耐亚胺培南肺炎克雷伯菌耐药基因的检测分析

季艳艳 杨正贵 张宏艳

耐亚胺培南肺炎克雷伯菌耐药基因的检测分析

季艳艳 杨正贵 张宏艳

目的分析耐亚胺培南肺炎克雷伯耐药基因检测效果，并对耐药机制进行分析。方法选取近3年分离出的260株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌，采用新型耐药基因检查方法，对药物浓度进行分析。结果Hodge检查结果显示，260株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌中240株检查结果为阳性，20株为阴性，阳性率为92.3%。对β-内酰胺酶基因分析显示，有225株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌产生KPC-2型碳青霉烯酶，其余耐亚胺培南肺炎克雷伯菌扩增出SHV型β-内酰胺酶基因。结论耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的衍生因素比较复杂，在实践阶段需要做好耐药基因检查工作，只有做好检测工作，才能确定病菌类型。

耐亚胺培南肺炎克雷伯菌；耐药性；基因检测

作者单位：553536 六盘水，贵州省盘江煤电投资控股集团公司总医院检验科

肺炎克雷伯菌是临床研究中常见的一种致病菌类型，其耐药性逐渐提高。碳青霉烯类药物在治疗革兰氏阴性菌引起的各种感染中有重要的作用[1]。耐亚胺培南肺炎克雷伯耐药基因检测是当前临床研究的重点所在，医护人员需要了解耐药性相关工作，按照要求进行检测和分析，提高检测准确率[2]。为了分析耐亚胺培南肺炎克雷伯菌耐药基因检测效果，对耐药机制进行分析，本研究选取分离出的260株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌，采用新型耐药基因检查方法，对药物浓度进行分析。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 选取近3年分离出的260株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌，采用新型耐药基因检查方法，对药物浓度进行分析。

1.2 菌株测定 采用本院现有的鉴定方式进行，掌握药敏实验流程，按照菌株鉴定和药物敏感要求进行测定。

1.3 细菌基因模板检查 根据细菌基因模板检查方法的具体要求，对革兰氏阴性杆菌检测采用复合板条（BDPhoe-nixTMNMIC/ID-4）进行菌株鉴定及药物敏感试验。此外需要进行模板制备，采用OMEGA-bio-tek公司生产的小量质粒试剂盒进行抽取和检查，质粒最终设定为50 µL。

1.4 耐药性检查 耐药性检查以PCR为主，检查方式以头孢素酶和超光谱β-内酰胺酶为主，耐药基因检查结果可直接对检测效果产生影响，因此必须按照流程进行。此外在整合子检查阶段，采用PCR方式，根据序列的应用要求进行。避免出现产物测试不合理或者其他现象。根据产物含量以及指标具体要求，可采用直接测试的方式，所测定的序列需要和数据库保持一致。

2 结果

2.1 Hodge检查结果 Hodge检查结果显示，260株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌中240例检查结果为阳性，20例为阴性，阳性率为92.3%。

2.2 β-内酰胺酶基因检查结果 β-内酰胺酶基因检查结果显示，有225株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌产生KPC-2型碳青霉烯酶，其余耐亚胺培南肺炎克雷伯菌扩增出SHV型β-内酰胺酶基因，见图1。

2.3 敏感性分析 对耐药率分析显示，抗菌药物中头孢西丁、氨曲南、头孢他啶、头孢曲松的耐药率无明显变化，见表1。

图1 KPC-2实验菌株分析

表1 耐药性分析

3 讨论

耐亚胺培南肺炎克雷伯菌属于有条件性的致病菌，老年人比较常见，耐药菌株比较多，只有做好耐药性检查工作，才能满足实验检查要求[3]。

部分患者病情比较严重，机体免疫力低下，抗感染能力差，患者接受较多的治疗和监护，在治疗阶段大量应用抗生素，对患者自身有一定的消极影响[4]。此外重症监护室采用的是封闭或者半封闭管理模式，室内消毒存在问题，感染几率比较高，对患者产生直接影响。医院感染的发生几率较高，产生耐药菌的机会也高于普通病房，在检查过程中需要做好患者病情分析工作，合理采取药物进行治疗。碳青霉烯类抗菌药物在临床研究中有重要的作用，也被临床研究人员认为是治疗多重耐药菌的最后一道防线，随着临床用药的逐渐深入，在药物检查过程中需要以抗菌药物的具体检查作为基础，保证耐药性的有效性[5]。

为了避免出现耐药性检查不合理或其他现象，需要做好抑制剂的应用工作，以β-内酰胺药物为主，对转到普通病房的患者进行细菌检查，分子生物学检查可知，在药物机制判断过程中，需要做好布局工作，保证病房通风，避免出现感染的现象[6,7]。

本研究中，Hodge检查结果显示，260株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌中240例检查结果为阳性，20例为阴性，阳性率为92.3%。本研究中，β-内酰胺酶基因检查结果显示，有225株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌产生KPC-2型碳青霉烯酶，其余耐亚胺培南肺炎克雷伯菌扩增出SHV型β-内酰胺酶基因。结果证实耐药性比较特殊，需要医护人员提前掌握细菌类型，根据检查流程进行，保证整体检测的合理性和准确性。说明在实践检查中对患者采用基因检查方式，可提升检查的准确性，由于数据本身不具有同源性，需要进一步证实。

1 曹慧玲,舒钊彻,杨琳,等.亚胺培南与舒巴坦联合应用对多重耐药肺炎克雷伯菌的体外试验研究.实用医学杂志,2016,32(3): 475-478.

2 冯福英,洪宇,杨湘越,等.耐亚胺培南肺炎克雷伯菌耐药基因检测与分子流行病学研究.中华医院感染学杂志,2016,26(12): 2650-2653.

3 豆清娅,邹明祥,李春辉,等.耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的耐药机制研究.中华医院感染学杂志,2016,26(13): 2906-2909.

4 徐祥,欧琴,李蓓.1株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌分型、耐药机制及毒力研究.临床检验杂志,2013,31(2): 155-157.

5 王冬国,张丽婷,戚永萧,等.老年患者多药耐药肺炎克雷伯菌的耐药性分析与耐药基因检测.中华医院感染学杂志,2011,21(12): 2392-2395.

6 阴晴,吴琳,成静,等.一株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌耐药的分子机制探讨.江苏医药,2011,37(11): 1301-1304.

7 倪桂莲,王冬国.神经内科住院患者感染肺炎克雷伯菌耐药性分析与产ESBLs酶耐药基因检测.中华医院感染学杂志,2011,21(16): 3326-3328.

Detection and analysis ofKlebsiellaresistance gene in imipenem-resistant pneumonia

Yanyan JI,Zhenggui YANG,Hongyan ZHANG
Department of Clinical Laboratory,Panjiang Coal and Electricity Investment Holding Corporation General Hospital,Liupanshui 553536,China

ObjectiveTo analyze the detection effect ofKlebsiellaresistance gene in imipenem-resistant pneumonia.MethodsIn this study,260 strains ofKlebsiellapneumoniae were selected as the research object,and the drug concentrations were analyzed by the new drug resistance method.ResultsThe results of Hodge examination showed that 240 cases inhibited positive results and 20 cases inhibited negative results and the positive rate was 92.3%.β-lactamase gene analysis showed that 225 strains of imipenem-resistantKlebsiellapneumoniae produced KPC-2 carbapenemase,and others could amplify SHV type β-lactamase gene.ConclusionThe factors of resistance to imipenem pneumoniaKlebsiellawere more complicated.In the practical stage need,drug resistance check work should be paid more attention.

Imipenem-resistant pneumoniaKlebsiella; Drug resistance; Gene detection