HPLC法测定湿迪胶囊中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量

王文静

河南中医药大学第三附属医院第一药剂科，河南 郑州 450000

HPLC法测定湿迪胶囊中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量

王文静

河南中医药大学第三附属医院第一药剂科，河南 郑州 450000

目的：采用HPLC法测定湿迪胶囊中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量。方法：采用Wondasil C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，以乙腈-0.033moL·L-1KH2PO4(磷酸调pH3.0，25∶75) 为流动相；流速为1.0 mL/min；检测波长270 nm；柱温30℃。结果：黄芩苷、盐酸小檗碱分别在4.50～226.31μg/mL、1.14～57.12μg/mL 范围内线性关系良好，相关系数均大于0.999；精密度、重复性及稳定性试验结果良好；黄芩苷和盐酸小檗碱的平均加样回收率分别为100.04%、99.80%，RSD分别为1.74%、2.01%。结论：HPLC测定湿迪胶囊中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量，其灵敏、准确，分离效果较好，可作为湿迪胶囊质量标准评价提供依据。

湿迪胶囊；黄芩苷；盐酸小檗碱；高效液相色谱法

湿迪处方是临床常用的中药经验方，对类风湿性关节炎及各种神经痛有显著疗效[1-2]。湿迪胶囊是对该验方进行二次开发后研制的新剂型，由黄柏、黄芩、蜈蚣3味中药组成，为硬胶囊，内容物为棕褐色颗粒，味微苦[3-4]。为确保用药的安全有效，必须对其质量进行严格控制，使严格按照处方及工艺要求生产。本研究采用高效液相色谱法对制剂的指标性成分盐酸小檗碱和黄芩苷进行含量测定，为湿迪胶囊质量控制方法的建立提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Shimadzu LC2010- HT高效液相色谱仪(日本岛津科技有限公司)；SartriusA210P天平(德国赛多利斯科学仪器有限公司)；AE240电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)；KH-250DB型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；EPED-20TF实验室级纯水机(南京易普易达科技发展有限公司)；真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。

1.2 试药 盐酸小檗碱对照品(批号：110713-201326，中国食品药品检定研究院)；黄芩苷对照品(批号：110715-201318，中国食品药品检定研究院)；湿迪胶囊(由黄柏、黄芩、蜈蚣3味中药材组成，中国药科大学中药制剂教研室制)。甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件Wondasil C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈-0.033moL/LKH2PO4(磷酸调pH3.0，25∶75) 为流动相；流速为1.0mL/min；检测波长270nm；柱温30℃。

2.2 混合对照品溶液的制备 分别精密称取黄芩苷对照品30.32mg和盐酸小檗碱对照品(在五氧化二磷干燥器中减压干燥12h)7.14mg，置于50mL容量瓶中，加入甲醇适量使超声溶解30min，定容，摇匀，制成含黄芩苷606.4μg/mL和盐酸小檗碱142.8μg/mL混合对照品溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取0.1g 胶囊内容物，研细，置于100mL容量瓶中，加适量甲醇，超声30min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，静置，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备 按处方比例，分别称取除黄芩之外的2味药材，按制备工艺制成缺黄芩阴性对照样品，按“2.3”项下同法制备阴性对照溶液；按处方比例分别称取除黄柏之外的2味药材，按制备工艺制成缺黄柏阴性对照样品，按供试品溶液制备项下同法制备阴性对照溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 专属性和系统适用性 分别取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按项下色谱条件测定，记录色谱图，考察在该色谱条件下的盐酸小檗碱和黄芩苷的分离度、理论塔板数、峰对称性等指标。分别取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按项下色谱条件测定，记录色谱图。以黄芩苷峰计，理论塔板数均不低于7000，色谱峰分离度良好。结果如图1。

2.5.2 线性关系 分别精密量取混合标准品溶液0.2、0.8、2、4、8、10mL，甲醇定容于25mL容量瓶中，摇匀，在上述色谱条件下进样，分别测定黄芩苷和盐酸小檗碱的峰面积，以峰面积(Y)、对照品浓度(X)进行线性回归。以峰面积(Y)，与对照品浓度(X)进行线性回归。结果线性关系方程：黄芩苷为Y1=19190X1+12567，R2=0.9999，在4.50～226.31μg/mL范围内线性关系良好；盐酸小檗碱为Y2=28373X2+1834.3，R2=1，在1.14～57.12μg/mL 范围内线性关系良好。

2.5.3 精密度 精密吸取混合对照品溶液(黄芩苷90.52μg/mL、盐酸小檗碱22.85μg/mL)10μL，连续进样6次。黄芩苷、盐酸小檗碱面积的RSD分别为0.19%、0.30%，精密度良好。

2.5.4 重复性 取同一批次胶囊内容物(批号20140423)6份，制成供试品溶液，精密吸取10μL，在上述色谱条件下进样，测定峰面积，根据回归方程计算样品含量。黄芩苷和盐酸小檗碱含量的RSD分别是2.96%、2.00%，重复性良好。

2.5.5 稳定性 精密称取0.1g胶囊内容物(研细)，分别于放置0、2、4、6、8h后进行测定，进样10μL，记录色谱峰面积。黄芩苷和盐酸小檗碱的峰面积RSD分别是2.53%和1.05%，稳定性良好。

2.5.6 加样回收率 取已知含量的胶囊内容物0.05g，置于100mL容量瓶中，取己知含量的浸膏粉样品0.03g，置于25mL容量瓶中，精密加入混合对照品(黄芩苷606.4μg/mL，盐酸小檗碱142.8μg/mL)，按供试品溶液制备方法项下操作，平行6份，按供试品溶液制备方法项下操作，平行6份，测定黄芩苷和盐酸小檗碱的峰面积，计算回收率。黄芩苷和盐酸小檗碱的平均加样回收率分别为100.04%、99.80%，RSD分别为1.74%、2.01%，表明本实验回收率良好，该方法能较好地满足含量测定要求。见表1。

表1 黄芩苷加样回收率试验结果 (n=6)

表2 盐酸小檗碱加样回收率试验结果 (n=6)

2.6 含量测定 分别称取三批次样品(批号：20140421、20140421、2014042)，按上述方法制备供试品溶液，精密吸取10μL，进样，测定峰面积，采用外标法计算含量，并计算平均值，每个批号分别测定3次。3批号制剂样品，如含量测定项下方法进行测定，由外标法计算含量，见表3。结果表明3批湿迪胶囊中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量差异符合质量要求。

表3 样品含量测定结果

3 讨论

湿迪处方的有效成分及有效部位尚不明确，因此选用多个指标成分的含量对胶囊质量进行控制。实验分别以黄柏中的盐酸小檗碱[5-6]、黄芩中的黄芩苷[7-8]作为指标性成分，通过对流动相种类、比例的优化，建立了高效液相色谱法同时测定黄芩苷和盐酸小檗碱的含量，并进行了方法学考察。在对波长选择中，黄芩苷最大吸收波长为275nm，盐酸小檗碱最大吸收波长为265nm，两者在270nm处有等吸收点，实验选择270nm作为检测波长，两者峰分离度较好、基线平直、灵敏度较高。在流动相系统的考察中，通过对比各流动相系统发现，乙腈-水系统效果较为理想。采用等度洗脱时，既能有效地分离黄芩苷和盐酸小檗碱峰与其他峰，洗脱操作简单，可保证样品组分达到基线分离，能较好对黄芩苷和盐酸小檗碱进行定性和定量，系统适用性较好。在流动相乙腈-水系统中，各峰形不是很好，对称因子未全部达到要求，故考察了流动相pH的影响，结果发现，采用KH2PO4(磷酸调pH 3.0)溶液，分离效果较好，且各峰的对称因子均在0.95～1.05之间，因此，确定乙腈-0.033moL/LKH2PO4(磷酸调pH 3.0，25∶75) 为流动相。该测定方法专属性强，重现性好，阴性对照无干扰，可以作为新制剂质量控制的方法。

本研究以黄芩苷和盐酸小檗碱为指标，建立了HPLC测定湿迪胶囊中黄芩苷和盐酸小檗碱的方法。结果表明，湿迪胶囊中黄芩苷含量不得少于5.0mg/粒，盐酸小檗碱含量不得少于9.0mg/粒。本方法方法合理准确、简单、灵敏度高，数据真实可靠，符合药典HPLC法的含量测定要求，有效保证了制剂质量，可作为湿迪胶囊质量标准评价提供依据。

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R285

A

1007-8517(2017)20-0021-03

王文静(1989-)，女，汉族，硕士研究生，中药调剂员，研究方向为中药及中药制剂研究。E-mail: wangwenjing8949@163.com

2017-08-29 编辑：穆丽华)