TGF-β和ERα与Ib期-IIa期宫颈上皮癌临床病理指标及预后的关系

孙雯 徐文茂 尹娟

TGF-β和ERα与Ib期-IIa期宫颈上皮癌临床病理指标及预后的关系

孙雯 徐文茂 尹娟

目的Ib-IIa级别的宫颈癌发病率约占全部宫颈癌患者的60%-70%，本研究旨在探讨TGF-β和ERα与宫颈上皮癌临床病理及预后的关系。方法应用免疫组化技术对132例随访资料完整的宫颈癌标本进行TGF-β和ERα检测，同时，以20例正常宫颈组织、20例慢性宫颈炎症组织作为对照分析其表达与宫颈癌临床指标以及预后的关系。结果与正常宫颈组织以及慢性炎症宫颈组织相比，TGF-β和ERα在宫颈癌组织中表达明显上升（P＜0.05）。TGF-β和ERα的表达与宫颈上皮癌的发生年龄、肿瘤直径等一般临床病理因素无相关（P＞0.05），而与患者的HPV感染史、肿瘤的病理类型、组织学分级、侵袭深度、淋巴结转移、复发、转移密切相关，TGF-β和ERα双阳性表达的肿瘤复发转移率、病理学分级、淋巴结转移等明显高于阴性表达者（P＜0.01）；TGF-β和ERα表达在宫颈癌患者组织中明显增高（P＜0.05）；Cox比例风险模型多因素分析表明，TGF-β和ERα是影响宫颈癌预后的重要独立因素，TGF-β和ERα表达双阳性的宫颈癌患者预后差。结论测定TGF-β和ERα的表达对临床上Ib-IIa级别宫颈癌患者的诊断、预后以及指导治疗有较大的帮助。

宫颈癌；转化生长因子β；雌激素受体α；预后

作者单位：100054 北京，北京斯普林格医学研究院分子医学研究所

近几年来，宫颈腺癌的发病率不断提高，其中Ib-IIa级别的肿瘤比例也在不断增加，约占其中的60%-70%[1]。而且由于腺癌对化疗的敏感性较鳞癌略低，因此改善Ib-IIa级别的肿瘤疗效对提高宫颈腺癌的生存率具有极高的意义。在宫颈腺癌预后的影响因素中，如淋巴转移、旁侵犯等，对制定更好的宫颈腺癌治疗方案具有积极的意义[2]。通过临床观察，我们发现一些宫颈腺癌患者具有同样的临床预后，但存在不同的临床病理学指标[3]。由于肿瘤进程中存在着多种基因参与，在患者中也存在着许多个体差异。因此，通过临床病理学诊断指标预测肿瘤预后也存在着一定的局限性[4]。随着分子医学的不断进步，分子预后指标将成为潜在的肿瘤预后生物学指标。近期的研究认为宫颈腺癌是一类激素依赖性的肿瘤，并且许多实验也明确了雌激素受体和宫颈腺癌之间的联系。同样，TGF-β也被认为是子宫颈的人类乳头瘤病毒16感染和上皮肿瘤的预后指标[5,6]。Stoica等[7]发现，TGF-β能够诱导乳腺癌细胞中ER的表达。但是，激素与宫颈腺癌的具体机制尚不清楚。目前，我们检测了宫颈腺癌患者中TGF-β和ER蛋白的表达水平，并分析了临床病理学指标与肿瘤组织中TGF-β和ER的关系，明确了TGF-β和ER能够作为一种潜在的临床宫颈腺癌预后指标。

1 材料和方法

1.1 病例收集 我们收集132例Ib期-IIa期宫颈腺癌患者的石蜡切片以及临床病历资料。患者年龄33岁-70岁，平均年龄43.6岁。根据国际妇产科联盟（Federation International of Gynecology and Obstetrics,FIGO）2000标准，Ib期病例组包括52例患者，IIa期病例组包括80例病例。上述132例病例均为腺癌。78例患者的肿瘤直径＞4 cm，27例＜4 cm。60例患者的宫颈浸润深度＞2/3，72例≤2/3。19例患者存在阴道复发，94例患者未见复发。70例患者存在淋巴转移，62例患者未见淋巴结转移。所有实验均得到患者同意，并通过伦理委员会验证。

1.2 入选标准 所有患者均接受适当的化疗和放疗。对患者从接受手术起进行随访，随访时间26个月-99个月，平均随访时间约61个月。20例正常宫颈标本作为对照组。

1.3 试剂及抗体 TGF-β单克隆抗体、ER单克隆抗体、DAB显色试剂盒均购自美国Abcam公司。阳性结果判断：TGF-β和ER主要在细胞质着色，呈棕色弥漫或颗粒状。根据切片中阳性细胞占全部细胞的比例分为：TGF-β阳性组、ER阳性组、TGF-β与ER双阳性组、TGF-β与ER双阴性组。结果判断由两名病理医师独立进行。

1.4 统计学方法 所有数据统计均以SPSS 7.0统计软件包完成。两组间率的比较用χ2检验或精确概率法，等级资料用两样本比较的秩和检验，转移复发危险因素用Cox比例风险模型分析。以P＜0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 TGF-β、ERα在不同的宫颈上皮中表达不同 我们首先通过免疫组化染色观察TGF-β以及ERα在三组中的表达阳性情况，结果表明，TGF-β在正常宫颈、慢性炎症宫颈以及宫颈癌中上皮细胞的表达阳性率分别为35.00%、55.00%和71.21%，均有明显的统计学差异（P＜0.01）。同时，ERα在正常宫颈、慢性炎症宫颈以及宫颈癌上皮中的表达阳性率分别为35.00%、50.00%和68.18%，提示有统计学差异（P＜0.05）。上述结果表明，在慢性炎症以及宫颈癌中，宫颈上皮细胞中的TGF-β与ERα的表达量均出现明显增高，其中又以宫颈癌增高更为明显，提示TGF-β、ERα与宫颈癌的发生发展存在相关性，见表1。随后，通过对免疫组化染色结果发现，TGF-β以及ERα在正常以及慢性炎症的宫颈上皮细胞中表达量极低，而在宫颈上皮肿瘤中表达量则为强阳性，见图1、图2。

2.2 TGF-β与ERα的表达量与临床指标存在相关性 随后，我们又将TGF-β、ERα的蛋白质表达情况与患者的HPV感染史、侵袭深度、淋巴结转移以及复发情况之间的关系进行了分析，结果发现，上述临床指标均与两种蛋白的表达量存在相关性，有统计学差异（P＜0.05），见表2。但是，发病年龄以及肿瘤直径则与两种蛋白质表达情况无明显联系。进一步的分析我们还发现，随着TGF-β、ERα的蛋白表达不断上升，上述临床指标也出现了恶性程度提高的现象。随后，我们还对TGF-β、ERα两种蛋白质的表达情况与患者生存期进行了分析，从生存曲线中，我们发现，TGF-β与ERα双阴性组的生存期显著高于双阳性以及单阳性组，具有统计学差异（P＜0.01），而TGF-β单阳性组或ERα单阳性组以及双阳性组之间则未见明显差异，见图3。同样的，双阴性组患者的生存率也显著高于其他三组，但在其他三组之间则未见显著性差异。Cox回归分析也表明，ERα阳性、TGF-β阳性或者双阳性均能够显著性的增加死亡危险，见表3。多变量分析同样表面，HPV感染史以及淋巴结转移显著的增加死亡风险，具有HPV感染史的患者死亡率较阴性组提高了1.698倍（HR=1.698,95%CI: 1.089-2.648）。而存在淋巴结转移的患者其死亡率提高了1.650倍（HR=1.650,95%CI:1.070-2.544）。

3 讨论

过去的大量研究已经表明，TGF-β在宫颈上皮恶性肿瘤中发挥着重要的作用。TGF-β在宫颈癌中能够促进肿瘤细胞增殖，对肿瘤细胞起到一定的保护作用。与这种功能相对应的，许多临床研究也表明，TGF-β在宫颈癌中出现高表达的情况[8]。我们的研究表明，相较于正常组织，肿瘤组织中的TGF-β表达量明显上升，与之前的研究结果相互印证，同时也再次说明了雌激素分泌水平的改变是宫颈癌癌变的起始环节。

表1 不同组织中TGF-β与ERα的表达水平

图1 TGF-β在不同组织中的表达水平

图2 ERα在不同组织中的表达水平

表2 TGF-β与ERα表达水平与临床肿瘤指标的关系

表3 TGF-β与ERα与宫颈癌预后的关系

图3 TGF-β与ERα表达水平与宫颈癌预后的关系

同时，本研究还首次指出，TGF-β与ERα能够作为宫颈上皮恶性肿瘤的独立因素，并且对宫颈癌的生存期、侵袭深度和淋巴结转移等均表现出明确的相关性[9-11]。通过对这两种蛋白质表达量的检测，能够对宫颈上皮恶性肿瘤的预后做出一定的预测，并预判患者的复发情况。本研究发现，与正常宫颈组织以及慢性炎症宫颈组织相比，TGF-β和ERα在宫颈癌组织中表达明显上升（P＜0.05）。TGF-β和ERα的表达与宫颈上皮癌的发生年龄、肿瘤直径等一般临床病理因素无相关（P＞0.05），而与患者的HPV感染史、肿瘤的病理类型、组织学分级、侵袭深度、淋巴结转移、复发、转移密切相关，TGF-β和ERα双阳性表达的肿瘤复发转移率、病理学分级、淋巴结转移等明显高于阴性表达者（P＜0.01）；TGF-β和ERα表达在宫颈癌患者组织中明显增高（P＜0.05）；Cox比例风险模型多因素分析表明，TGF-β和ERα是影响宫颈癌预后的重要独立因素，TGF-β和ERα表达双阳性的宫颈癌患者预后差。通过本研究证明，TGF-β以及ERα在宫颈癌患者中的表达量能够成为一类可靠的宫颈癌预后的分子标记物，同时，也可能成为宫颈癌复发的潜在治疗靶点。

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6 Singh H,Jain M,Mittal B.Role of TGF-beta1 (-509C＞T)promoter polymorphism in susceptibility to cervical cancer.Oncol Res,2009,18(1): 41-45.

7 Bhogal RK,Stoica CM,McGaha TL,et al.Molecular aspects of regulation of collagen gene expression in fibrosis.J Clin Immunol,2005,25(6): 592-603.

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Expression of TGF-β and ER protein in stage Ib-IIa cervical adenocarcinoma patients and its relationship with prognosis

Wen SUN,Wenmao XU,Juan YIN
Institute of Molecular Medicine,Springer Medical Research Institute,Beijing 100054,China

ObjectiveThe incidence of stage Ib-IIa accounts about 60% to 70% of all cervical adenocarcinoma patients.Our study aims to investigate the prognostic relationship of protein estrogen receptor alpha (ERα)and transforming growth factor beta (TGF-β) in cervical adenocarcinoma patients.MethodsWe used immunohistochemistry to detect ERα and TGF-β in carcinomas and incisal margins of 132 cases with cervical adenocarcinoma,20 cases with normal cervix,and 20 cases with chronic cervicitis.Uni- and multivariate analysis was applied to evaluate the prognostic significance of TGF-β and ERα in carcinomas.ResultsThe results indicated that the positive expression of TGF-β in carcinomas was 71.21%,significantly higher compared to that in thenormal cervix (35%)and chronic cervicitis (55%) (χ2=8.901,P=0.012).Similarly,the positive expression of ERα in the carcinomas was 68.18%,significantly higher compared to the normal cervix (35%) and chronic cervicitis (50%) (χ2=7.693,P=0.021).Both TGF-β and ERα in the carcinomas were associated with the vaginal recurrence,infection of HPV,depth of infiltration,and lymphatic metastasis (P＜0.05).The conjugation of TGF-β and ERα was an independent prognostic factor for cervical adenocarcinoma.Survival curve showed that the positive TGF-β1 and ERα indicated a short life time of patient with cervical adenocarcinoma.Conclusions The expression of TGF-β and ERα protein in the carcinomas had a significant prognostic value in a patient of stage Ib-IIa in cervical adenocarcinoma.

Cervical adenocarcinoma; TGF-β; ERα; Prognosis