GC-MS法测定罗汉果中拟除虫菊酯农药残留量

周先丽，王鹏程，李远远，程柳，罗琴，梁成钦，付明磊，*

（1.桂林医学院广西高校生药学重点实验室，广西桂林541004；2.中国有色桂林矿产地质研究院有限公司，广西桂林541004）

GC-MS法测定罗汉果中拟除虫菊酯农药残留量

周先丽1，王鹏程1，李远远1，程柳2，罗琴1，梁成钦1，付明磊1，*

（1.桂林医学院广西高校生药学重点实验室，广西桂林541004；2.中国有色桂林矿产地质研究院有限公司，广西桂林541004）

建立气质联用（Gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）测定罗汉果中6种拟除虫菊酯类农药的残留量方法。样品用石油醚-丙酮混合溶剂超声提后过固相萃取小柱净化，经HP-5MS色谱柱分离，以气相色谱质谱法进行检测，用外标法计算含量。结果表明：6种拟除虫菊酯类农药在0.1 μg/mL～1.0 μg/mL范围内呈现良好的线性关系，相关系数为 0.999 1～0.999 9，检出限为 0.139 μg/kg～5.262 μg/kg。样品中 3 个加标水平的回收率为 83.5%～106.1%，相对标准偏差（RSD）为0.9%～6.5%。本试验所建立的方法操作简便，具有良好的回收率，精密度和灵敏度，符合检测要求，可用于罗汉果中6种拟除虫菊酯类农药残留的测定。

罗汉果；拟除虫菊酯；气相色谱-质谱法（GC-MS）

罗汉果[Siraitia Grosvenorii（Swing le）C.Jeffrey]属葫芦科罗汉果属的植物，具有清肺止咳，抗菌消炎等功效，是广西桂北地区特色药材[1]。罗汉果除了药用外，大部分用来生产甜苷，用于食品甜味剂，比如罗汉果糖，因为其含有甜味素，甜度高，深受糖尿病、肥胖者的喜欢[2-3]。由于罗汉果栽培时间较长，加上桂北地区气候温暖、湿润，非常容易产生各种病虫害，因此为了保证产量，不可避免要使用农药[1，4]。拟除虫菊酯类农药是广谱杀虫剂，由于具有高效、低毒的特点，在农业生产中广泛用于害虫防治[5-7]。随着人们生活水平的不断提高，食品的安全问题日益被人们所重视，对农药残留限量的要求也将更严格。拟除虫菊酯类农药的残留对人的健康危害极大，即使是低剂量的长期接触也会引起慢性疾病，甚至还存在致癌风险[8-9]，所以摸索和建立灵敏度更高，抗干扰能力更强，定量更准确拟除虫菊酯类农药的检测方法是非常必要的。目前检测拟除虫菊酯农药残留常用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC） 与气相色谱法（Gas chromatography，GC），较少使用气相色谱质谱联用法（GC-MS）[10]。与GC 和HPLC相比，GC-MS灵敏度更高，抗干扰能力更强，定量更准确[11-12]。在此前工作中我们已利用HPLC-MS法和GC-MS法测定了罗汉果中氨基甲酸酯和有机氯农药的残留量[13-14]，而在本文中我们利用GC-MS法对罗汉果中6种拟除虫菊酯的农药残留进行了检测，以便为罗汉果的安全使用提供更系统的质量控制依据。

1 材料与方法

1.1 材料

罗汉果样品分别采于广西永福百寿、永福堡里、临桂中庸、临桂茶垌、龙胜飘里。

1.2 仪器与试剂

GCMS-QP2010气质联用仪：日本岛津公司，配有自动进样器（AOC-20i）；RE-5298A 旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；DFY-400高速中药粉碎机：温岭市林大科技有限公司；B2200S-7台式超声清洗机：必能信超声有限公司。6种农药标准品甲氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、溴氰菊酯：农业部环境保护科研监测所。

1.3 方法

1.3.1 气相色谱-质谱分析条件

气相色谱条件：HP-5MS石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；进样口温度为 250℃，He载气（≥99.999%），载气流量3 mL/min；分流进样，分流比1∶1；柱升温程序：初始温度90℃，保持1 min，以30℃/min升至230℃，保持1 min，以2℃/min升至280℃；柱流速率为1.46 mL/min；进样量2.0 μL。

质谱条件：接口温度为280℃，EI离子源，电子能量70 eV，离子源温度230℃，溶剂延迟时间12 min，传输线温度280℃；选择性离子检测模式测定；定量方法为外标法；数据采集方式为全扫描模式，质量扫描范围70 amu～400 amu，选择离子强度大、不受干扰的离子为定量离子，各化合物定量离子及定性离子见表1。

表1 罗汉果中拟除虫菊酯农药残留的保留时间和特征离子Table 1 The Retention Time and Characteristic Ions of pyrethroid pesticide residues in Siraitia Grosvenorii

1.3.2 样品提取

将罗汉果样品用自来水冲洗，再用二次蒸馏水冲洗，置于烘箱中烘干（60℃）后，粉碎，过5号筛。精密称取2.0 g，置100 mL具塞锥形瓶中，加石油醚（60℃～90℃）-丙酮（4∶1，体积比）混合溶液 30 mL，超声处理15 min，过滤，药渣再重复上述操作2次后，合并滤液。于45℃减压浓缩至干，残渣用少量正己烷反复操作3次，至干，残渣再加适量正己烷溶解，待净化。

1.3.3 样品净化

将混合小柱（由下至上依次为无水硫酸钠2.0 g、弗罗里硅土4.0 g、氧化铝1.0 g和无水硫酸钠2.0 g）作为净化柱，用石油醚-丙酮（4∶1，体积比）混合溶液20 mL淋洗柱体后，将待净化液转移至净化柱中，用石油醚-丙酮（4∶1，体积比）混合溶液50 mL洗脱，收集洗脱液，于40℃～45℃减压浓缩至干，以正己烷定容至10 mL溶解，待测。

2 结果与讨论

2.1 GC-MS分析条件选择

试验对气相色谱柱、柱流速率、进样口温度以及质谱接口温度等因素进行比较，确定了最佳条件（1.3.1）。结果表明分离良好，各农药的出峰顺序如图1、图 2。

2.2 线性范围与检测限

分别精密量取混合对照品母液 0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL于10 mL量瓶中，用正己烷稀释至刻度并摇匀，作为混合对照品溶液，每个浓度平行3份，按“1.3.1”项下色谱条件分析，绘制标准曲线。得到线性方程，见表2。

由此可见6种拟除虫菊酯农药在0.1 μg/mL～1.0 μg/mL之间线性关系良好，相关系数（r）为0.999 1～0.999 9。检出限按信噪比3∶1计算，6种拟除虫菊酯农药检出限为 0.139 μg/kg～5.262 μg/kg。可见，6 种拟除虫菊酯农药均有较好的线性关系及较高的灵敏度。

图1 6种拟除虫菊酯农药混合对照品色谱图Fig.1 6 pyrethroid pesticide standard samples chromatogram

图2 样品加标色谱图Fig.2 Chromatogram of sample after adding standard

表2 6种拟除虫菊酯农药回归方程及检出限（n=3）Table 2 Standard curves and detection limits of 6 pyrethroid pesticide

2.3 精密度与稳定性

精密量取混合对照品母液 0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL共6个体积，至10 mL容量瓶中，用正己烷稀释至刻度并摇匀，作为对照品溶液，临用现配。精确量取上述对照品溶液各1 mL，每个浓度平行3份，按“1.3.1”项下色谱条件分析，绘制标准曲线；准确吸取质量浓度为500 μg/L混合标准品溶液依“1.3.1”项下色谱条件进行分析，连续进样6次，检测仪器的精密度。在 0、2、4、6、8、10、12 h 时间段对浓度为 50 μg/mL 的混合对照品溶液进行测定，检测稳定性。精密度试验结果测得各种农药的RSD为1.82%～3.55%，表明仪器精密度良好。稳定性试验结果表明6种拟除虫菊酯农药在12个小时内稳定性良好，能满足含量测定的要求。

2.4 加样回收试验

准确称取同一样品9份，分3水平加入浓度分别为 0.05、0.125、0.25μg/g 混合对照品溶液，按“1.3.2”项制备样品，按“1.3.1”项下色谱方法测定分析，计算回收率。加样回收试验结果见表3。

6种拟除虫菊酯农药的加样平均回收率为83.5%～106.1%，相对标准偏差为0.9%～6.5%。本测定方法的准确度和精密度能满足测定的需要。

2.5 样品分析

按“1.3”项处理罗汉果，每个产地样品取2份，按“1.3.1”项下色谱方法每份测3次，测得5个产地罗汉果中除虫菊酯类农药残留量见表4。

表3 样品中3个加标水平下6种拟除虫菊酯农药加样回收率（n=6）Table 3 Recoveries of six pyrethroid pesticides determined at three spiked levels（n=6）

表4 5个产地罗汉果样品中拟除虫菊酯类农药残留量检测结果Table 4 Test results of pyrethroid pesticide residues in Siraitia Grosvenorii from five places mg/kg

结果表明永福百寿、永福堡里、龙胜飘里、临桂茶垌四个地区的罗汉果分别含氯氰菊酯为0.860、0.085、0.461、0.905 mg/kg。临桂中庸罗汉果含氯菊酯0.109 mg/kg，其它均未检出。

3 结论

与文献[15]相比，该方法对6种拟除虫菊酯农药残留的检测的灵敏度更高，能满足罗汉果中拟除虫菊酯类农药残留检测要求。为了测定桂林不同产地罗汉果的拟除虫菊酯类农药的残留分布情况，我们利用所建立的罗汉果中6种拟除虫菊酯类农药的残留GCMS分析方法，考察了永福百寿、永福堡里、龙胜飘里、临桂茶垌和临桂中庸5个产区的罗汉果拟除虫菊酯类农药的残留情况。结果发现这5个产地的罗汉果都含有拟除虫菊酯类农药残留，但主要为氯氰菊酯。该研究结果，对提高罗汉果品质，促进罗汉果的产业化发展具有一定价值。

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Determination of 6 Kinds of Pyrethroid Pesticides in Siraitia Grosvenorii by GC-MS

ZHOU Xian-li1，WANG Peng-cheng1，LI Yuan-yuan1，CHENG Liu2，LUO Qin1，LIANG Cheng-qin1，FU Ming-lei1，*
（1.Guangxi Key Laboratory of Pharmacognosy in University，Guilin Medical University，Guilin 541004，Guangxi，China；2.China Nonferrous Metals（Guilin）Geology and Mining Co.，Ltd.，Guilin 541004，Guangxi，China）

The method for determination of six pyrethroid pesticides in Siraitia Grosvenorii by gas chromatography-mass spectrometry was established.The samples were extracted with organic solvent by ultrasound，and pyrethroid pesticides were cleaned-up by solid-phase extraction column，determined by GC-MS with HP-5MS chromatographic column.The contents were calculated by the external standard method.The results showed that the linear range was from 0.1 μg/mL to 1.0 μg/mL with correlation coefficients（r=0.999 1-0.999 9）.The limits of detection were 0.139 μg/kg-5.262 μg/kg，and the average recoveries ranged from 83.5%to 106.1%，with the relative standard deviations from 0.9%to 6.5%.The proposed method is effective，quick，sensitive and reproducible，and can be applied to determine pyrethroid pesticide residues in Siraitia Grosvenorii.

Siraitia Grosvenorii；pyrethroid；gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS）

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.23.029

广西科学研究与技术开发计划项目（桂科能1598025-18、桂科能14123006-21）

周先丽（1979—），女（汉），副教授，博士，主要从事天然药物研究。

*通信作者：付明磊（1965—），男（汉），主管药师，学士，主要从事天然药物活性成分发现与开发。

2017-07-26