功能的下降使得同步放化疗后期出现并发症的风险增高，局部复发和转移的几率增高，因此，动态监测免疫功能并及时的改善机体的免疫状态尤为重要。

机体抗肿瘤的免疫效应主要由细胞免疫所介导，发挥免疫效应的细胞主要为T细胞，CD4+/CD8+比值是反应机体免疫状态的重要指标，正常情况下，机体CD4+/CD8+比值保持一定的比例，维持机体的正常的免疫功能。刘斌等[5]报道了鼻咽癌患者与健康体检者相比，CD4+、CD4+/CD8+均值下降，CD8+均值升高，差异有统计学意义。本研究中，鼻咽癌患者新辅助化疗联合同步放化疗后与治疗前相比CD4+T细胞比例、CD19+比例明显降低，CD8+T细胞比例明显升高，CD4+/CD8+比值在治疗后是显著降低的，而CD3+T细胞比例及调节性T细胞比例均值降低，尚无明显统计学差异。以上结果提示放化疗在杀灭肿瘤细胞的同时，也在降低机体的免疫功能，同步放化疗后期出现骨髓抑制、肺部感染等几率大大增加，部分病人因此中断放疗，影响预后。外周血中NK细胞的比例在上升，可能提示在机体特异性免疫降低的同时，NK细胞可能收到某些特定细胞因子的活化，固有免疫较治疗前增强。

调节性T细胞是一群具有抑制其他免疫细胞功能的免疫负调控细胞，在肿瘤微环境中，Treg比例增高，且数目与肿瘤进展程度和预后、生存率呈负相关[6-7]。本研究中，Treg均值较治疗前下降，但无明显统计学差异，可能系样本量偏小及肿瘤分期偏晚有关。

综上所述，动态检测鼻咽癌患者外周血中T淋巴细胞亚群的变化，尤其是CD4+/CD8+比值，有助于及时了解机体免疫功能，为免疫治疗提供了依据，采用联合MHCⅠ类和MHCⅡ类限制性肿瘤抗原治疗，以及去除Treg或封闭其抑制功能，从而增强其他淋巴细胞的免疫反应，有利于降低合并症，降低肿瘤复发转移机会。

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Effect of neoadjuvant chemotherapy combined with concurrent chemoradiotherapy on peripheral blood lymphocytes in patients with nasopharyngeal carcinoma

YANGJing1XIAOLiang2

(Anhui Tumour Hospital, Hefei 230001，China)

Objective:To observe changes in levels of peripheral blood lymphocyte subsets and regulatory T cells before and after neoadjuvant chemotherapy combined chemoradiation in patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC), to provide the basis for immune treatment.Methods:Immune cells in the peripheral, including T lymphocyte and its subsets, NK cells, B cells, and the proportion of regulatory T cells , were detected by flow cytometry in 58 blood samples from the patients with nasopharyngeal carcinoma, who were treated prior to and after the combined treatment. Results: After be treated by the combined treatment in patients with NPC, we can observe that the average of peripheral blood Th(CD3+CD4+)、Th/Ts(CD4+/CD8+)and B(CD3-CD19+)was decreased, the differences were significant (P<0.05).The mean of Ts(CD3+CD8+)、NK(CD3-CD16+CD56+)was increased, the differences were significant(P<0.05).The average of T(CD3+)、CD4+CD25+、CD4+CD25+CD127low/-was decreased, there was no significant difference(P>0.05).Conclusion:The combined treatment can attenuate the immune function of the patients with NPC.It is therefore possible that the efficient treatment for immune function is favorable for the reduction of complications after NPC and the improvement of patients’prognosis.

NPC;neoadjuvant chemotherapy;concurrent chemoradiotherapy;lymphocytes

杨婧(1986—)，女，安徽亳州人，住院医师，本科，主要从事临床肿瘤放射治疗工作。

R739.6

A

1004-7115(2017)12-1367-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.12.015

2017-09-13)