毛细管电泳仪重复性和均一性性能测试方法及分析

周 参

(公安部第一研究所 北京 102200)

毛细管电泳仪重复性和均一性性能测试方法及分析

周 参

(公安部第一研究所 北京 102200)

本文针对用于DNA检测的毛细管电泳仪，设计了重复性及均一性测试方法，并对测试结果进行分析，结果显示重复性测试相对标准方差小于1.6%，均一性标准方差小于1.65%，满足DNA电泳需求。

毛细管电泳仪；重复性；均一性

毛细管电泳仪是自20世纪70年代以来在生物领域广泛使用的分析仪器，由于毛细管电泳所需样品量少、可以施加高压进而缩短电泳时间、易于实现自动化、可以实现对批量样品的分析等优点，毛细管电泳在生物高分子特别是DNA检测方面发挥了巨大作用。本文以课题组自主研制的毛细管电泳仪为研究对象，对其电泳重复性和均一性进行了测试。

一、实验试剂

LIZ500、甲酰胺、POP4胶、缓冲液、16通道毛细管阵列(均由ABI公司提供)。

二、实验方法

1. 取5ul LIZ500与195ul甲酰胺混合，分装到96孔板A1-A2行，每孔加入10ul样品。

2. 将毛细管安装到毛细管电泳仪上，毛细管两端分别浸入到缓冲液中，并向毛细管中灌注POP4胶。

3. 采用电进样方式将LIZ500引入毛细管通道中。

4. 毛细管电泳仪对LIZ500进行20次重复检测，采集LIZ500各片段出峰时间，选取部分位点的数据对毛细管电泳仪重复性和均一性进行分析。

三、实验结果及分析:

1. 重复性

选取毛细管阵列中的第1根毛细管作为研究对象，选取75、100、139、150、160、200、250、300、340、350、400bp片段的20次电泳的出峰帧数进行分析，结果如图1及图2所示，第1根毛细管在20次电泳中，选取的每个DNA片段的出峰位置相对标准偏差小于1.6%，表明毛细管电泳仪重复性效果很好。

2. 均一性

对同一组电泳中16根毛细管中 75、100、139、150、160、200、250、300、340、350、400bp片段的出峰帧数进行分析，结果如图3及图4所示，同一组电泳中，每根毛细管中选取的每个DNA片段的出峰位置相对标准偏差小于1.65%，表示毛细管电泳仪均一性效果很好。

四、总结

本文采用ABI的LIZ500试剂对毛细管电泳仪的重复性和均一性进行测试，重复性测试相对标准方差小于1.6%，均一性标准方差小于1.65%，低于仪器分析相对标准方差应在2.0%以下的要求，表明课题组自主研制的毛细管电泳仪能够满足重复性及均一性测试要求，可以对DNA片段进行分析。

图1 重复性测试结果

图2 重复性测试相对标准偏差

图3 均一性测试结果

图4 均一性测试相对标准偏差

[1]郭怀忠，毕开顺，孙毓庆． 影响毛细管电泳分析结果重现性的因素及其控制[J]． 分析仪器， 2005，2: 42-45.