西吡氯铵含漱液对两种口腔感染真菌抗菌活性研究

王新红，唐樱花，晏丽婷

(广州医科大学附属口腔医院，广州口腔疾病研究所，口腔医学重点实验室，广东 广州 510140)

西吡氯铵含漱液对两种口腔感染真菌抗菌活性研究

王新红*，唐樱花，晏丽婷

(广州医科大学附属口腔医院，广州口腔疾病研究所，口腔医学重点实验室，广东 广州 510140)

目的：检测0.1%西吡氯铵含漱液对白色念珠菌、热带念珠菌及其部分临床株的抗菌活性。方法：以CLSI推荐的微量肉汤稀释法进行检测。结果：西吡氯铵对白色念珠菌、热带念珠菌均有较好的抑制效果，标准菌株的MIC均为156.25μg/mL；临床菌株的MIC在78.13μg/mL～312.5μg/mL之间。结论：0.1%西吡氯铵含漱液对白色念珠菌和热带念珠菌具有较好的抗菌效果。

西吡氯铵； 白色念珠菌； 热带念珠菌； 微量肉汤稀释法

西吡氯铵(Cetylpyridinium chloride,CPC)化学成分为阳离子季铵化合物，具有表面活性剂的功能。因其有较好的抗菌效果，对黏膜无明显刺激作用，且无着色效应[1]，故该制剂在国内外得到了广泛应用，在临床上多用于口腔卫生保健[2-3]。

真菌感染是临床常见的口腔疾病之一，传染性较强，流行广泛。近年来，随着口腔治疗的广泛开展，加之激素和免疫抑制剂的大量应用，口腔真菌感染越来越常见，尤其是对免疫低下的患者而言，更易引发严重后果甚至导致死亡。念珠菌属所致感染在口腔真菌感染中最为常见，该属真菌中致病性最强的是白色念珠菌(CanidiaAlbicans)和热带念珠菌(Candidatropicalis)[4]，其中白色念珠菌为常见的机会致病菌，可感染皮肤、黏膜和脏器，引起浅部或深部感染[5]。在口腔中，该菌可感染黏膜，引起口腔龋齿病变；热带念珠菌是最流行的非白色念珠菌[6]，近年来，由侵袭性热带念珠菌所致的口腔感染发生比例显著升高[7]。故此，本研究以这两种真菌的标准株及多株临床分离株为实验材料，对0.1%西吡氯铵含漱液的抗真菌活性进行了测定。结果显示该含漱液对上述两种真菌及其临床分离株均有一定抑制效果。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药品

待检制剂：0.1%CPC漱口液，由杭州民生药业有限公司提供，批号170306，规格0.1%/200 mL(瓶)；3%过氧化氢消毒液，批号K1704302，规格3%/100 mL(瓶)。

1.1.2 培养基

实验所用沙保弱琼脂由北京奥博星生物公司生产，批号：20150707，YPD肉汤为北京奥博星生物公司生产，批号20160712；上述培养基均按说明书配制，并按说明书规定条件高压蒸汽灭菌备用。

1.1.3 实验菌株

实验所用菌株由山东中医药大学微生物教研室惠赠。白色念珠菌(CanidiaAlbicans)标准菌株2株，为ATCC9028，CMCC(F)98001，临床分离株共计7株。热带念珠菌(Candidatropicalis)标准株ATCC1369，临床分离株共计5株。以上各菌株以沙保弱琼脂进行接种，35℃48h培养后挑取生长良好的菌苔，以YPD肉汤配成1×105cfu/mL的对应菌液备用。

1.2 实验方法

采用美国临床和实验室标准化委员会(CLSI)推荐的微量稀释法[8]，参照文献[9]稍作修改，以96孔板测定MIC(最小抑菌浓度)。在96孔板中每孔加入YPD肉汤100μL，然后在第1行中加入100μL西吡氯铵原液，随后从第1行中吸取100μL混合液加入第2行，依次类推至第8行，西吡氯铵原液等效浓度为1mg/mL，依次递倍稀释得到2～256倍稀释梯度。另单独设置阴性对照，只加入YPD肉汤和对应菌液，观察生长现象。同时设立药物稀释梯度和YPD肉汤空白做为辅助对比。阳性对照孔每孔加入10μL 3%过氧化氢消毒液。以上药液和对照加样完毕后，每孔加入1×105cfu/mL的对应真菌菌液10μL，每个药物重复3孔，37℃24h培养，以真菌生长情况判断结果。样品的MIC判定以样品孔与对照孔比较得出：若该孔肉眼观察培养液清晰，下一孔出现浑浊，则该孔稀释度视为其MIC；与空白孔对照出现浑浊则说明无抑制效果[10]。

2 结果

37℃24h培养结束后观察结果。阳性孔中培养液澄清透明，无肉眼可见浑浊；阴性孔中均有明显浑浊。各样品孔结果如下。

2.1 白色念珠菌菌抑菌实验结果(含标准株，见表1)

表1 白色念珠菌MIC结果

表1显示，西吡氯铵含漱液对白色念珠菌ATCC9028和CMCC(F)98001标准菌株的MIC均为156.25μg/mL，对白色念珠菌各临床菌株的MIC介于78.13μg/mL-312.5μg/mL之间。

2.2 热带念珠菌菌抑菌实验结果(含标准株，见表2)

表2 热带念珠菌MIC结果

表2显示，西吡氯铵含漱液对热带念珠菌标准株ATCC1369的MIC为156.25μg/mL，对热带念珠菌各临床菌株的MIC介于156.25μg/mL～312.5μg/mL之间。

3 讨论

国内外文献报道显示，西吡氯铵是一种表面活性剂，可通过降低表面张力，进而增加细胞壁和细胞膜的通透性而起到抑菌和杀菌作用。其抗菌谱较广，对多种细菌如葡萄球菌、链球菌、幽门螺杆菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌等均有一定抑制效果[11-13]]，对口腔白色念珠菌感染也有较好疗效[14]。因其对口腔正常菌群无显著作用[15]，故而已有多家口腔医院将其用作口腔消毒剂。

念珠菌属是酵母菌中最大的一属[16]，其中部分念珠菌寄生于人体，在正常菌群中分布广泛，也属于机会致病菌，临床中该菌常引起的感染是口腔念珠菌病及念珠菌性阴道炎。其中口腔念珠菌感染是念珠菌属感染所引起的急性、亚急性或慢性口腔黏膜疾病, 长期不愈还有恶变。应引起足够的重视[17]。该病的主要病原菌为白色念珠菌，但热带念珠菌等其他念珠菌属真菌也可引起类似感染[18]。白色念珠菌是临床常见的口腔感染真菌之一，但亦可引起免疫低下者出现黏膜及全身感染。热带念珠菌是最流行的非白色念珠菌[19]，由于近年来对白色念珠菌患者过度使用抗真菌药物，导致非白念珠菌定植率升高。如印度流行病学监测数据显示，院内真菌感染主要由非白念珠菌引起，其中热带念珠菌占到绝大多数[20]。该菌易感染免疫低下患者，病死率高于其他念珠菌感染，易形成生物膜，可能导致院内播散，更需要予以重视[7]。有鉴于此，本研究选择上述两种具有代表性的真菌及其临床菌株进行研究，能充分反映西吡氯铵含漱液对常见口腔真菌的抑菌活性。

实验结果显示，西吡氯铵含漱液对白色念珠菌ATCC9028和CMCC(F)98001标准株的MIC均为156.25μg/mL，对白色念珠菌各临床菌株的MIC介于78.13μg/mL～312.5μg/mL之间；对热带念珠菌ATCC1369标准株的MIC为156.25μg/mL，对热带念珠菌各临床菌株的MIC介于156.25μg/mL～312.5μg/mL之间。该结果显示西吡氯铵含漱液对这两种真菌均有较好的抑制效果，与临床研究的结果基本一致。

近年来，由于广谱抗生素、激素和免疫抑制剂的大量使用，加之艾滋病患者的不断增加，口腔念珠菌感染的发病率不断上升。研究显示，白色念珠菌感染在真菌感染中最为常见，占53%～68%[21]；临床中，热带念珠菌等非白色念珠菌日益增多，周小武[18]等的研究显示，在口腔念珠菌病患者中，白念珠菌感染占61.43%，热带念珠菌占14.29%。目前临床中，对口腔念珠菌感染常建议早期局部药物治疗。西吡氯铵可通过其表面活性剂作用，阻止菌体粘附于口腔黏膜上皮细胞表面，影响真菌的细胞壁和细胞膜，增强其通透性导致菌体内蛋白变性，进而杀灭真菌。此外，该药物对口腔黏膜刺激性小，无明显染色效应，故此，西吡氯铵是一种适用于防治口腔真菌感染的有效药物，有进一步深入开发的价值。

[1] 吴军正,周 威,刘 斌,等.西吡氯铵含漱液对单纯性牙龈炎患者临床症状的改善作用[J].实用口腔医学杂志,2003,19(4):353.

[2] Hu D,Li X,Sreenivasan PK,et al.A randomized,doubleblind clinical study to assess the antimicrobial effects of a cetylpyridinium chloride mouth rinse on dental plaque bacteria[J].Clin Ther,2009,31(11):2540-2548.

[3] Watanabe E,Tanomaru JM,Nascimento AP,et al.

Determination of the maximum inhibitory dilution of cetylpyridinium chloride-based mouthwashes againstStaphylococcusaureus:an in vitro study[J].J Appl Oral Sci,2008,16(4):275-279.

[4] 申 杰,周文明.口腔真菌感染的研究进展[J].国际口腔医学杂志,2013,40(05):619-624.

[5] 江文俊,姜福全,崔彦. 白色念珠菌生物学特性研究进展[J].基础医学与临床,2014,34(04):550-554.

[6] Kothavade R J, Kura M M,Valand A G, et al.Candidatropicalis:its prevalence,pathogenicity and increasing resistance to fluconazole[J]. J Med Microbiol,2010,59( 8):873-880.

[7] 范 欣,徐英春. 侵袭性热带念珠菌感染流行病学及药物敏感性[J]. 中国真菌学杂志,2014,9(06):368-372.

[8] Clinical and Laboratory Standards Institute. Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts; approved standard M27-A3,3rd ed[S].Clinical and Laboratory Standards Institute,Wayne,PA,2007.

[9] 郭莉娜,徐志鹏,王 瑶,等.微量肉汤稀释法比较分析不同培养时间念珠菌属对唑类药物的敏感性[J]. 中国真菌学杂志,2016,11(06):332-336.

[10] 孙长贵,张丽君,曾贤铭, 等.微量稀释法测定抗真菌剂对酵母菌MIC的评价[J]. 临床检验杂志,2000(06):331-332,335.

[11] 李孝权,肖晓蓉,朱珠,等.0.1%西吡氯铵漱口液的体外抗菌试验[J].中国微生态学杂志,2012,14(6)：361-362.

[12] Cutter C N,Dorsa W J,Handie,et all.Antimicrobial activity of cetylpyridinium chloride washes against pathogenic bacteria on beef surfaces[J].J FoodProt,2000,63(5):593-600.

[13] Bereswill S,Vey T, Kist M.Susceptibility in vitro ofhelicobacterpylorito cetylpyridinium chloride[J] FEMS Immunol Med Microbiol,1999,24(2):189-1921.

[14] 张 迪,刘长虹,章锦才,等.西吡氯铵含片对口源性口臭患者口腔内致臭菌的影响[J].南方医科大学学报,2014,34(9):1386-1389.

[15] Radford JR, Beighton D, Nugent Z,et all.Effect of use of 0.05% cetylpyridinium chloride mouthwash on normal oral flora[J]. J Dent,1997,25(1):35-40.

[16] 白逢彦.假丝酵母属的分类学研究进展[J]. 微生物学通报,1997,(06):354-356.

[17] 王燕.西吡氯铵与聚维酮碘含漱液对口腔念珠菌感染的疗效对照分析[J]. 实用临床医药杂志,2012,16(21):118-120.

[18] 周小武,姜巍巍.口腔念珠菌感染患者口内菌株检出情况和药敏性观察.中国全科医学,2012,15(14);1617-1619.

[19] 陈腊梅,徐永豪,于秀娟,等.临床分离161株念珠菌菌种鉴定及氟康唑药敏试验分析[J].中国真菌学杂志,2008,3(3)：138-141.

[20] Kothari A,Sagar V.Epidemiology of candida bloodstream infections in a tertiary care institute in India[J].Indian J Med Microbiol,2009,27(2):171-172.

[21] Pfaller M A. Epidemiological typing methods for mycoses[J]. Clinical Infectious Diseases An Official Publication of the Infectious Diseases Society of America, 1992,14 (S1) :S4.

(本文文献格式：王新红，唐樱花，晏丽婷.西吡氯铵含漱液对两种口腔感染真菌抗菌活性研究[J].山东化工，2017，46(20)：19-20,25.)

AntibacterialactivityofCetylpyridniumChlorideGargleAgainstontwoOralInfectionFungi

WangXinhong1，TangYinghua1，YanLiting1

(Department of periodontics and oral medicine, Stomatology Hospital of Guangzhou Medical University,Guangzhou 510140,China)

Objective:The in vitro antimicrobial activity of 0.1% cetylpyridinium chloride was determined against standard strains and clinical isolates ofCanidiaAlbicansandCandidatropicalis. Methods: Micro both dilution method. Results:The inhibition of cetylpridinium chloride onCanidiaAlbicansandCandidatropicalisare obvious, the MIC of standard strains is 156.25μg/mL; While the MICs of clinical isolates range from 78.13μg/mL～312.5μg/mL. Conclusion: 0.1% of cetylpyridinium chloride has significant antibacterial effect on Canidia Albicans and Candida tropicalis. and clinically isolated strains.

cetylpyridinium chloride;CanidiaAlbicans;Candidatropicalis;micro both dilution method

2017-08-17

广东省医学科学技术研究基金A2016223

王新红(1976—)，女，山东威海人，博士研究生，副教授，主要从事牙周病及黏膜病学的医教研工作。

R781.54

A

1008-021X(2017)20-0019-02