壮药制剂棒柄花叶清肝胶囊的质量控制研究

张 颖 刘 元 宋志钊 文志云 韦 韡

1.广西壮族自治区中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022

壮药制剂棒柄花叶清肝胶囊的质量控制研究

张 颖1,2刘 元1,2宋志钊1,2文志云1,2韦 韡1,2

1.广西壮族自治区中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022

目的：制定壮药制剂棒柄花叶清肝胶囊的质量控制方法。方法：采用TLC法对制剂中虎杖和黄芪进行鉴别；采用HPLC法测定方中虎杖苷含量。结果：在虎杖薄层色谱中，壮药制剂棒柄花叶清肝胶囊与大黄素对照品，大黄素甲醚对照品色谱相应的位置上，斑点清晰，阴性无干扰，可作为定性鉴别；在黄芪薄层色谱图中，壮药制剂棒柄花叶清肝胶囊在与黄芪对照药材色谱相应的位置上，斑点清晰，阴性无干扰，可作为定性鉴别；HPLC测定虎杖苷在 5.1～163.2 μg范围内与峰面积性关系良好(r=0.999 8)，平均回收率为 98.8%，RSD为1.64% (n=6)。结论：建立的质量标准可控制壮药制剂棒柄花叶清肝胶囊的质量。

壮药制剂；大黄素；大黄素甲醚；黄芪；虎杖苷

壮药制剂棒柄花叶清肝胶囊是广西壮族自治区中医药研究院自主知识产权的非标准制剂[1]，由棒柄花叶、白花蛇舌草、虎杖、黄芪4味中药组成，具有清热毒、除湿毒、通龙路火路(壮医理论)的功效，用于慢性乙型肝炎(肝胆湿热证)[2]。棒柄花叶清肝胶囊方[3]中棒柄花叶性味苦、寒，具有清热毒、除湿毒之功效，是壮医清除湿毒热毒、退黄疸之要药，是为主药。虎杖味苦，性寒，具有清热毒、除湿毒之功效；白花蛇舌草味苦、甘，性寒，具有调龙路、通水道、清热毒、除湿毒的功效，二药可加强主药的作用，是为帮药。此外，黄芪性味甘温，具有补气虚，促生血的作用，既可针对慢性肝炎久病气血不足而设，也有防止其余苦寒药之伤正太过，也起到帮药的作用。全方仅有4味药，反映出壮医用药简、便、廉的特点[4]。为了有效控制制剂质量，笔者对其质量标准进行了研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器 YOKO-ZS型紫外分析摄影仪(武汉药科新技术开发公司)； LC-20ATVP/SPD-20AVP高效液相色谱仪(广西威玛龙工作站及软件5.23版，日本岛津)；AL-104型电子天平(梅特勒-托利多(上海)有限公司)；KQ-5200E型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料 黄芪对照药材(批号：120974-200609，由中国药品生物制品检定院)。大黄素(批号：110756-200110)、大黄素甲醚(批号：110758-200610)、虎杖苷(批号：111575-200502)等对照品均由中国药品生物制品检定院；棒柄花叶清肝胶囊(批号：20160601、20160602、20160603，0.4g/粒，广西医科大学制药厂)。乙腈为色谱纯，液相用水为超纯水，甲醇、三氯甲烷、石油醚、甲酸乙酯、甲酸乙醚、石油醚等化学试剂为分析纯。薄层层析硅胶G(板青岛海洋化工有限公司产品)。

2 方法与结果

2.1 虎杖TLC定性鉴别[5]

2.1.1 对照品溶液的制备 取大黄素、大黄素甲醚各加甲醇制成每 1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 取本品内容物 3.0g，加甲醇 20mL，加热回流 30min，滤过，滤液蒸干，残渣加 2.5mol/L硫酸溶液20mL，水浴加热30min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次 20mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液。

2.1.3 缺虎杖阴性样品溶液制备 按壮药制剂棒柄花叶清肝胶囊处方取缺虎杖的各味药材，按工艺制法制备缺虎杖的阴性样品，取3.0g，按照“2.1.2”项下方法制备，即得缺虎杖的阴性样品溶液。

2.1.4 薄层色谱条件及结果 照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取上述3种溶液各 4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性样品色谱无上述斑点。如图1所示。

2.2 黄芪TLC定性鉴别

2.2.1 对照药材溶液的制备 取黄芪对照药材 0.5 g，按照“2.2.2”项下制成对照药材溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物 3.0g，加甲醇 20mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加 0.3%氢氧化钠溶液15mL使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值到5～6，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次 20mL，合并乙酸乙酯，用水振摇提取2次，每次 20mL，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇 1mL使溶解，作为供试品溶液。

2.2.3 薄层色谱条件及结果 照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取吸取上述2种溶液各3～5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)为展开剂展开，取出，晾干，置于紫外灯254nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性样品色谱无上述斑点。如图2所示。

2.3 含量测定

2.3.1 供试品溶液的制备 取本品内容物研细并混匀，取0.3g，精密称定，25mL量瓶中，加稀乙醇20mL，超声处理30min(频率28kHz、功率100W)，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取虎杖苷对照品 10.2mg，置 25mL量瓶中，用稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成 408mg/L虎杖苷对照品储备液，备用。精密量取虎杖苷对照品储备液1.0mL，置10mL量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度，得40.8mg/L对照品溶液。

2.3.3 缺虎杖阴性样品溶液制备 按棒柄花叶清肝胶囊处方取缺虎杖的各味药材，按工艺制法制备缺虎杖的阴性样品，取0.3g，按照供“2.3.1”项下方法制备，即得缺虎杖的阴性样品溶液。

2.3.4 色谱条件及系统适用性 Intersil-C18柱( 4.6mm×250mm，5μm)；乙腈-水溶液(20∶80)为流动相；306nm作为检测波长；1.0mL/min流速；室温；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000。

2.3.5 标准曲线考察 分别精密吸取虎杖苷对照品储备液 0.5、1.0、2.0、4.0mL，分别置10mL量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，制成20.4mg/L、40.8mg/L、81.6mg/L、163.2mg/L虎杖苷对照品溶液，分别精密吸取20.4mg/L虎杖苷对照品溶液2.5、5、10μL及40.8mg/L、81.6mg/L、163.2mg/L虎杖苷对照品溶液各10μL，按“2.3.4”项下色谱条件分别进样，测定，计算，得回归方程为：Y=17137X+25921，r=0.9998。结果表明，虎杖苷进样浓度在5.1～163.2μg/mL之间与峰面积积分值线性关系

2.3.6 专属性试验 分别精密吸取“2.3.1～2.3.3”项下对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。结果阴性样品溶液在与对照色谱相同保留时间的位置上未显色谱峰，表明对被测成分无干扰。如图3所示。

2.3.7 精密度的考察 分别精密吸取按“2.3.1”项下方法制备的供试品溶液(批号20160601)和“2.3.2”项下对照品溶液各10μL，照“2.3.4”项下方法连续进样，测定峰面积值6次，对照品及供试品溶液中虎杖苷色谱峰峰面积RSD值分别为1.50%、1.28%。

2.3.8 稳定性的考察 取同一样品(批号20160601)，按“2.3.1”项下方法制备，于制备后0、4、8、12、24h，按照“2.3.4”项下方法分别测定峰面积，计算峰面积RSD值为 1.40%。表明供试品溶液在16 h内保持稳定。

2.3.9 重复性的考察 取同一批样品(批号20160601)，按“2.3.1”项下方法制备6份样品溶液，照“2.3.4”项下方法分别测定其峰面积，计算。结果测得虎杖苷含量为每粒0.783mg，RSD值为1.35%，说明本方法重复性好。

2.3.10 加样回收率试验 精密称取已知含量(每粒0.783mg)的样品(批号20160601)内容物约0.15g6份，分别置6个具塞锥形瓶中，精密加入408mg/L虎杖苷对照品储备液溶液0.72mL，按“2.3.1”项下的方法提取，按照“2.3.4”项下方法测定，计算加样回收率，结果见表1，虎杖苷平均回收率为98.8%，RSD为1.64%。

2.3.11 样品含量测定 取批号分别为20160601、20160602、20160603的样品各2份，按照“2.3.4”项下的方法，分别制备样品溶液，进行测定，虎杖苷含量分别为每粒0.718、0.736、0.730。

3 讨论

本文参考《广西医疗机构中药民族药制剂标准(第一卷)》质量标准起草说明细则的要求，对棒柄花叶清肝胶囊各药味进行摸索研究。应用TLC法对棒柄花叶进行鉴别，所用作对照的药材为广西壮族自治区食品药品检验所鉴定(批号150406)，但中检院暂无棒柄花叶对照药材提供，因此未收入标准正文。对处方中白花蛇舌草进行TLC鉴别[4]，结果在供试品色谱中与白花蛇舌草对照药材、齐墩果酸对照品相应的位置上，没有显相同颜色的斑点。故拟定标准正文中不采用。在虎杖(大黄素、大黄素甲醚)、黄芪的薄层实验中，均进行了系统适应性考察，结果展开条件不同的温度(10℃、25℃、35℃)、不同的湿度(35%、70%、90%)对正文拟定方法无明显影响。

表1 加样回收试验 (n=6)

(续表)

表1 加样回收试验 (n=6)

制剂质量标准中含量测定项下，曾考虑过测定棒柄花苷A(棒柄花叶)的含量。棒柄花苷A被视为棒柄花叶的质控指标[6]，也用于棒柄花叶最佳采收期的确定，在棒柄花叶的含量中最高可达0.149%[7]。但是棒柄花叶只能野外收集，没有市售。如果采用棒柄花苷A作为质控指标，经提纯检测后，方能作为对照品使用，制剂检验必然成本大增。故虽已有方法从棒柄花叶中制备高纯度棒柄花苷A[8]，考虑到本文是对医疗机构制剂进行质量控制研究，故暂未考虑对其开展。在虎杖苷(虎杖)的研究中，考察了乙醇、稀乙醇、30%乙醇作为提取溶剂，不同提取方法，超声、加热回流和索氏提取中虎杖苷的含量。结果表明稀乙醇25mL(比较了10、25、50mL)作为提取剂，超声处理30min(比较了15、30、45min)，效果最好，故选之。

本文建立了棒柄花叶清肝胶囊的薄层鉴定和含量测定，可收入棒柄花叶清肝胶囊质量标准中，作为该制剂的质量控制手段。

[1]陈小刚,赖茂祥,刘元,等. 一种治疗肝炎的药物及其配制方法[P]. 广西：CN1903273,2007-01-31.

[2]黄春英，谭跃，秦武海，等.棒柄花方联合西药治疗肝胆湿热型慢性乙型肝炎的临床疗效[J].中国民族民间医药,2017(7):122-134.

[3]广西壮族自治区食品药品监督管理局.广西壮族自治区壮药质量标准(第一卷)[M].南宁：广西科学技术出版社,2008:188．

[4]张颖,梁艺研,韦宁华,等. 壮医治疗肝炎的调查研究[J]. 中国民族民间医药,2014,23(2):6-7,9.

[5]杨贤军. 乙肝康颗粒质量标准的研究[J]. 湖南中医药导报,2002,8(7):385-386.

[6]刘布鸣,卢文杰,林霄,等. 反相高效液相色谱法测定棒柄花中反式-4-(1-丙烯基)苯酚-β-D-吡喃葡萄糖苷[J]. 分析测试学报,2006,12(3):98-99,102.

[7]陈小刚,覃兰芳,赖茂祥. 棒柄花叶中PPG含量的动态积累研究[J]. 广西科学,2010,17(2):141-143.

[8]刘元,刘布鸣,陈小刚,等. 高纯度棒柄花苷A的制备及其质量控制方法[P]. 广西：CN103145775A,2013-06-12.

Studies on Quality Control Standards of Zhuang Medicine Bangbinghuaye Qinggan Jiaonang

ZHANG Ying1，2LIU Yuan1，2SONG Zhizhao1，2WEN Zhiyun1，2WEI Wei1，2

1.Guangxi Institute for Chinese Medicine amp; Pharmaceutical Science, Nanning 530022，China；2.Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Standards, Nanning 530022，China

Objective To set up studies on quality control standards of Zhuang Medicine Bangbinghuaye qinggan jiaonang．Methods Polygonum Cuspidatum and Astragalus membranaceus were identified by TLC.The content of Polydatin was determined by HPLC.Results TLC spots of Polygonum Cuspidatum and Astragalus membranaceus were clear and negative without interference，which can be used as qualitative method． The calibration curves were linear in the range of 5.1～163.2μg for Polydatinr=0.9998, average recovery of Bergenin was 98.8%,RSDwas 1.64%(n=6). Conclusion The quality of Zhuang Medicine Bangbinghuaye qinggan jiaonang was effectively controlled by these quality standards.

Zhuang Medicine；Emodin；Emodin Nonomethyl Ether；Astragalus Membranaceus；Polydatin

R29

A

1007-8517(2017)20-0038-04

张颖(1986-)，女，汉族，本科，助理研究员，研究方向为质量标准与新产品开发。E-mail：zhying2010@qq.com

2017-09-07 编辑：穆丽华)