匹多莫德治疗小儿支原体肺炎的疗效及对Foxp3基因表达的影响

潘 娜，崔亚琦，焦黎旭

（河南省郑州市妇幼保健院药剂科，河南 郑州 450002）

匹多莫德治疗小儿支原体肺炎的疗效及对Foxp3基因表达的影响

潘 娜，崔亚琦，焦黎旭

（河南省郑州市妇幼保健院药剂科，河南 郑州 450002）

目的 观察匹多莫德治疗小儿支原体肺炎的疗效及对Foxp3基因表达的影响。方法 选取2016年1月至12月收治的支原体肺炎患儿112例，采用随机数字表法分为对照组和观察组，各56例。对照组给予常规治疗＋阿奇霉素治疗，观察组加用匹多莫德治疗，治疗30 d后比较疗效。另取该院健康体检儿童志愿者50例作为正常组。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法监测3组研究对象的Foxp3基因表达，采用流式细胞仪检测调节性T细胞水平。结果 治疗30 d后，观察组总有效率为92.86%，明显高于对照组的82.14%（P＜0.05）；治疗前，观察组患儿的Foxp3基因表达和Treg细胞比例与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），但均低于正常组儿童（P＜0.05）；治疗后，两组患儿的Foxp3基因表达与Treg细胞比例均较治疗前有所提高（P＜0.05），观察组患儿升幅明显高于对照组（P＜0.05）。结论 匹多莫德治疗支原体肺炎疗效显著，且能显著提高患儿的Foxp3基因表达与Treg细胞比例，增强免疫力。

匹多莫德；小儿；支原体肺炎；Foxp3基因；疗效

支原体肺炎是儿童最常见的呼吸道感染性疾病，每隔4～6年会出现区域性流行[1]，在非流行年间占小儿呼吸道感染疾病的10% ～20%，流行年份则高达30%[2]。相关研究表明，本病患儿伴有机体免疫调节功能紊乱[3]。因此，越来越多的学者开始关注免疫功能紊乱在本病发病机制中的作用，希望以此为靶点对其进行治疗。匹多莫德为免疫调节剂，多用于免疫力低下患者预防急性感染。本研究中应用匹多莫德治疗支原体肺炎，观察了疗效及对Foxp3基因表达的影响。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入标准：符合《儿童肺炎支原体肺炎诊治专家共识（2015年版）》[4]中儿童支原体肺炎的相关诊断标准；酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清肺炎支原体免疫球蛋白M(MP－IgM)均为阳性；年龄3～9岁。家属对本研究知情并签署知情同意书，本研究经过本院医学伦理委员会通过。

排除标准：心、肝、肾等脏器病变；其他急、慢性感染性疾病；激素或免疫调节剂使用史；对相关药物过敏。

病例选择与分组：选取2016年1月至12月我院呼吸内科收治的支原体肺炎患儿112例，其中男69例，女43例，采用随机数字表法分为对照组和观察组，各56例；另取医院健康体检儿童志愿者50例，作为正常组，其中男31例，女19例。3组对象一般资料比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性，详见表 1。

表1 3组对象一般资料比较

1.2 仪器与试药

OD260／280核酸定量分析仪（Pharmacia公司）；PCR仪（PE公司）；FACS Calibur流式细胞仪（美国BD公司）。PCR引物由上海生工生物技术有限公司合成，Foxp3上游引物为 5′－ACAGCACATTCCCAGAGTTCCT－3′，下游引物为 5′－TCTCCACCCGCACAAAGCA－3′；GADPH 上游引物为 5′－ CCCATCACCATCTTCCAG －3′，下游引物为 5′－ ATGACCTTGCCCACAGC －3′；Trizol（Invitrogen 公 司 ）；逆 转 录 盒 （Fermentas 公 司 ）；50bpDNAladder（北京天根生物技术公司）；Foxp3抗体（eBioscience公司）；EnVision 两步法试剂盒（Dako公司）；FITC －CD4和 PE －CD25抗体（Invitrogen公司）。

1.3 方法

治疗方法：两组患者均给予退热、止咳、化痰等常规治疗。对照组患儿在常规治疗基础上给予阿奇霉素注射液（湖北潜江制药股份有限公司，国药准字H20050648，规格为每支 2 mL ∶0.25 g）20 mg／kg(加入 250 mL 0.9%氯化钠注射液静脉滴注)，每日1次，5 d为1个疗程，治疗1～3个疗程（视患儿情况而定）；症状缓解后改用口服阿奇霉素颗粒10 mg／kg，每日1次，连用3 d。观察组患儿在对照组治疗基础上给予匹多莫德口服液（意大利多帕药业有限公司，进口药品注册证号H20150635，规格为每支400 mg）口服，每次400 mg，每日2次，连用2周后改为每次400 mg，每日1次，共服用4周。

Foxp3基因表达荧光定量PCR检测：分别留取3组观察对象入组前与治疗结束后的静脉血1 mL，用RNA提取与反转录试剂盒，反转录得cDNA第一链；荧光定量检测试剂盒检测Foxp3基因表达，反应条件为94℃60 s，94 ℃ 30 s，61 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，重复 30 个循环。

调节性T细胞（Treg）的流式细胞仪检测：分别留取3组观察对象入组前与治疗结束后的静脉血5 mL，裂解红细胞，用磷酸盐缓冲液(PBS)，洗涤2次，用0.4 mL PBS悬浮细胞，加入 FITC－CD4和 PE－CD25抗体各 10 μL，避光染色30 min，采用流式细胞仪检测。

1.4 疗效判定标准[5]

痊愈：临床症状及体征消失，血常规、胸部X线摄片显示正常；有效：临床症状及体征好转，胸部X线摄片检查显示病灶大部分吸收；无效，临床症状及体征无改善，甚至加重，肺部体征无改善。总有效＝痊愈＋有效。Foxp3基因表达采用 评估，△Ct值＝目的基因Ct值－内参基因 Ct值[6]。Treg用流式细胞仪检测，FITC－CD4和PE－CD25双阳性细胞。

1.5 统计学处理

2 结果

结果见表2、表3和图1。

表2 观察组及对照组患儿临床疗效比较[例（%），n＝56]

图1 Treg细胞的流式细胞仪检测结果

3 讨论

支原体感染临床表现多样，除肺部炎症外，还可引发多种肺外严重并发症，严重威胁患儿的身心健康。支原体感染机体，不仅与微生物的入侵有关，还与机体免疫力的降低有关，自身免疫机制在支原体肺炎发生、发展过程中发挥了非常重要的作用。Treg是体内存在的一群具有免疫调节作用的T细胞亚群，具有免疫无反应性和免疫抑制性，在维持免疫系统稳态及免疫耐受方面起着非常重要的作用[7]。Foxp3为转录调节因子，是Treg细胞特异性的分子标记，叉头／翼状螺旋结构是其特征性结构，而此结构域中的蛋白质属DNA结合因子家族成员，具有逆转录作用，主要表达于 CD4＋、CD25＋的Treg细胞[8]。机体对自身抗原的免疫耐受是一个严密调控的过程，相关研究表明，在胸腺中产生的CD4＋T细胞亚群中有些可持续表达CD25＋分子，以维持机体免疫耐受，且在CD4＋T细胞阶段开始分化时，胸腺上皮细胞提呈的某些抗原能诱导Foxp3分子的表达[9]。本研究结果显示，支原体肺炎患儿入组前，Foxp3基因表达与Treg细胞比例均低于正常儿童，因此证明支原体患儿存在自身免疫功能调节障碍。

阿奇霉素是第2代大环内酯类抗菌药物，是目前临床治疗支原体肺炎的常用药物[10]，具有起效快、作用时间长等特点。接受阿奇霉素治疗后，患者体温恢复正常、咳嗽消失、肺部罗音消失，但仅能改善患者的临床表现，患者机体自身免疫调节功能并未改善[11]。匹多莫德是一种合成的具有免疫活性的二肽类分子，不仅可促进非特异性免疫反应，还可促进特异性免疫反应[12]。动物研究证明，匹多莫德可增加正常及免疫功能低下小鼠吞噬细胞的吞噬能力和抗体分泌细胞的抗体产生能力，从而提高免疫力[13]；此外，还可通过刺激白细胞介素1和干扰素促进细胞免疫反应，增强机体免疫功能[14]。本研究结果显示，加用匹多莫德治疗支原体肺炎总有效率显著高于单用阿奇霉素，且能有效改善患者体内Foxp3基因表达与Treg细胞比例。

综上所述，匹多莫德治疗支原体肺炎疗效显著，且能显著提高患儿Foxp3基因表达与Treg细胞比例，提高患儿免疫力，值得临床推广。

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Clinical Effect of Pidotimod in Treating Mycoplasma Pneumonia and Its Effect on Expression of Foxp3 Gene

Pan Na， Cui Yaqi， Jiao Lixu
（Department of Pharmacy，Women ＆ Infants Hospital of Zhengzhou，Zhengzhou，Henan，China 450002）

Objective To observe the clinical effect of pidotimod for treating mycoplasma pneumonia and its effect on the expression of Foxp3 gene.Methods Totally 112 children patients with mycoplasma pneumonia admitted to our hospital from January to December in 2016 were selected and divided into the control group and the observation group by random number table method，56 cases in each group.The control group was given conventional treatment and azithromycin，on this basis，the observation group was given pidotimod.After 30 d of treatment，the clinical effect between the two groups was compared.Another 50 healthy children volunteers were selected as the normal group，and the expression of Foxp3 gene was monitored by fluorescence quantitative PCR in the three groups.The regulatory T cells were detected by flow cytometry（FCM）.Results After 30 d of treatment，the total effective rate of the observation group was 92.86% ，which was significantly higher than 82.14% of the control group （ P ＜ 0.05）.Before treatment，there was no significant difference in the expression of Foxp3 gene and the proportion of Treg cells between the observation group and the control group（P ＞ 0.05），but those in the two groups were significantly lower than those in the normal group （P ＜ 0.05）.After treatment，the increase of the expression of Foxp3 geneand theproportion of Treg cellsin the observation group and the controlgroup was significantly higher than before treatment，and that in the observation group was significantly higher than that in the control group（P ＜ 0.05）.Conclusion Pidomorph for treating children with mycoplasma pneumonia has good effect，it can significantly improve the expression of Foxp3 gene and the proportion of Treg cells and enhance immunity，which is worthy of clinical promotion.

pomodomide；chidren；mycoplasma pneumonia；Foxp3 gene；curative effect

R965.2；R979.5

A

1006－4931(2017)22－0012－03

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.22.004

潘娜（1977－），女，大学本科，主管中药师，研究方向为医院药学，（电子信箱）304068594＠qq.com。

2017－07－10)