完美实现全自动净化Lab Tech A-Station全自动平台实现全自动净化

文/苏丽评

完美实现全自动净化Lab Tech A-Station全自动平台实现全自动净化

文/苏丽评

此法运用单一乙腈缓冲液进行浸提，再用无水硫酸镁与醋酸钠震荡促使其分层；净化过程运用简单、快速、价格低廉的分散固相萃取技术，PSA（primary secondary amine）去除组分中脂肪酸，无水硫酸镁去除水分，得到的净化液可用 LC-MS或GC-MS进行农药多残留分析。

QuEChERS法中使用分散固相萃取（dSPE）对萃取液进行净化，虽然该方法具有较高回收率且操作简单快速，但是其自身同样存在一定缺陷，那就是净化程度并没有传统的SPE高，而且不易实现自动化。传统的SPE存在操作设备复杂、步骤多、农药易损失等缺点，不是最理想的净化手段。

为改良这些缺陷，需运用固相微型萃取（μSPE）技术，将几十毫克的各种固相萃取填料压缩入小体积柱中并运用该种小柱进行各种固相萃取实验，实现将固相萃取所需的样品及溶剂用量降低至几百微升级别，而且由于它的洗脱液体积小，洗脱液可直接进行后续分析测试。如果再将其配合至LabTech A-Station全自动多功能样品制备进样平台上，就可以实现所有萃取和进样过程的完全自动化，成为真正的在线固相萃取。μSPE不仅兼顾传统SPE的富集净化能力，同样实现溶剂使用量小，操作简单快速等优点。

μSPE小柱中有一款专为QuEChERS法萃取液进行净化而设计，完全可以代替QuEChERS法中的dSPE净化法，可表现出更佳的净化效果。本文参考AOAC2007版的QuEChERS法对黄瓜样品进行萃取并分别用dSPE和μSPE QuEChERS净化小柱对萃取液进行净化，净化液通过GC-MS进行测试并比较二者的净化效果。通过本文的初步测试，可看出μSPE QuEChERS净化小柱的净化效果较dSPE更佳且具有较高回收率。（见图1）

图1：dSPE和μSPE净化效果对比图。

表1：A-Station全自动净化及进样过程

试剂和设备

乙腈（色谱纯），乙酸（分析纯）；

1%乙酸乙腈：取1 mL乙酸置于含1/3乙腈的100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度；

有机氯农药标样1000 ppm，购于Sigma-Aldrich；

A-Station全自动多功能样品制备进样平台，莱伯泰科公司；

μSPE QuEChERS净化小柱，45-UMPCX-T，ITSP公司；

ProElut QuEChERS萃取套装，DiKMA64520；

ProElut QuEChERS净化试剂盒，DiKMA64513；

Agilent 7890B-5977B气相色谱质谱联用仪，安捷伦公司；

实验过程

样品萃取

取一根完整黄瓜，用刀将其切碎，放入搅拌机中进行初步破碎。然后准确称取15.0 g样品，置于50 mL具塞离心管中，加入15 mL的1%乙酸乙腈，用全自动均质仪在12000 r/min下，均质萃取1 min，取出后倒入1.5 g NaAC和6.0 g MgSO4（DiKMAProElutQuEChERS萃取套装），盖好盖子，剧烈振摇1min，最后在3000 r/min下离心5 min，得到待处理上清液。

dSPE净化

取1mL样品萃取过程中的上清液于2 mL的dSPE净化管中（DiKMAProElutQuEChERS净化试剂盒，150 mg MgSO4+50 mg PSA+50 mg C18+50 mg Carb），剧烈振摇1min后，在3000 r/min下离心5 min，取上清液进行GC-MS检测。

图2：μSPE加标净化液和标样色谱图对比。

μSPE净化

取1 mL，样品萃取中的上清液于2 mL的进样小瓶中，将小瓶放于A-Station多功能样品制备进样平台的样品架中，按照表1所示步骤进行全自动化的净化过程，净化后直接由A-Station的进样针取净化液进到GC-MS中进行检测分析。整个的净化和进样过程总耗时约7.5 min。

实验结果

净化效果对比

将dSPE净化和μSPE净化得到的净化液分别进行GC-MS的SCAN（全扫描）分析，得到结果如图1所示。其中蓝色线代表dSPE得到的净化液，红色线代表μSPE净化得到的净化液。图中很明显能看出dSPE净化液的干扰色谱峰要比μSPE净化液的色谱峰多，而且干扰响应比较大，基线也较高。由此可以看出，μSPE的净化效果比dSPE更好。

μSPE净化的加标回收情况

取10 μg/mL的有机氯农药标样 10 μL用样品萃取步骤上清液定容至1.0 mL容量瓶中，再取500 μL进行μSPE净化，加标浓度为100 μg/mL。得到的加标净化液的SIM谱图（黑色）和相应浓度的标样SIM谱图（红色）进行对比，见图2所示。图中可看出，加标的有机氯农药都得到了较好的回收率。

结论

利用Lab Tech A-Station全自动样品前处理平台，可以方便地将μSPE技术应用于实际样品的QuEChERS净化中。经测试，净化效果优于常规dSPE方式并且有良好的回收。Lab Tech A-Station全自动样品前处理平台在此项测试中发挥了显著的自动化精准样品前处理优势，可以便捷地实现样品前处理后向GC-MS或LC-MS进样。

【参考标准】

[1]AOAC Official Method 2007.01，Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partitioning with Magnesium Sulfate Gas Chromatography/Mass Spectrometry and Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry，First Action 2007

2003年，QuEChERS（Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged and Safe）方法在美国诞生，该分析方法快速、简便、价格低廉，可实现高质量农药多残留分析。研究结果表明：超过200种农药残留可运用QuEChERS方法进行分析。QuEChERS法较传统方法具有回收率高、精确度与准确度高、处理时间短、溶剂使用量少、操作简便、使用装置简单等优势。

本文作者来自北京莱伯泰科仪器股份有限公司。