AGR2在卵巢癌组织中表达及临床意义

万敏，杨胜晗

·论著·

AGR2在卵巢癌组织中表达及临床意义

万敏，杨胜晗

目的：通过分析人前梯度蛋白2(AGR2)在不同卵巢组织中的表达及其与卵巢癌各临床病理参数间的关系，探讨AGR2在卵巢癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化SP法检测AGR2在15例正常卵巢组织、20例卵巢良性肿瘤组织及50例卵巢癌组织中的表达情况，并结合卵巢癌各临床病理参数进行分析。结果AGR2在卵巢癌组织中的表达水平明显高于卵巢正常组织和卵巢良性肿瘤组织(P<0.05)；AGR2在卵巢癌组织中表达水平与患者的年龄、文化程度及病理类型无关(P>0.05)，而与患者的临床分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论AGR2有望成为卵巢癌早期诊断的一种新的肿瘤标记物。

卵巢肿瘤； 人前梯度蛋白2； 免疫组织化学； 肿瘤标志物

卵巢癌是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于子宫颈癌和子宫内膜癌而列居妇科肿瘤第3位，但死亡率却居第一位[1]。由于卵巢位于盆腔深部，发病隐匿，目前又缺乏有效的检测手段，因此很难早发现和早诊断。大部分卵巢癌患者确诊时已是晚期，仅有25%的患者早期被发现，而晚期卵巢癌患者的5年生存率较早期的95%降至20%～30%[2]。近年来随着越来越多的肿瘤标志物被发现，使得早期卵巢癌的诊断率逐渐升高。研究发现人前梯度蛋白2(anterior gradient 2，AGR2)与多种恶性肿瘤发生发展相关[3]，被称谓“一个新的癌症诊断标记”[4]，是目前研究的热点之一。本资料旨在探讨AGR2在卵巢癌组织中的表达情况及其临床意义，以便为卵巢癌的早期诊断寻找新的分子生物学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 临床标本选自2013年10月-2015年10月蚌埠市第三人民医院妇产科及蚌埠医学院第一附属医院肿瘤妇科收治的85例患者的病历资料，其中包括因其他原因切除正常卵巢组织的患者15例，卵巢良性肿瘤患者20例、卵巢癌患者50例，所有患者术前均未接受过任何治疗，所选病例均有完整的临床资料及存档蜡块。非卵巢癌患者年龄21～66岁，平均年龄38.55岁，50例卵巢癌患者年龄为28～65岁，平均年龄52.70岁，其中<52.70岁26例，≥52.70岁24例；根据UICC 2002版PTNM病理分期标准进行分期，早期(FIGOⅠ/Ⅱ期)卵巢癌17例，中、晚期(FIGO Ⅲ/Ⅳ期)卵巢癌33例；中高分化28例，低分化22例；术后经病理检查证实淋巴结转移者23例，无淋巴结转移者27例；浆液性卵巢癌38例，其他类型的卵巢癌患者12例。

1.2 主要材料 试剂盒为Elivision，试剂是兔抗人AGR2单克隆抗体，其浓度为1∶20，克隆号：RB33772，购买于ABGENT公司。

1.3 方法

1.3.1 试验方法 所有组织均10%甲醛固定、常规脱水、石蜡包埋后，分别进行HE和EnVsion两步法免疫组化染色，染色方法按照说明书进行操作。

1.3.2 判定标准 AGR2蛋白染色以细胞质出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。染色评分标准按照着色强度及着色细胞数综合计算，每张切片均由病理科资深医师，在相同条件下观察判断，阳性细胞的染色强度按无色、浅黄色、黄色、棕黄色分别计为0，1，2，3分；阳性细胞数计分：无阳性细胞为0分，1%～10%为1分，11%～50%为2分，51%～80%为3分，≥81%为4分；以上2项的乘积0～3分为阴性，4分及以上均为阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，计数资料组间比较应用Pearson χ2检验和Fisher确切概率法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AGR2在卵巢正常组织、卵巢良性肿瘤组织及卵巢癌组织中表达情况 在正常卵巢组织中AGR2蛋白表达阳性率为20%(3/15)，在卵巢良性肿瘤组织中AGR2蛋白表达阳性率为35%(7/20)，卵巢癌组织中AGR2蛋白表达阳性率为72%(36/50)。3组间两两比较显示，卵巢癌组织中AGR2表达阳性率明显高于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织，差异有统计学意义(P均<0.05)；正常卵巢组织与卵巢良性肿瘤组织AGR2表达阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 AGR2在不同卵巢组织中的表达

注：*与卵巢良性肿瘤组比较；△与卵巢癌组比较。

2.2 AGR2在卵巢癌组织中的表达及其与各临床病理参数的关系 AGR2表达阳性率与卵巢癌患者的年龄、分化程度、病理类型无关(P>0.05)，而与手术-病理分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05)，Ⅰ-Ⅱ期患者AGR2表达阳性率明显低于Ⅲ-Ⅳ期患者(χ2=4.641，P=0.031<0.05)；有淋巴结转移的患者AGR2表达阳性率明显高于无淋巴结转移的患者(χ2=5.062，P=0.024<0.05)。见表2。

3 讨论

3.1 AGR2的生物学特性 人类AGR2基因是1998年美国斯坦福大学Weigel RJ博士在研究乳腺癌中首先发现并克隆获得的[5]，现已证实AGR2分布较广泛，可存在于细胞核、内质网和细胞外[6]。AGR2基因定位于染色体7p21，共有两种mRNA，两种亚型都包含8个外显子和7个内含子，有175个氨基酸[7]。AGR2N-端含有可以切除的分泌信号序列，切割位点位于Ala20/Lys21，C-末端的10个氨基酸可能对增强细胞存活有重要的作用[8]。AGR2被认为是一个分泌蛋白[9]，但对于AGR2的功能及调控机制尚未完全明确，研究表明AGR2蛋白在许多生物系统中发挥作用，特别是在肿瘤的生长、侵润、转移及耐药性等方面有重要作用。

表2 AGR2在卵巢癌组织中的表达及其与各临床病理参数的关系

3.2 AGR2与肿瘤的关系 许多研究证实AGR2在乳腺癌中高表达。Barraclough等[10]研究结果得出AGR2与乳腺癌患者的存活时间成很强的负相关，AGR2表达越多病人的幸存时间越短，不表达AGR2的患者中约96%能生存20年，其研究结果还表明AGR2的表达不仅与雌激素受体相关还与S1004A、S100P等相关，而这些都是与肿瘤转移关系密切的蛋白，因此AGR2可视为一个肿瘤转移相关的因子，与病人的差预后相关，其具体作用机制不详。AGR2也被认为是前列腺癌的标记蛋白[11]，Zhang等[12]发现在前列腺癌中高表达，证明了AGR2可以促进肿瘤细胞的侵袭和迁移，证实了AGR2在肿瘤转移中起着重要作用。目前研究表明，AGR2在胰腺癌患者的胰液、血清及细胞中表达都非常高[13]，用共焦显微镜和流式细胞仪分析可得AGR2存在于细胞外表面，它的细胞表面定位，可作为一个细胞表面抗原被检测到，为胰腺癌的早期诊断提供新的方法[14]。除上述肿瘤外，AGR2在其他恶性肿瘤组织内也表达异常增高，如食管癌、肝癌、胃肠癌等[15]。

3.3 AGR2在卵巢癌中的表达及其与各临床病理参数的关系 目前国内外关于AGR2在卵巢癌中表达情况的报道甚少，Park等[16]研究表明在早期卵巢癌组织及血清中AGR2表达明显高于正常女性，这与本实验的结果相符，这一实验说明AGR2可能与卵巢癌的发生有关。本实验正常卵巢组织中AGR2蛋白表达阳性率为20%，卵巢良性肿瘤组织中AGR2表达阳性率为35%，而卵巢癌组织中AGR2表达阳性率为72%，卵巢癌组织中AGR2阳性表达率明显高于正常卵巢组织(P<0.05)，AGR2在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织及卵巢癌组织中的表达逐渐上调的现象，说明AGR2与卵巢癌的发展有关。白小英[3]采用ELISA法和电化学发光法检测发现AGR2在卵巢癌患者外周血清及组织中表达均增高，其升高水平与临床分期、淋巴结转移正相关，而与患者的年龄、组织学分级、病理类型无关，这也与本实验结果相符，说明了AGR2在卵巢癌的发生、侵袭及转移进展中可能起到一定的作用。

虽然AGR2在卵巢癌发生发展中作用机制还不完全明确，但在其他恶性肿瘤中研究已经证实AGR2能促进肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移，随着研究的深入，AGR2有望成为卵巢癌早期诊断、病情评估、预测预后的一种新型的肿瘤标记物。

[1] 任海花，任卫东，马惠风．卵巢癌临床流行病学调查报告[J].基层医学论坛，2009，13(2):62．

[2] 乐杰．妇产科学[M]．6版．北京:人民卫生出版社，2004:305．

[3] 白小英，金平，张蕾．AGR2在卵巢上皮性癌患者血清及癌组织中的表达及意义[J].实用妇产科杂志，2013,29(1):31-35．

[4] 魏龙刚，邓鸣涛，赵一楠，等.AGR2:一个新的癌症诊断标记[J].中国细胞生物学学报，2013,35(12):1705-1713.

[5] KUANG WW,THOMPSON DA,HOCH RV,et al.Differential screening and suppression subtractive hybridization identified genes differentialy expressed in an estrogen receptor-positive breast carcinoma cell line[J].Nucleic Acids,1998,26(4):1116-1123．

[6] VANDERLAAG KE,HUDAK S,BALD L,et al.Anterior gradient-2 plays a critical role in breast cancer cell growth and survival by modulating cyclin D1,estrogen receptor-alpha and survivin[J].Breast Cancer Res,2010,12(3):R32.

[7] PETEK E，WINDPASSINGER C，EGGER H，et al．Localization of the human anterior gradient-2 gene(AGR2)to chromosome band 7p21.3 by radiation hybrid mapping and fluorescencein situ hybridisation [J].Cytogenet Cell Genet ,2000，89(3-4):141-142．

[8] POHLER E,CRAIG AL,COTTON J,et al.The Barrett’s antigen anterior gradient-2 silences the p53 transcriptional response to DNA damage[J].Mol Cell Proteomics,2004,3(6):534-547.

[9] RAMACHANDRAN,ARUMUGAM T,WANG H,LogsdonCD.Anterior gradient 2 is expressed and secreted during the development of pancreatic cancer and promotes cancer cell survival[J].Cancer Res，2008，68(19): 7811-7818.

[10] BARRACLOUGH DL,PLATT-HIGGINS A,DE SILVA RUDLAND S,et al.The metastasis-associated anterior gradient 2 protein is correlated with poor survival of breast cancer patients[J].Am J Pathol,2009,175(5):1848-1857.

[11] BRYCHTOVA V,VOJTESEK B,ANDHRSTKA R.Anterior gradient 2:A novel player in tumor cell biology[J].Cancer Lett,2011,304(1):1-7.

[12] ZHANG Y,FOROOTAN SS,LIU D.Increased expression of anterior gradient-2 is significantly associated with poor survival of prostate cancer patients[J].Prostate Cancer Prostatic Dis,2007,10(3):293-300.

[13] MAKAWITA S,SMITH C,BATRUCH L,et al.Integrated proteomic profiling of cell line conditioned media and pancreatic juice for the identification of pancreatic cancer biomarkers[J].Mol Cell Proteomics,2011,10(10):M111.008599.

[14] DUMARTIN L,WHITEMAN HJ,WEEKS ME,et al.AGR2 is a novel surface antigen that promotes the dissemination of pancreatic cancer cells through regulation of cathepsins Band D[J].Cancer Res,2011,71(22):7091-7102.

[15] 吴正升，吴强，丁向东，等.一种新型转移诱导蛋白AGR2在乳腺癌中表达的意义[J].中华病理学杂志，2008,37(2):109-113.

[16] LEE JH,PARK KS,CHUNG YJ,et al.AGR2,a mucinous ovarian cancer marker,promotes cell proliferation and migration[J].ExpMol Med，2011,43(2):91-100.

ExpressionandclinicalsignificanceofAGR2inovariancarcinoma

WANMin,YANGSheng-han.
(DepartmentofGynecologyandObstetrics,BengbuThirdPeople'sHospital,Anhui233000,China)

Objective:To investigate the expression of anterior gradient 2 (AGR2) in different ovarian tissues and its relationship with clinicopathological parameters, and to detect the role of AGR2 in the occurrence and development of ovarian cancer.MethodsImmunohistochemical SP method was used to detect the expression of AGR2 in 15 cases of normal ovarian tissue, 20 cases of benign ovarian tumor and 50 cases of ovarian cancer, and the clinical pathological parameters of ovarian cancer were analyzed.ResultsThe expression of AGR2 in ovarian cancer tissues was significantly higher than that in normal ovarian tissues and benign ovarian tumors (P<0.05).The expression level of AGR2 in ovarian cancer was not related to the age, degree of education and type of pathology (P>0.05), but was closely related to the clinical stage and lymph node metastasis (P<0.05).ConclusionAGR2 is expected to be a new tumor marker for early diagnosis of ovarian cancer.

Ovarian cancer; AGR2; Immunohistochemistry; Tumor marker

安徽省蚌埠市第三人民医院 妇产科,233000

万敏(1961-)，女，主任医师，大学。

10.14126/j.cnki.1008-7044.2017.06.004

R 737.31

A

1008-7044(2017)06-0639-03

2017-06-02)